mir141对骨科止血带所致缺血再灌注损伤的氧化应激和炎症因子的影响

王 涛

（南京中医药大学附属南京市中西医结合医院麻醉科，江苏 南京 210014）

缺血再灌注损伤（Ischemia-reperfusion injury，IRI）是指在缺血后一段时间血液回到组织后引起的组织损伤[1]。骨科止血带的应用可以减少肢体手术术中失血，保持手术视野，然而其应用也是导致IRI的重要原因。骨骼肌对缺血性改变非常敏感，临床评估不足以衡量止血带引起的缺血性组织损伤程度。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类短的，保守的，单链非编码的RNAs，通过抑制mRNA翻译或促进mRNA降解而作为靶基因表达的负调控因子[2]。MiRNA逐渐被认为与缺血再灌注损伤有关，本研究拟观察miR-141对骨科止血带所致缺血再灌注损伤的氧化应激和炎症因子的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选择2016年1月～2017年12月XXX医院骨科收治的下肢手术患者80例为研究对象，入组标准：无椎管内麻醉禁忌，无肝、肾、心脏等主要脏器功能异常，无糖尿病，无恶性肿瘤，无结核、肝炎等传染性疾病。所有患者及其家属均知情同意，并由本医院医学伦理委员会批准实施此研究。

1.2 麻醉方法

患者术前常规禁食、禁水，以鼻导管2 L/min吸氧并及时建立外周静脉通过，监测心电图、脉搏血氧饱和度、血压及心率。以两点穿刺腰硬联合麻醉，感觉平面固定于T10以下，20 G留置针行股静脉穿刺并固定，肝素封管。患肢向近心端驱血后于大腿中上1/3处放置止血带，压力为术前收缩压加100 mmHg，时间60 min。术中以10 ml/（kg·h）复方氯化钠注射液进行补液。

1.3 标本采集及观察指标

止血带使用前后15 min抽取手术侧静脉血，离心获得血清，以ELISA法测定患者血清超氧化物气化酶（superoxide dismutase，SOD）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及白介素-8（interleukin-8，IL-8）；以Trizol法提取总RNA，逆转录为cDNA后以Real-time PCR检测血清miR-141表达水平，U6为内参。引物序列：miRNA-141上游引物5'-AAGGATCACCCGTAATCCG-3'，下游引物5'-GTGCAGGTCCGGGTATTC-3'；U6：上游引物5'-GCGCGTCGTGAAGCGTTC-3'，下游引物5'-GTGCAGGGTCCGAG GT-3'。反应条件：95℃，3 min；40个PCR循环（95℃，15 s；55℃，20 s；72℃，20 s；83.5℃，15 s）。95℃，15 s；60℃，1 min；95℃，15 s；绘制熔解曲线，以2-△△CT值法进行相对定量分析。以患者血清miR-141相对表达中位数为临界值，分为miR-141高表达组39例及低表达组41例，两组患者年龄、性别等一般资料无统计学差异（P＞0.05）。

1.4 统计学处理

数据以SPSS 20.0进行统计，计量资料以“±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 止血带使用前后miR-141表达

止血带使用后，患者血清miR-141相对表达明显上升[（1.314±0.091）vs（0.963±0.084）]，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 miR-141与氧化应激标志物SOD的关系

止血带使用后，患者血清S O D水平明显降低（122.1±20.1） U/mLvs（182.1±18.3） U/mL（P＜0.05）。miR-141高表达组患者SOD表达明显低于miR-141低表达组患者（116.6±20.3）U/mLvs（131.2±20.5）U/mL（P＜0.05）。Spearman相关分析提示miR-141表达与SOD表达负相关（r=-0.329，P=0.000）。

2.3 miR-141与炎症因子TNF-α及IL-8的关系

止血带使用后，血清T N F-α及I L-8表达明显上升（6.9±1.2）pg/mLvs（2.3±0.6） pg/mL、（1 5 0.8±11.8）p g/m L v s（1 3.8±3.2）p g/m L（P＜0.05）。miR-141高表达组炎症因子TNF-α及IL-8较低表达组明显升高（7.7±0.6）pg/mLvs（5.6±0.4）pg/mL、（166.3±11.6）pg/mLvs（136.2±9.1）pg/mL，差异有统计学意义（P＜0.05）。MiR-141表达与TNF-α及IL-8水平正相关（r=0.284，0.421，P=0.016，0.000）。

3 讨 论

目前，骨骼肌的IRI评估并不能满足临床需要，miRNA相关研究的深入，为揭示IRI的机制和动力学提供了新的思路。本研究发现miR-141在IRI发生后出现了明显的表达水平升高（P＜0.05）。说明miR-141可以监测骨科止血带应用所致的IRI，提供更多的临床信息。

IRI的发生机制被认为与氧自由基过量产生有关，再灌注恢复过程中，过量的氧自由基可导致细胞的功能障碍。SOD是清除氧自由基的主要酶类，miR-141的表达升高与SOD的降低具有明显的相关性（P＜0.05），SOD不足是IRI加重的重要原因。MiR-141过表达与SOD减少的具体机制还不明确，还有待进一步探究。

IRI的严重程度与炎症因子失衡有关，TNF-α及IL-8是经典的促炎因子，miR-141可以调控丝裂原活化蛋白激酶1（Mitogen-Activated Protein Kinase 1，MAPK1），MAPK1的表达可以增加TNF-α、IL-8的过表达，增强炎症反应[3]。在本研究中发现，miR-141的过表达也造成了TNF-α、IL-8的表达增加，这可能是miR-141影响骨科止血带所致IRI严重程度的机制之一。

综上所述，本研究发现miR-141在IRI发生时常出现高表达，其高表达意味着更严重的自由基清除酶SOD缺乏和炎症因子TNF-α、IL-8上调，而其具体调控机制还有待更多大样本的基础研究。

[1]冯吉杰,王 珂,陈彤宇,等.针刺调控炎性反应在抗缺血再灌注损伤中的研究进展[J].针刺研究,2017,42(06):552-556.

[2]刘 冲,杨伟俊,陈 文.miRNA在心肌缺血再灌注损伤中作用机制研究进展[J].药物生物技术,2017,24(02):163-166.

[3]刘 棣,宋玲琴,张寅斌,等.miRNA-141对胃癌细胞生长的抑制调节作用[J].现代肿瘤医学,2018,(09):1344-1347.