尿抗原检测联合痰革兰染色诊断儿童肺炎链球菌肺炎

张昭勇，杨宏伟，张吉才

尿抗原检测联合痰革兰染色诊断儿童肺炎链球菌肺炎

张昭勇，杨宏伟，张吉才

目的探讨尿肺炎链球菌抗原检测联合痰革兰染色诊断儿童肺炎链球菌肺炎的临床价值。方法选择2016年9月—2016年12月在我院住院的儿童肺炎链球菌肺炎427例，采集患儿的尿液及痰液标本，以痰培养作为肺炎链球菌肺炎诊断的金标准，对尿肺炎链球菌抗原检测和痰革兰染色镜检进行诊断性功能评价。结果本研究痰培养检出肺炎链球菌119例(27.9%)，痰革兰染色镜检阳性168例(39.3%)，尿肺炎链球菌抗原阳性112例(26.2%)，且痰革兰染色镜检检出率与痰培养肺炎链球菌检出率差异有统计学意义(P<0.001)。尿肺炎链球菌抗原检测与痰革兰染色镜检诊断儿童肺炎链球菌肺炎的敏感性分别为73.1%、86.5%，特异性分别为91.9%、78.9%，两种方法并联使用的敏感性与特异性分别为96.6%、72.4%，串联使用的敏感性与特异性分别为63.0%、98.1%。结论尿肺炎链球菌抗原检测与痰革兰染色镜检并联诊断的敏感性高，适合门诊患者的筛查，而上述检测方法串联特异性高，适合住院患者确诊。

肺炎，肺炎球菌性；儿童；诊断

肺炎链球菌是引起儿童下呼吸道感染最常见的病原菌，若不及时诊治可致菌血症、脑膜炎、心内膜炎等疾病，严重者可诱发多器官功能衰竭甚至死亡[1]。目前，临床实验室检查主要以传统的血、痰细菌培养法分离肺炎链球菌作为肺炎链球菌肺炎的诊断依据。由于肺炎链球菌为苛养菌，培养条件要求高，生长时间长，鉴定程序繁琐，且阳性率较低，导致临床不能及时有效地进行抗感染治疗。传统的革兰染色镜检虽然快速、简捷，但要求检验者有丰富的经验和严谨的态度。肺炎链球菌抗原是一种可溶性抗原，可用于肺炎链球菌肺炎的辅助诊断[2-3]。本文通过同步盲法进行尿肺炎链球菌可溶性抗原检测和痰革兰染色镜检，以痰培养作为肺炎链球菌肺炎诊断的金标准，对尿肺炎链球菌可溶性抗原检测和痰革兰染色镜检进行诊断性功能评价，并对其联合应用价值进行探讨，现报告如下。

1 资料与方法

1.1研究对象 选择2016年9月—2016年12月在我院住院的儿童肺炎链球菌肺炎427例，其中男225例，女202例；年龄0～5(2.89±1.98)岁；均符合小儿下呼吸道感染诊断标准。根据痰培养是否检测到肺炎链球菌分为肺炎链球菌阳性组(119例)和阴性组(308例)。

1.2仪器与试剂 法国Vitek2 Compact细菌鉴定仪、光学显微镜(日本OLYMPUS)、革兰染液(Oxoid公司)、载玻片、香柏油、二氧化碳孵育箱、普通温箱、尿肺炎链球菌抗原试剂(Binax NOW Streptococcus pneumoniae Test，Binax, Inc)、optochin纸片(每片5 μg，Oxoid公司)、10%去氧胆酸钠溶液等。

1.3检测方法

1.3.1痰标本检测：患儿入院时按全国临床检验操作规程留取痰液，所有痰标本均先涂片再行革兰染色，镜检筛选合格标本后分别接种于哥伦比亚血琼脂平板、万古巧克力平板和中国蓝平板，并分别放入5%的二氧化碳温箱和普通温箱35℃孵育24 h和48 h后观察结果。根据革兰染色、菌落形态对可疑菌落进行optochin敏感试验和胆汁溶菌试验初步筛选，再使用Vitek2 Compact细菌鉴定仪进行鉴定。革兰染色镜检结果以观察到革兰阳性双球菌呈矛尖样排列，有或无荚膜，有白细胞吞噬或伴行现象为镜检阳性。

1.3.2尿标本检测：患儿入院时按临床检验操作规程留取尿液，收集于无菌尿杯中送检，按试剂盒操作说明检测尿肺炎链球菌抗原。检测步骤及结果判读严格参照BinaxNOW检测试剂说明书。

1.4统计学分析 采用SPSS 19.0统计学软件进行数据处理，计数资料采用χ2检验，以率(%)表示；采用诊断性功能评价敏感性及特异性。以α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1尿肺炎链球菌抗原检测与痰革兰染色镜检结果比较 本组痰培养检出肺炎链球菌119例(27.9%)，痰革兰染色镜检阳性168例(39.3%)，尿肺炎链球菌抗原阳性112例(26.2%)。尿肺炎链球菌抗原阳性检出率与痰培养肺炎链球菌检出率差异无统计学意义(P>0.05)，而痰革兰染色镜检阳性率与痰培养肺炎链球菌阳性率差异有统计学意义(P<0.001)，见表1。

表1 儿童肺炎链球菌肺炎427例尿肺炎链球菌抗原检测与痰革兰染色镜检结果比较[例(%)]

2.2诊断性功能评价 尿肺炎链球菌抗原检测的特异性高，敏感性低；痰革兰染色镜检敏感性较高，但特异性低。两种方法并联使用可提高敏感性，串联使用可提高特异性，见表2。

表2 儿童肺炎链球菌肺炎427例尿肺炎链球菌抗原检测与痰革兰染色镜检诊断性功能评价

3 讨论

引起儿童获得性肺炎的主要病原菌为肺炎链球菌，是我国1月大婴儿至5岁儿童死亡的首位病因，而由儿童肺炎导致的疾病负担位列全球第二[4-5]。及时有效的抗感染治疗可降低儿童肺炎链球菌肺炎病死率，但需建立在早期、快速、准确的病原学诊断基础上。目前肺炎链球菌肺炎病原学检测方法主要有痰涂片革兰染色镜检、痰及血培养、抗原检测、活组织病理检查(活检)、聚合酶链反应、基因芯片技术等，其中痰和血培养是诊断肺炎链球菌肺炎的金标准，但耗时长，灵敏性、特异性不高；活检、聚合酶链反应、基因芯片等操作繁琐且花费高[6]；痰涂片革兰染色镜检简单、快捷，但敏感性和特异性均受检验者水平影响[7]，因此，寻求一种简便、快速、灵敏的诊断肺炎链球菌肺炎的方法迫在眉睫。

BinaxNOW尿肺炎链球菌抗原检测是近年广泛用于临床的一种快速诊断肺炎链球菌肺炎的检测方法，操作简单，时间短，且标本采集方便，无创伤性，其检测原理是下呼吸道感染患者肺炎链球菌细胞壁多糖抗原通过肺毛细血管进入血液循环并随尿液排出体外。BinaxNOW尿肺炎链球菌抗原检测临床诊断效能的研究较多，对其诊断的敏感性和特异性报道差异较大。一项成人社区获得性肺炎的meta分析显示，痰培养或痰涂片诊断肺炎链球菌肺炎的敏感性和特异性分别为75%和95%[8]。本研究以0～5岁的患儿为研究对象，结果显示BinaxNOW尿肺炎链球菌抗原检测的敏感性、特异性和准确度分别为73.1%、91.9%和86.7%，与相关报道结果较一致[9]，但敏感性远低于吴雄基等[10]研究结果，原因可能与BinaxNOW尿肺炎链球菌抗原检测对于疾病早期或肺部低细菌含量患者的检测能力有限，而本研究包含了较多早期感染或细菌量低的患者。

对于儿童下呼吸道感染患者，普通痰培养和痰涂片病原学检查是临床常用的诊断方法。本文通过痰革兰染色镜检找到革兰阳性双球菌呈矛尖样排列，有或无荚膜，有白细胞吞噬或伴行现象即可诊断肺炎链球菌肺炎。痰涂片革兰染色镜检可及时向临床反馈初步结果，指导医师经验性用药，弥补痰培养时间较长的不足之处，缩短治疗时间。本研究应用痰革兰染色镜检诊断儿童肺炎链球菌肺炎的敏感性、特异性和准确度分别为86.5%、78.9%、81.0%。分析影响痰涂片灵敏性和特异性的主要原因如下：①细菌被黏液包裹和细胞吞噬时不易着色而漏检；②部分黏液型肺炎链球菌荚膜抵抗白细胞吞噬，在痰涂片中形态发生腊肠样等变化，不易识别；③正常菌群中草绿色链球菌易误认为肺炎链球菌；④不同检验医师对细菌形态的识别能力不同[11]。虽然痰涂片法易受多种因素影响，但仍具有重要的诊断价值。

BinaxNOW尿肺炎链球菌抗原检测和痰涂片革兰染色镜检均具有简单、快速的特点，但各有不足之处。BinaxNOW尿肺炎链球菌抗原检测敏感性较低，尿液样本的抗原含量不能提供感染的实时状态，且早期感染血液抗原含量低，不能有效检测到抗原的存在。有研究显示，感染2个月后患者尿液仍可检测出肺炎链球菌抗原[12]。痰涂片革兰染色镜检虽可提供感染的实时状态，但易受多因素影响，尤其对检验科医师把握细菌形态的识别能力要求较高。因此，联合使用可有效提高临床诊断效能。本研究将上述两种方法并联时敏感性、特异性和准确度分别为96.6%、72.4%和79.2%，用于门诊或早期可疑患者的筛查，避免漏诊；两种方法串联时敏感性、特异性和准确度分别为63.0%、98.1%和88.3%，用于住院患者的确诊，以免误诊。

综上，BinaxNOW尿肺炎链球菌抗原检测具有操作简便、快捷、易标准化的优点，可作为诊断肺炎链球菌肺炎的一种方法进行推广；痰涂片革兰染色镜检法简便、快速、对设备要求低，可在基层医疗机构广泛开展，故对上述两种方法进行合理联合应用可有效提高实验诊断效能。

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UrinaryAntigenDetectionCombinedwithSputumGramStaininginDiagnosisofChildrenwithPneumococcalPneumonia

ZHANG Zhao-yong, YANG Hong-wei, ZHANG Ji-cai
(Department of Clinical Laboratory, Taihe Hospital of Shiyan City Affiliated Hospital of Hubei Medical College, Shiyan, Hubei 442000, China)

ObjectiveTo investigate clinical value of urinary antigen detection combined with sputum gram staining in diagnosis of children with pneumococcal pneumonia.MethodsA total of 427 children with streptococcus pneumoniae pneumonia admitted during September 2016 and December 2016 were recruited in this study. Samples of urine and sputum were collected. The sputum culture was used as gold standard in diagnosis of children with streptococcus pneumoniae pneumonia, and then diagnostic functions of urinary antigen detection and sputum gram staining in diagnosis of pneumococcal pneumonia were evaluated.ResultsA total of 119 patients (27.9%) were detected as having streptococcus pneumoniae by sputum culture, and 168 patients (39.3%) were positive by sputum gram staining test, and 112 patients (26.2%) were positive urinary antigen，and the differences in detection rates of sputum gram staining and sputum culture were statistically significant (P< 0.001). Rates of diagnostic sensitivity of urinary antigen detection and sputum gram staining were 73.1% and 86.5% respectively, and specificity rates were 91.9% and 78.9% respectively. The sensitivity and specificity rates by multiple test of two method were 96.6% and 72.4% respectively; while sensitivity and specificity rates by tandem test of two methods were 63.0% and 98.1% respectively.ConclusionMultiple test of urinary antigen detection and sputum gram staining has higher sensitivity in screening of patients in clinic, while tandem test of two methods has higher specificity in confirmation of inpatients diagnosis.

Pneumonia, pneumococcal; Child; Diagnosis

湖北省卫生厅优秀青年人才项目(WJ2015Q039)；湖北省卫生计生指导性项目(WJ2015Z115)

442000 湖北 十堰，十堰市太和医院 湖北医药学院附属医院检验部

张吉才，E-mail：jicaizhang@hotmail.com

R563.11

A

1002-3429(2017)12-0087-03

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.12.033

2017-08-03 修回时间：2017-09-13)