硝酸酯后处理对心脏缺血再灌注损伤心肌保护的效果分析

朱梦霞　王芳　杨麒玉　黄靓

[摘要]目的：探讨硝酸酯后处理在心脏缺血再灌注損伤中的应用价值及对心肌的保护效果。方法选取30只Wistar大鼠，行麻醉处理后，连接并准确对II导联心电图记录，大鼠I/R模型应用改良Pferfer MA推管法予以制备。随机将动物模型分为3组，各10只。即I/R组、IPostC组、PI-PostC组。结果：IPostC组实验大鼠和PI-PostC组实验大鼠心梗面积、心肌细胞凋死指数、心肌缺血面积、血cTnI水平相较I/P组，均呈显著缩小或降低显示（P<0.01）。PI-Postc组大鼠相较IPostC组，心肌缺血面积显著缩小（P<0.01），但心肌细胞凋亡指数、血cTnI水平、心梗面积无差异（P>0.05）。结论：缺血后处理、硝酸酯后处理，均可发挥保护心肌缺血再灌注损伤作用，且可使心肌缺血面积明显缩小，其中IPostC缩小幅度更为显著。

[关键词]硝酸酯后处理；心脏缺血；再灌注损伤；心肌保护

研究表示，在心梗发生后，行积极的再灌注处理可使心肌坏死面积明显减少，但此项操作具一定损伤性，常造成心肌细胞坏死和凋亡程度加重。以往动物实验表明，采用缺血后处理（IPostC）可促梗死面积缩小，最大程度减轻缺血再灌注（I/R）损伤。但IPostC因具有创性，故应用受限，而采用药物后处理（PI-PostC）可将相关信号通路直接激活，或对自身内源性保护物质进行模拟，来发挥保护心肌的作用，明显降低了手术损伤风险。本次研究就硝酸酯后处理价值展开探讨，现回顾结果如下。

1材料与方法

1.1实验材料

选取30只Wistar大鼠，行麻醉处理后，连接并准确对II导联心电图记录，大鼠I/R模型应用改良PferferMA推管法予以制备。随机将动物模型分为3组，各10只。

（1）I/R组：在对左前降支行结扎处理40min后，将其完全开放，行180min再灌注操作；

（2）IPostC组：在对左前降支行结扎处理40min后，于开始再灌注缺血前，行三个连续的呈循环状态下30s/30s I/R后处理操作，后将左前降支完全开放，并行180min的再灌注处理；

（3）PI-PostC组：对左前降支行结扎处理40min后，于开始再灌注前，经左颈总动脉，将5mg/kg的硝酸异山梨醇注入，5min后，左前降支再灌注180min，将5mg/kg硝酸异山梨醇持续注入20min。

1.2方法

（1）测定心梗面积：采用双染法进行测定，即氯化三苯四氮唑（TTC）与Evans blue。经颈动脉，在行再灌注处理3h后，予以取血，后取2%浓度的Evans blue快速经颈静脉进行推注，将心脏迅速摘取，自心底向心尖，将左心室垂直心脏纵轴方向切为6片，每片最度在2mm左右。于1%TTC溶液中放置，调整水浴温度为37℃，行15min的避光孵育，取出标本后，采用10%甲酸溶液行1h固定，于自然光下进行拍照。正确记录染色结果，即梗死心肌组织经观察表现为白色，正常心肌组织为蓝色，缺血心肌组织为砖红色。各区域面积用图像分析软件进行测定，得出总面积。其中左心室面积为蓝色、红色、白色面积之和；梗死面积为白色区域面积；缺血区面积为红色、白色面积之和。

（2）测定心肌肌钙蛋白（eTnI）：完成再灌注后，自实验大鼠右颈动脉分别采血1ml，行15min的离心操作，留取上清，保存于-80℃冰箱中，应用酶联免疫吸附法对eTnI检测。

（3）测定心肌细胞凋亡：心肌石蜡标本常规制备，应用TUNEL法原位检测心肌组织切片中表现出的细胞凋亡情况。光镜下，细胞核呈棕黄色或棕褐色颗粒，与凋亡细胞形态学特征符合，即可按凋亡细胞判定。自每张切片出现凋亡细胞的区域，取高倍视野10个，对平均每100个细胞中含有的凋亡细胞数进行计算，调亡指数（AD采用百分数（%）表示。

1.3统计学分析

涉及数据均输入spss13.0，组间计量资料采用（x+s）表示，行t检验，P<0.05具统计学差异。

2结果

IPostC组实验大鼠和PI-PostC组实验大鼠心梗面积、心肌细胞凋死指数、心肌缺血面积、血cTnI水平相较I/P组，均呈显著缩小或降低显示（P<0.01）。PI-PostC组大鼠相较IPostC组，心肌缺血面积显著缩小（P<0.05），但心肌细胞凋亡指数、血cTnI水平、心梗面积无差异（P>0.05）。见表1。

3讨论

多项动物实验表明，再灌注时取缓激肽、腺苷等应用，可经不同机制，促再灌注损伤改善。本次研究中，相较I/R组，PI-PostC组、IPostC组大鼠cTnI水平、缺血及梗死面积均显著降低或减小显示（P<0.01）。表明缺血后处理和采用硝酸酯缺血后处理均可使再灌注损伤减轻，心梗面积缩小。而PI-Postc组相较IPostC组，虽心梗面积无明显差异，但缺血面积呈更小显示，表明在保护缺血再灌注心肌损伤方面，酸硝酯后处理同IPostC效果相同，同时可使缺血面积有更大幅度的缩小。本次结果还显示，在细胞凋亡指数方面，PI-PostC组与IPost组均较I/R组低，表明两种后处理方式均可使心肌缺血细胞凋亡程度减轻，促再灌注损伤改善。

综上，缺血后处理、硝酸酯后处理，均可发挥保护心肌缺血再灌注损伤作用，且可使心肌缺血面积明显缩小，其中IPostC缩小幅度更为显著。

（通讯作者：黄靓）