知母须根化学成分研究

黄 琪，肖曦晨，金传山，吴德玲

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012； 2.现代中药安徽省重点实验室，安徽 合肥 230012)

知母为百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloideBunge.)的干燥根茎[1]，是临床常见的清热药。知母须根较为发达，其须根量是根茎采收量的30%左右。然而在知母产地加工时其须根作为非药用部位常被弃去不用。大量须根丢弃造成了资源浪费。

1 仪器与试剂

Bruker DRX-500和Bruker Avance Ⅲ-600型超导核磁共振仪：德国布鲁克科技有限公司，四甲基硅烷(TMS)为内标；EYELA SB-1100旋转蒸发仪：东京理化器械株式会社；薄层色谱用硅胶G和GF254：青岛海洋化工厂；Sephadex LH-20凝胶：瑞典安玛西亚生物科技公司；化学试剂均为分析纯。

知母须根于2015年11月采集于安徽省亳州市十九里镇，由安徽中医药大学刘守金教授鉴定为百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloideBunge.)的须根。药材标本保存于安徽中医药大学天然药物化学研究室。

2 提取分离

知母须根6 kg，用70%乙醇渗漉提取，提取液减压浓缩得浸膏1.56 kg。浸膏用水混悬，用等容积乙酸乙酯萃取5次，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯部位(400 g)。采用硅胶柱层析对乙酸乙酯部位进行分离，以二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱，洗脱液经薄层检识，合并相似流分，得到15个洗脱部位。对洗脱部位3～10共8个部位采用硅胶柱色谱并结合Sephadex LH-20及中压制备色谱技术对其进行分离，共得到化合物1～15。

3 结果

(1)化合物1 白色粉末，易溶于吡啶、甲醇。Molish和Libermann-Burchard反应呈阳性，与胡萝卜苷对照品共薄层，在3种溶剂系统下展开行为一致，且混合熔点不下降，鉴定化合物1为胡萝卜苷。

(2)化合物2 白色粉末，易溶于甲醇。与菝葜皂苷元对照品共薄层，在3种溶剂系统下展开行为一致，且混合熔点不下降，鉴定化合物2为菝葜皂苷元。

当孔隙气压力与孔隙水压力大小相同时，式(3)为饱和抗剪强度公式。式(3)与邵龙潭等[16]的非饱和土的土骨架应力方程及黄强等[17]基于混合物理论和热力学原理推导出的非饱和土有效应力方程一致。

(3)化合物3 淡黄色粉末状，易溶于甲醇。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6) δ:13.75 (1H, s,1-OH),10.6(1H,s,3-OH),10.5(1H,s,6-OH),9.81(1H,s,7-OH),7.38(1H,s,H-8),6.86(1H,s,H-5),6.37(1H,s,H-4),4.59(1H,d,J=9.8 Hz,H-1′),3.13～4.04(5H,br,H-2′,H-3′,H-4′,H-5′,H-6′)。13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ:179.1(s,C-9),163.8(s,C-3),161.8(s,C-1),156.2(s,C-4a), 154.1(s, C-6),150.8(s,C-4b),143.7(s,C-7),111.7(s,C-8a),108.1(d,C-8),107.6(s,C-2),102.6(d,C-5),101.3(s,C-8b),93.3(d,C-4),81.6(d,C-1′),79.0(d,C-5′),73.1(d,C-2′),70.6(d,C-3′),70.2(d,C-4′),61.5(t,C-6′)。以上核磁数据与文献[3]报道基本一致，故鉴定化合物3为芒果苷。

(4)化合物4 白色粉末。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ:7.01(2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,6′),6.86(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),6.72(2H,d,J=8.4 Hz,H-3′, 5′),6.39(1H,dd,J=8.4,2.6 Hz,H-6),6.30(1H,d,J=2.6 Hz,H-8),4.09(1H,ddd,J=10.5,3.0,1.6 Hz,H-2a),3.73(1H,dd,J=10.5,8.2 Hz,H-2b),3.70(3H,s,4′-OCH3),2.68(1H,ddt,J=15.9,5.2,1.1 Hz,H-4a),2.57(1H,dd,J=13.6,7.6 Hz,H-9a),2.51(1H,dd,J=13.6,7.5 Hz,H-9b),2.39(1H,dd,J=15.9,8.6 Hz,H-4b),2.15(1H,m,H-3)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:160.4(s,C-4′),156.8(s,C-8a),156.6(s,C-7),131.7(s,C-1′),131.3(d, C-5),131.0(d,C-2′,6′),116.1(d,C-3′,5′),114.9(s,C-4a),107.9(d,C-6),102.2(d,C-8),71.0(t,C-2)，55.6(q,4′-OCH3),38.0(t,C-9),35.9(d,C-3),31.3(t,C-4)。上述核磁数据与文献[4]报道基本一致，故鉴定该化合物为7-hydroxy-3-(4-methoxybenzyl)-chroman。

(5)化合物5 白色粉末。1H-NMR(500 MHz,CDCl3),δ:7.17(2H,d,J=8.1 Hz,H-2,6),6.84(1H,d,J=2.2 Hz,H-2′),6.79(2H,d,J=8.1 Hz,H-3,5),6.79(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.71(1H,dd,J=8.4,2.2 Hz,H-6′),6.51(1H,d,J=11.5 Hz,H-7),6.00(1H,ddd,J=17.2,10.2, 6.0 Hz,H-8′),5.68(1H,dd,J=11.5,10.0 Hz,H-8),5.58(1H,br s,4-OH),5.16(1H,dt,J=17.2,1.6 Hz,H-9a),5.14(1H,dt,J=10.2,1.6 Hz,H-9b),4.99(1H,s,3′-OH),4.46(1H,dd,J=10.1,6.1 Hz,H-7′), 3.87(3H,s,4′-OCH3)。13C-NMR(125 MHz,CDCl3),δ:154.5(s,C-4),145.6(s,C-4′),145.1(s,C-3′), 140.6(d,C-8′),136.7(s,C-1′),131.6(d,C-8),130.0(d,C-2,6),129.8(s,C-1),128.6(d,C-7),119.0(d,C-6′),115.11(d,C-3,5),115.06(t,C-9′),114.0(d,C-2′),110.7(d,C-5′),56.0(q,4′-OCH3),47.0(d, C-7′)。以上核磁数据与文献[5]报道基本一致，故鉴定该化合物为3′-hydroxy-4′-methoxy-4-dehydroxynyasol。

(6)化合物6 白色粉末。1H-NMR(500 MHz,CDCl3),δ:12.11(1H,s,5-OH),7.10(2H,d,J=7.8 Hz,H-2′,6′),6.79(2H,d,J=7.8 Hz,H-3′,5′),6.06(1H,d,J=2.3 Hz,H-6),5.97(1H,d,J=2.3 Hz,H-8),4.84(1H,br s,7-OH),4.28(1H,dd,J=11.4,4.1 Hz,H-2a),4.11(1H,dd,J=11.4,6.9 Hz,H-2b), 3.81(3H,s,4′-OCH3),3.17(1H,dd,J=13.9,4.4 Hz,H-9a),2.80(1H,ddt,J=10.5,6.9,4.3 Hz,H-3),2.70 (1H,dd,J=13.9,10.5 Hz,H-9b)。13C-NMR(125 MHz,CDCl3)δ:198.1(s,C-4),168.0(s,C-7),164.6(s, C-5),163.0(s,C-8a),154.5(s,C-4′),130.5(d,C-2,6′),130.1(s,C-1′),115.7(d,C-3′,5′),102.7(s,C-4a),95.1(d,C-6),94.0(d,C-8),69.1(t,C-2),55.8(q,4′-OCH3),47.0(d,C-3),32.1(t,C-9)。上述核磁数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定该化合物为5,7-dihydroxy-3-(4-methoxybenzyl)-chroman-4-one。

(7)化合物7 黄色针状结晶。1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:12.67(1H,s,2-OH),7.62(2H,d,J=8.6 Hz,H-2′,6′),7.55(1H,d,J=8.9 Hz,H-6),6.93(2H,d,J=8.6 Hz,H-3′,5′),6.52(1H,d,J=2.5 Hz,H-3),6.42(1H,dd,J=8.9,2.5 Hz,H-5),3.87(3H,s,4-OCH3)。13C-NMR(125 MHz,CDCl3),δ:114.6 (s,C-1),164.6(s,C-2),101.3(d,C-3),162.9(s,C-4),106.5(d,C-5),133.9(d,C-6),128.7(s,C-1′),131.8(d,C-2′,C-6′),115.1(d,C-3′,5′),161.4(s,C-4′),196.9(s,C-7),55.62(q,4-OCH3)。以上核磁数据与文献[7]报道基本一致，故鉴定该化合物为2,4′-dihydroxy-4-methoxybenzophenone。

(8)化合物8 黄色针晶，易溶于甲醇。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:7.84(2H,d,J=8.8 Hz,H-2,6),7.05(2H,d,J=8.5 Hz,H-2′,6′),6.81(2H,d,J=8.8 Hz,H-3,5),6.69(2H,d,J=8.5 Hz,H-3′,5′),6.01(1H,ddd,J=17.2,10.2,7.2 Hz,H-8′),4.97(1H,dd,J=10.2,1.4 Hz,H-9′a),4.95 (1H,dt,J=17.2,1.4 Hz,H-9′b),3.92(1H,q,J=7.2 Hz,H-7′),3.30(1H,dd,J=15.9,7.4 Hz,H-8a),3.27(1H,dd,J=15.9,7.4 Hz,H-8b)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:200.2(s,C-7),164.0(s, C-4′),157.1(s,C-4),143.1(d,C-2′,6′),135.4(s,C-1′),132.1(d,C-3′,5′),130.5(s,C-1),129.9(d, C-2,6),116.4(d,C-3,5),114.4(t,C-8),46.3(d,C-8′),44.9(t,C-9′)。以上核磁数据与文献[8]报道基本一致，故鉴定该化合物为1,3-bis(4-hydroxyphenyl)pent-4-en-1-one。

(9)化合物9 黄色针晶，易溶于甲醇。分子式为C22H26O8,1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:6.66(4H,s,H-2′,6′,2″,6″),4.72(2H,d,J=4.1 Hz,H-2,6),4.27(2H,dd,J=9.0,6.9 Hz,H-4a,8a),3.88(2H,dd,J=9.0,3.4 Hz,H-4b,8b),3.85(12H,s,3′,5′,3″,5″-OCH3),3.15(2H,dt,J=6.9,3.7 Hz,H-1,5′)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD),δ:55.7(d,C-1,C-5)，87.8(d,C-2，C-6)，72.9(t,C-4，C-8),133.3(s,C-1′,C-1″),104.6(d,C-2′,6′,2″,6″),149.5(s,C-3′,5′,3″,5″)，136.3(s,C-4′,4″),56.9(q,-OCH3)。以上核磁数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定该化合物为(+)-syringaresinol。

(10)化合物10 白色固体。1H-NMR(600 MHz, CD3OD),δ:1.87(1H,m,H-1a),0.82(1H,td,J=13.3,4.2 Hz,H-1b),1.94(1H,br,H-2a),1.40(1H,br,H-2b),2.12(1H,dt,J=13.3,3.3 Hz,H-3a),1.05(1H, m,H-3b),1.63(1H,m,H-7b),1.49(1H,m,H-9),1.01(1H,m,H-11a),1.61(1H,m,H-12a),1.52(1H,m, H-13),1.65(1H,m,H-14a),2.02(1H,m,H-14b),1.95(1H,m,H-15a),1.54(1H,m,H-15b),3.70(1H,d,J=11.4 Hz,H-17a),3.60(1H,d,J=11.4 Hz,H-17b),1.17(3H,s,H-18),0.99(3H,s,H-20)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD),δ:178.8(s,C-19),82.9(s,C-16),66.8(t,C-17),58.2(d,C-5),57.4(d,C-9),53.7(t,C-15), 46.2(d,C-13),45.8(s,C-8),44.9(s,C-4),43.4(t,C-7),42.0(t,C-1),40.9(s,C-10),39.4(t,C-3),38.2(t, C-14),29.7(q,C-18),27.3(t,C-12),23.5(t,C-6),20.4(t,C-2),19.6(t,C-11),16.4(q,C-20)。以上核磁数据与文献[10]报道基本一致。故鉴定该化合物为ent-16,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid。

(11)化合物11 淡黄色固体，易溶于甲醇。1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:6.95(2H,d,J= 1.9 Hz,H-6′,6″),6.82(2H,dd,J=8.1,1.9 Hz,H-2′,2″),6.77(2H,d,J=8.1 Hz,H-3′,3″),4.71(2H, d,J=4.0 Hz,H-3,7),4.23(2H,dd,J=8.9,5.5 Hz,H-1a,5a),3.86(6H,s,3,3′-OCH3),3.84(2H,dd,J=8.9, 3.4 Hz,H-1b,5b),3.15(2H,dt,J=5.5,3.7 Hz,H-4,8)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD),δ:149.5(s,C-3′, 3″),147.4(s,C-4′,4″),133.6(s,C-1′,1″),120.0(d,C-6′,6″),116.0(d,C-5′,5″),111.1(d, C-2′,2″),87.6(d,C-3,7),72.7(t,C-1,5),56.5(q,-OCH3),55.4(d,C-4,8)。以上核磁数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定该化合物为(+)-pinoresinol。

(12)化合物12 白色无定型粉末。1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:7.88(2H,d,J=8.8 Hz,H-2, 6),6.82(2H,d,J=8.8 Hz,H-3,5)。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6),δ:121.7(C-1),130.4(C-2,6), 114.8(C-3,5),160.4(C-4),167.7(C-7)。以上核磁数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定该化合物为对羟基苯甲酸。

(13)化合物13 淡黄色粉末，易溶于甲醇、氯仿-甲醇混合溶剂。与新芒果苷对照品共薄层，在3种溶剂系统下展开行为一致，且混合熔点不下降，鉴定化合物13为新芒果苷。

(14)化合物14 白色针晶。1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:7.33(2H,s,H-2,6),3.88(s, 3,5-OCH3)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD),δ:123.1(C-1),108.4(C-2,6),148.9(C-3,5),141.6(C-4), 170.5(C-7),56.9(3,5-OCH3)。以上核磁数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定为丁香酸。

(15)化合物15 黄色粉末。1H-NMR(600 MHz,CD3OD),δ:7.62(2H,d,J=8.7 Hz,H-2′,6′), 6.81(2H,d,J=8.7 Hz,H-3′,5′),6.17(1H,s,H-5),3.98(1H,d,J=4.7 Hz,H-3″),3.87(3H,s,4-OCH3), 3.78(1H,dd,J=7.0,4.7 Hz,H-4″),3.76(1H,m,H-5″),3.75(1H,dd,J=12.7,2.5 Hz,H-6″a),3.60(1H, dd,J=12.7,5.6 Hz,H-6″b),3.38(1H,d,J=16.6 Hz,H-1″a),2.86(1H,d,J=16.6 Hz,H-1″b)。13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:197.2(s,C-7),164.7(s,C-4′),163.0(s,C-6),162.2(s,C-2),159.7(s, C-4),133.2(d,C-2′,6′),132.0(s,C-1′),121.7(s,C-2″),115.6(d,C-3′,5′),105.2(s,C-3),103.1(s,C-1),93.5(d,C-5),84.0(d,C-5″),82.6(d,C-3″),78.1(d,C-4″),62.4(t,C-6″),56.2(q,4-OCH3),33.0(t, C-1″)。以上核磁数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定该化合物为4′,6-dihydroxy-4-methoxybenzophenone-2-O-(2″),3-C-(1″)-1″-desoxy-α-L-fructofuranoside。

4 讨论

知母须根是知母产地加工过程中所产生的资源废弃物，大量知母须根在产地加工过程中被弃去不用，造成了一定程度的资源浪费。本研究通过各种色谱分离方法从知母须根中分离得到高异黄酮类、木脂素类、甾体类等化学成分，而这些化学成分均具有一定的生物活性。目前研究多集中在对知母主根化学成分的分析，对于知母须根化学成分的研究较少，后期应以知母须根中活性化合物分离为导向，结合药理学实验，以期为知母药材资源综合开发利用提供一定的理论依据。

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