miR—222基因、ERα、胶原蛋白在阴道前壁膨出患者阴道壁中的表达

马喆　鲍俊翠　王慧军　肖爱民　李小兰　李环

[摘 要] 目的：检测miR-222基因、雌激素受体α（ERα）、胶原蛋白在阴道前壁膨出（AVP）患者阴道壁中的表达，分析其临床价值。方法：2014年6月至2016年3月，选取40例AVP患者（AVP组）和同期40例接受其他妇科手术的良性病变患者（对照组）。按照月经状态，再分为绝经前亚组、绝经后亚组，检测各组患者阴道壁miR-222基因、ERα及胶原蛋白表达情况，计算各指标间相关性并分析其临床意义。结果：AVP组绝经前、绝经后亚组阴道壁miR222高于对照组相应亚组，其ERα及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达水平均低于对照组相应亚组，两组内比较绝经后亚组miR-222表达水平高于绝经前亚组，其ERα表达水平低于绝经前亚组，差异均有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关性分析可见miR-222与ERα表达水平呈负相关，Ⅰ型胶原蛋白与Ⅲ型胶原蛋白表达水平呈正相关（P<0.05）。结论：miR-222表达增加所致ERα含量下降以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达水平的减少，是引发AVP的重要机制，注重绝经前后上述指标变化的监测有望为AVP的诊断及靶向治疗提供一定参考。

[关键词] miR-222基因；雌激素受体α；胶原蛋白；阴道前壁膨出

中图分类号：R711 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2017）05-078-03

DOI：10.11876/mimt201705032

阴道前壁膨出（AVP）是最常见的盆腔器官脱垂（POP）類型，盆底支持组织结构与功能完整性的破坏对患者生活质量造成严重影响[1]。目前，临床对AVP的发病机制尚无明确阐释，多数研究认为，年龄、妊娠及分娩、肥胖、遗传等与AVP相关[2]，绝经后女性AVP呈上升趋势，可能与雌激素水平变化有关[3]。此外，有学者认为，POP的发生与结缔组织变化亦具有密切关联，如胶原蛋白代谢异常者有着更高的POP发生率，且治疗后复发率较高[4]。此次研究检测miR-222基因、雌激素受体α（ERα）及胶原蛋白在AVP患者阴道壁中的表达，旨在进一步了解AVP发生机制。

1 资料与方法

1.1 对象与分组

征得医学伦理委员会批准，2014年6月至2016年3月期间40例于我院接受手术的AVP患者纳入AVP组；同期40例因为其他良性妇科疾病需行手术患者纳入对照组。两组均排除合并恶性肿瘤、子宫内膜异位症、妇科急性炎症者以及既往有盆底手术史或术前3个月内有雌激素药物使用史者。患者均知情同意并签署知情同意书，再按照患者月经状态分为绝经前亚组、绝经后亚组。

1.2 检测方法

术中取患者阴道前壁组织，以10%甲醛溶液固定，常规脱水、石蜡包埋，5 μm连续切片，使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法，检测miR-222基因相对表达水平 [5]；使用免疫组化法，检测ERα[6]，一抗为兔抗人多克隆ERα抗体（美国Santa Cruz公司），二抗为辣根过氧化酶标记的山羊抗兔多克隆抗体（英国Abcam公司）；采用免疫组化S-P法，通过平均阳性染色面积百分比对I 型、III型胶原蛋白的表达水平进行检测[7]，试剂盒购自杭州江莱ELISA检测中心。

1.3 结果判读

miR-222表达水平判读[8]：在目的基因与内参基因扩增效率相同的前提下，以U6为内参，测定循环阈值（Ct值），计算△Ct（△Ct=miR-222 Ct值-U6 Ct值），以2-△△Ct表示miR-222表达水平；ERα表达水平判读[9]：染色后显微镜下观察细胞核ERα表达情况，棕黄色染色为阳性细胞，于400×视野下选取5个视野，计数100个细胞内阳性染色强弱、阳性细胞百分率，二者乘积为ERα表达水平，其中，染色强弱计分0～3分，依次为无棕黄色染色、浅黄色染色、深黄色染色、深棕色染色；阳性细胞百分率计分0～4分，依次为0、1%～25%、26%～50%、51%～75%/、76%～100%；胶原蛋白表达水平判读[10]：在光镜下观察所有染色切片，I、III型型胶原蛋白以细胞间质内出现浅棕色或者棕黄色为阳性表达。每张切片随机选取5个完整而不互相重复的×200视野，拍照后运用Image-Pro Plus计算机图像分析系统，计算I型 、III型胶原蛋白所占面积百分比，即相对阳性染色面积平均值（%），得出I型、III型胶原蛋白的相对表达量。

1.4 统计学分析

指标表达组间比较采用t检验，使用Pearson相关性分析，计算各指标间相关性，SPSS18.0处理数据，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者阴道壁各项指标表达情况

AVP组绝经前、绝经后亚组阴道壁miR222高于对照组相应亚组，其ERα及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达水平均低于对照组相应亚组，两组患者组内比较，绝经后亚组miR-222表达水平高于绝经前亚组，其ERα表达水平低于绝经前亚组，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 相关性分析

Pearson相关性分析显示，miR-222与ERα表达水平呈负相关，Ⅰ型胶原蛋白与Ⅲ型胶原蛋白表达水平呈正相关（P<0.05）。

3 讨论

女性盆底由盆底肌、韧带、筋膜等结构组成，共同形成盆底支持结构，在维持膀胱、尿道、阴道、子宫和直肠等盆腔器官正常位置中发挥着重要作用[11]。盆底结构的松弛可引发POP，包括AVP、阴道顶端脱垂、阴道后壁脱垂等，其中AVP最为常见，且往往伴随阴道分泌物增多、阴道脱出物、下尿路症状、肠道症状、性功能障碍等 [12]。

一项流行病学调查显示，老年女性POP发生率高达32.8%，且人群中约有11%～19%的POP患者需手术治

疗[13]。随着人口老龄化的加剧，POP发生率不断上升，已成为影响全球妇女健康和生活质量的疾患。endprint

miRNA是近年来发现的一种小分子非编码RNA，可调控靶基因转录过程，参与生物体的发育、细胞凋亡、增殖及分化等活动，其中，miR-222是一种高度保守的非编码小分子RNA，与ERα存在靶向调控关系，且已有研究证实miR-222在乳腺癌发生发展过程中扮演的重要角色[14]。此次研究从绝经前后不同状态观察AVP患者发病机制，结果表明，女性绝经后miR-222表达水平大幅增加，AVP患者阴道壁miR-222表达水平高于非AVP患者，且miR-222与ERα表达水平呈负相关，说明miR-222、ERα可能参与了AVP的发展，其机制可能为：随着女性年龄的增加，雌激素等内分泌指标的变化可能引发miR-222过表达，而miR-222过表达可下调ERα表达、降低雌激素敏感性，进而影响阴道和盆底正常组织结构，造成盆底结构支撑力下降，以及阴道前壁松弛、膨出[15-16]。

在盆底支持组织中，子宫主韧带、子宫骸韧带以及肛提肌均发挥着重要作用，其中，韧带的主要成分包括平滑肌、结缔组织，而胶原蛋白是结缔组织的重要组成部分，约占机体全部蛋白的25%以上[17]。盆底组织主要由Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原组成，Ⅰ型硬度大、直径粗，主要分布于皮肤、肌肉、骨骼、韧带等组织，发挥支持作用；Ⅲ型弹性大、直径较细，主要调控组织弹性。Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的比例平衡才能维持女性盆底结构的稳定性[18]。本研究结果中AVP患者阴道壁Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平均较非AVP患者显著下降，是导致盆底结缔组织胶原变细、抗张能力不足的主要原因，而上述病理变化也是造成盆腔支持能力不足特别是AVP的主要原因。

综上所述，AVP患者阴道壁miR-222基因高表达，ERα、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平显著下降，且miR-222、ERα表达水平与患者月经状态具有一定关联，寻求高选择性雌激素受体以逆转ERα下降、探索改善盆腔组织弹性及支持力的方法，有望为AVP的治疗提供新的思路与方向。

参 考 文 献

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