蜂蜜对茶多酚抑菌作用的影响*

郑 波 杨 德 殷晓蕾 焦 振 李 宁

(泰山医学院，山东 泰安 271016)

蜂蜜对茶多酚抑菌作用的影响*

郑 波 杨 德 殷晓蕾 焦 振 李 宁

(泰山医学院，山东 泰安 271016)

目的 检测蜂蜜是否能够增强茶多酚的抑菌作用，以更好地了解蜂蜜和绿茶的保健功效，进而为口腔炎症、溃疡等疾病的治疗提供新思路和方法。方法 以革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌为研究对象，采用滤纸片法测定枣花蜂蜜或槐花蜂蜜对不同浓度的茶多酚抑菌作用的影响。 结果 枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液抑菌效果无明显差别，但是均比茶多酚的抑菌效果明显。结论 蜂蜜茶多酚混合物具有很好的抑菌作用，可以作为优良的天然保健品，并为某些炎症的治疗提供新思路。

滤纸片法；枣花蜂蜜；槐花蜂蜜；茶多酚；抑菌作用

我国是世界上主要的茶叶生产国之一，茶叶资源非常丰富。茶叶中的有效成分茶多酚，是一种天然的抗氧化剂，具有很好的应用价值。茶多酚又名茶单宁、茶鞣质，是茶叶中所含有的一类多羟基酚类化合物的总称，简称为TP[1]。现代研究[2-3]已证实，茶多酚有止渴提神、延缓衰老、抗肿瘤和抗辐射等多种作用。另外，茶多酚对细菌的抑菌效果较强，对霉菌和酵母菌的抑制效果不明显[4]。蜂蜜被人们称为“健康之友”，是自然界赐于人们的一种珍贵的保健食品，它不但甜爽可口，营养丰富，而且可以治疗创伤、便秘、溃疡、鼻炎等疾病[5-7]。此外，国内已有研究发现蜂蜜因其渗透性、酸度以及含有过氧化氢等抗菌物质使其具有很好的抑菌效果[8]。但是目前,有关蜂蜜与茶多酚混合物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌抑制作用的研究较少。本研究通过检测枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合物对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌的抑制效果，使我们更好地了解蜂蜜和绿茶的保健功效，进而为蜂蜜类茶饮料的抑菌保存提供新方法和理论依据。

1 材料与方法

1.1菌种来源

供试细菌有革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichiacoli)。

1.2培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按标准方法配制，分装灭菌备用。

1.3茶多酚

供试茶多酚由河南天润生物科技有限公司提供。茶多酚>950 mg/g，儿茶素>800 mg/g，EGCG>400 mg/g,咖啡碱<2 mg/g。使用时，用无菌水配制成所需浓度的溶液。

1.4蜂蜜

供试蜂蜜由宁波新康蜂业有限公司提供枣花蜂蜜及槐花蜂蜜。使用时，用无菌水配制成所需浓度的溶液。

1.5方法

1.5.1菌悬液的制备 用无菌生理盐水制成稀释度为10-6的大肠杆菌悬液和稀释度为10-3的金黄色葡萄球菌悬液。

1.5.2茶多酚最低抑菌浓度的测定 将茶多酚溶液溶于无菌水中，配置成不同质量浓度的茶多酚溶液，浓度设定如下：0.0005，0.001，0.005，0.075，0.01(单位：g/ml)，分别将无菌滤纸片浸泡于上述茶多酚溶液中，放置于涂布有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的平皿上，培养24 h后观察是否有抑菌圈产生。

1.5.3蜂蜜溶液使用浓度的确定 将枣花蜂蜜和槐花蜂蜜溶液分别溶于无菌水中，配置不同浓度的蜂蜜溶液，浓度(体积比)设定如下：10%、20%、30%、40%、50%。将上述配置的蜂蜜溶液分别加入大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液中，培养24 h后观察其浑浊度，从而测定不同浓度蜂蜜溶液的抑菌效果，进而确定茶多酚与蜂蜜溶液的配比。

1.5.4茶多酚溶液抑菌效果检测 用滤纸片法分别将已灭菌烘干的圆滤纸片(直径为6 mm)浸入质量浓度不同的茶多酚溶液中，浓度设定如下：0.005，0.010，0.015，0.020，0.025(单位：g/ml)，捞出沥干，贴于含菌平板中。每个平板贴3片滤纸片，重复3次，培养24 h，测定抑菌圈直径，以无菌水作为对照。

1.5.5蜂蜜茶多酚混合液抑菌效果检测 采用滤纸片法，将已灭菌烘干的圆滤纸片(直径为6 mm)浸入枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液中，捞出沥干，贴于含菌平板中。每个平板贴3片滤纸片，重复3次，培养24 h，测定抑菌圈直径，以无菌水作为对照。

1.6实验设计及数据处理

抑菌圈直径利用十字交叉法进行测量。实验数据采用二因素多水平方差分析，其中 A 因素(实验所需供试菌)设2个水平；B因素(蜂蜜茶多酚混合液中茶多酚质量浓度)设6个水平(含对照组)。运用SPSS16.0统计软件，对抑菌实验结果进行方差分析，不同实验菌及茶多酚不同浓度之间的差异显著性均采用LSD法进行多重比较。

2 结 果

2.1茶多酚最低抑菌浓度的测定

经滤纸片法检测发现，浓度为0.0005 g/ml、0.001 g/ml的茶多酚溶液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌没有抑制作用。浓度为0.005 g/ml的茶多酚溶液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌开始表现出抑菌效果，并且随着浓度的升高抑菌效果越好。因此，最低抑菌浓度为0.005 g/ml(表1)。

表1 茶多酚最低抑菌浓度的测定

注：“-”没有抑菌作用，“+”有抑菌作用。

2.2蜂蜜溶液使用浓度的确定

经目测观察发现，不同浓度的枣花蜂蜜溶液或槐花蜂蜜溶液(体积比为：10%、20%、30%、40%、50%)对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑制效果，并且蜂蜜浓度越高抑菌效果越好。其中50%的蜂蜜溶液抑菌效果显著，因此采用此浓度的蜂蜜溶液检测对茶多酚的抑菌作用影响。

2.3枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液抑菌作用检测

通过测量茶多酚、枣花蜂蜜与茶多酚混合液、槐花蜂蜜与茶多酚混合液分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌产生的抑菌圈直径。由图1和图2可知，枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有明显的抑菌效果。其中，当茶多酚浓度为0.005g/ml时，枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液对金黄色葡萄球菌抑制作用明显增强，而当茶多酚浓度为0.01 g/ml时，枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液对大肠杆菌抑制作用明显增强。

另外，枣花蜂蜜茶多酚混合液与槐花蜂蜜茶多酚混合液对金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的抑菌效果没有显著差异。枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用也没有明显差异。

图1 茶多酚、枣花蜂蜜与茶多酚混合液、槐花蜂蜜与茶多酚混合液对金黄色葡萄球菌抑菌作用检测

图2 茶多酚、枣花蜂蜜与茶多酚混合液、槐花蜂蜜与茶多酚混合液对大肠杆菌抑菌作用检测

3 讨 论

由以上实验结果可知，枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有明显的抑菌效果，并且均比茶多酚溶液的抑菌效果显著。但是，枣花蜂蜜茶多酚混合液与槐花蜂蜜茶多酚混合液对金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的抑菌效果没有显著差异。另外枣花蜂蜜或槐花蜂蜜与茶多酚混合液分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用没有显著性差异。

有研究发现不同来源的蜂蜜的抗菌效果不同[9-10]，但在本研究中枣花蜂蜜或槐花蜂蜜对大肠杆菌或金黄色葡萄球菌的抑菌影响差异不明显，并且枣花蜂蜜或槐花蜂蜜对茶多酚的抑菌作用的影响也无明显差异。这可能是因为枣花或槐花蜂蜜的主要抗菌物质相似或者抗菌物质的含量相近。另外，蜂蜜生产的时间及贮存条件也都有可能影响蜂蜜的抗菌效果。

目前，对蜂蜜或绿茶的抗菌功效了解比较清楚，但蜂蜜与茶混合液的抗菌功效还有待于被进一步研究，进而为口腔炎症、溃疡等疾病的治疗提供新思路和方法。

[1] 杨彩霞，朱宇汇，张继. 常见茶多酚纯化工艺探究[J]. 食品研究与开发, 2011, 32(1):169-171.

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[3] 傅锦坤，于腊佳. 茶多酚对自由基抑制效应[J]. 厦门大学学报:自然科学版, 1998, 37(5):727-731.

[4] 唐裕芳，张妙玲，冯波，等. 茶多酚的抑菌活性研究[J]. 浙江林学院学报, 2005, 22(5):553-557.

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[6] 吴金泉．蜜蜂.健康.美容[M]．北京：中国农业出版社，1998．

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[9] Allen KL, Molan PC, Reid GM. Asurvey of the antibacterial activity of some NewZealand honeys[J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology,1991,43:817-822.

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Study of antibacterial activity of honey on tea polyphenols

ZHENG Bo YANG De YIN Xiao-lei JIAO Zhen LI Ning

(Taishan Medical University, Taian 271016 China)

Objective: To explore whether honey can enhance the antibacterial activity of tea polyphenols, and to help us to understand the health effects of honey and green tea, and to provide new ideas and methods for the treatment of oral inflammation, ulcers and other diseases. Methods: The gram positive bacteria (Staphylococcus aureus ) and the gram negative (Escherichia coli) were used. Filter paper method was used to test the antibacterial activity of Acacia honey and tea polyphenols mixture or Huaihua honey and tea polyphenols mixture. Results: The antibacterial activity of Acacia honey and tea polyphenols mixture was similar to the Huaihua honey and tea polyphenols mixture's, but both were more significant than the tea polyphenols'. Conclution: Honey and green tea mixture has a good antibacterial activity, which can be used as an excellent natural health care product, and some inflammations will be treated with honey and green tea mixture.

Filter paper method; acacia honey; huaihua honey; tea polyphenols; antibacterial activity

国家级大学生创新创业训练计划项目(201510439057) 。

郑波，男，在读本科生。

殷晓蕾，女，博士，讲师，E-mail：Yinxiaolei0113@163.com。

TS281

A

1004-7115(2018)01-0047-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2018.01.014

2017-11-02)