鼻咽癌综合治疗后复发或放射性颅底骨坏死患者治疗前后EB病毒DNA、病毒衣壳蛋白抗原-IgA和早期抗原-IgA的表达及意义

黄燕凤, 梁 盛, 陆雪冬

(1. 广西壮族自治区南宁市横县中医医院, 广西 横县, 530300; 2. 广西壮族自治区横县人民医院, 广西 横县, 530300)

鼻咽癌综合治疗后复发或放射性颅底骨坏死患者治疗前后EB病毒DNA、病毒衣壳蛋白抗原-IgA和早期抗原-IgA的表达及意义

黄燕凤1, 梁 盛2, 陆雪冬1

(1. 广西壮族自治区南宁市横县中医医院, 广西 横县, 530300; 2. 广西壮族自治区横县人民医院, 广西 横县, 530300)

目的探讨鼻咽癌综合治疗后复发患者治疗前后EB病毒-DNA(EBV-DNA)、病毒衣壳蛋白抗原-lgA(VCA-IgA)和早期抗原-IgA(EA-IgA)的表达及意义。方法将150例鼻咽癌复发患者纳入复发组，按照是否应用鼻内镜手术分为手术组93例和放化疗组57例。选取36例放射性颅底骨坏死患者为对照组(无复发)。比较各组患者治疗前后血VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNA阳性率。结果治疗前，复发组的血浆EBV-DNA阳性率显著高于对照组(P<0.01); 2组的VCA-IgA和EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05)。治疗前，不同复发类型患者其血浆EBV-DNA、VCA-IgA和EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05)。临床分期越高，治疗前EBV-DNA阳性率越高(P<0.01); 不同临床分期患者治疗前其血浆VCA-IgA及EA-IgA阳性率组间比较无显著差异(P>0.05)。治疗前，放化疗组与手术组的血浆EBV-DNA、VCA-IgA、EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05)。治疗结束时，手术组的血浆EBV-DNA转阴率为91.30%, 显著高于放化疗组的68.75%(P<0.05)。放化疗组患者的血浆EBV-DNA阳性率显著高于手术组(P<0.01), 但2组VCA-IgA及EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05)。结论鼻内镜手术治疗可明显降低鼻咽癌患者的EBV水平，检测EBV-DNA水平对于判断鼻咽癌是否复发及临床分期具有重要意义。

鼻咽癌; EB病毒-DNA; 病毒衣壳蛋白抗原-IgA; 早期抗原-IgA; 鼻内镜

相关研究[1-2]显示，由于鼻咽癌大部分为低分化鳞癌，对放射线敏感，因此鼻咽癌首选放射治疗。亦有相关资料[3]证实，鼻咽癌局部复发与远处转移严重影响放疗效果。目前，应用鼻内镜手术治疗鼻咽癌残留和复发病灶的疗效良好。监测EBV-DNA水平可提示复发鼻咽癌患者的临床疗效[4]。本研究探讨复发鼻咽癌患者治疗前后血浆EBV-DNA、VCA-IgA及EA-IgA的表达情况及临床意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2013年12月—2016年12月收治的150例鼻咽癌复发患者作为复发组，包括男115例，女35例，年龄23～71岁，平均(48.55±14.23)岁，中位年龄49岁; 按照是否应用鼻内镜手术，将复发组分为手术组93例和放化疗组57例。2组患者除临床分期外的一般资料比较均无显著差异(P>0.05)。见表1。选取同期年龄及性别等相匹配的36例放射性颅底骨坏死患者作为对照组(无复发)，其中男30例，女6例，年龄22～70岁，平均(50.13±13.89)岁，中位年龄55岁。本研究患者均已签署知情同意书。

纳入标准: ① 复发性鼻咽癌，无远处转移且未经治疗; ② 卡氏评分≥70分; ③ 有可评价疗效的复发病灶。排除标准: ① 卡氏评分<70分; ②首程末次放疗结束至纳入研究的时间不超过3个月者; ③ 不接受对治疗后复发病灶进行再治疗者。

1.2 实施方法

表1 2组的一般资料比较[n(%)]

与手术组比较, *P<0.05。

1.2.1 鼻内镜手术: 全麻后，用肾上腺素棉片收缩鼻腔黏膜3次，使用0度鼻内镜常规切除鼻中隔后1/3，沿肿瘤周边正常黏膜切开，切除深度达颅底骨质，依据肿瘤的位置及侵犯情况做相应范围切除。

1.2.2 放疗: 采用调强放疗，MRI显示肿瘤影像边界，勾画肿瘤靶区2.0～2.2 Gy/次，肿瘤靶区总剂量为50～60 Gy, 计划靶区1.8～2.0 Gy/次，计划靶区总剂量为45～60 Gy, 5 d/周。

1.2.3 化疗: TP(紫杉醇+顺铂)方案: 第1天，静脉滴注多西紫杉醇75 mg/m2，持续60 min; 第1～3天，静脉滴注顺铂30 ms/m2, 每21 d为1周期，持续2～4周期。

1.3 标本采集

治疗前及治疗后，分别取所有研究对象的肘静脉血2.0 mL, 分别置于1个抗凝管和1个促凝管中，离心半径10 cm, 3 000 r/min离心5 min, 分离抗凝管中的上层血浆，用于提取DNA，分离促凝管中的血清，冰箱保存，待测。

1.4 主要仪器及试剂盒

SM600全自动酶标仪(购自上海永创医疗器械有限公司)和AM5000型实时荧光定量PCR仪(美国AmCell公司)。CUSABIO ELISA试剂盒、荧光定量PCR试剂盒(由上海硕盟生物科技有限公司提供)。

1.5 检测方法

严格按照说明书操作。VCA-IgA和EA-IgA采用ELISA法测定，采用酶标仪定性检测，得吸光度值(A值)。判定为阳性: VCA-IgA比值>1.0, EA-IgA比值>1.1。采用荧光定量PCR测定EBV-DNA水平，目的基因来自EB病毒的BamHI-W片段。判定为阳性: 扩增结果>0 copy/mL。

1.6 统计学方法

应用SPSS 22.0统计软件分析。计数资料以频数(频率)表示，采用卡方检验或Fisher确切概率法计算两组的构成比的差异程度。采用趋势卡方检验分析率的变化趋势。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 复发和无复发患者治疗前各项指标的阳性率比较

治疗前，复发组的血浆EBV-DNA阳性率为51.33%, 显著高于对照组(P<0.01); 2组的血清VCA-IgA和EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05)。见表2。

表2 复发组和对照组治疗前各项指标比较[n(%)]

与对照组比较, *P<0.01。

2.2 不同复发类型治疗前各项指标的阳性率比较

治疗前，不同复发类型患者其血浆EBV-DNA、血清VCA-IgA和EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05), 见表3。

表3 不同复发类型治疗前各项指标比较[n(%)]

2.3 不同临床分期的复发组患者治疗前的各项指标比较

治疗前血浆EBV-DNA的阳性率由高至低排序为: Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期，即临床分期越高，治疗前EBV-DNA阳性率越高(P<0.01); 不同临床分期患者治疗前其血清VCA-IgA及EA-IgA阳性率组间比较无显著差异(P>0.05), 见表4。

表4 不同临床分期的复发组患者治疗前的各项指标比较[n(%)]

与Ⅰ期比较, **P<0.01; 与Ⅱ期比较, ##P<0.01; 与Ⅲ期比较, △△P<0.01。

2.4 放化疗组与手术组治疗前后各项指标的动态变化

治疗前，放化疗组与手术组的血浆EBV-DNA、VCA-IgA、EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05), 见表5。手术组患者的术后血浆EBV-DNA转阴率为91.30%(42/46), 显著高于放化疗组患者放化疗后的68.75%(22/32) (P<0.05)。治疗结束时，放化疗组患者的血浆EBV-DNA阳性率显著高于手术组(P<0.01), 但2组VCA-IgA及EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05), 见表6。

表6 不同处理方法治疗后各项指标的阳性率比较[n(%)]

与手术组比较, **P<0.01。

3 讨 论

相关研究[5-6]表明，鼻咽癌大部分为低分化鳞癌，并且其发生、发展与EB病毒感染有关。目前, EBV抗原主要包括VCA和EA。亦有相关研究[7]证实，持续监测VCA-IgA对于诊断早期鼻咽癌具有重要意义。在鼻咽癌中, EA-IgA具有较高的特异性，是机体EBV复制的标志之一[8-9]。本研究中，复发组的血浆EBV-DNA阳性率为51.33%, 而鼻咽癌无复发患者中未见检出EBV-DNA。本研究结果表明，鼻咽癌治疗后无复发的患者VCA-IgA和EA-IgA阳性率分别为55.56%和30.56%, 提示不能仅通过检测VCA-IgA和EA-IgA判断患者有无复发和转移[10]。

本研究结果表明，临床分期越高，治疗前EBV-DNA阳性率越高，提示EBV-DNA水平可能与鼻咽癌患者临床分期有关，与国外相关研究结果一致[11]。亦有研究[12]显示，颈部鼻咽癌复发灶的肿瘤负荷大于局部鼻咽癌复发灶，使其EBV-DNA载量水平较高。而目前局部和颈部均复发的鼻咽癌发生率较低。本研究结果显示，治疗前，不同复发类型患者其血浆EBV-DNA、VCA-IgA和EA-IgA阳性率组间比较均无显著差异(P>0.05)。

目前，鼻咽癌复发患者通常进行以手术为主的综合治疗。手术切除肿瘤可迅速降低机体EBV-DNA水平，可能是由于肿瘤细胞产生量减少，而血液循环清除率增高，使血浆中EBV水平降低。治疗前复发性鼻咽癌患者EBV-DNA水平越高，其预后越差。EBV-DNA的清除率与预后密切相关。本研究结果显示，治疗前，放化疗组与手术组的血浆EBV-DNA阳性率组间比较均无显著差异。手术组患者的术后血浆EBV-DNA转阴率为91.30%(42/46), 显著高于放化疗组患者放化疗后的68.75%(22/32) (P<0.05)。治疗结束时，放化疗组患者的血浆EBV-DNA阳性率显著高于手术组(P<0.01)。

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Expressionofepstein-barrvirusDNA,viralcapsidantigen-lgAandearlyantigen-IgAinpatientswithrecurrenceorradiationnecrosisofskullbaseaftercomprehensivetreatmentofnasopharyngealcarcinomaanditsclinicalsignificance

HUANGYanfeng1,LIANGSheng2,LUXuedong1

(1.HengxianHospitalofTraditionalChineseMedicineinNanningofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Hengxian,Guangxi, 530300; 2.HengxianPeople′sHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Hengxian,Guangxi, 530300)

ObjectiveTo investigate the expression of epstein-barr virus DNA, viral capsid antigen-lgA and early antigen-IgA in patients with recurrence or radiation necrosis of skull base after comprehensive treatment of nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance.MethodsA total of 150 patients with recurrent nasopharyngeal carcinoma (NPC) treated in our hospital were divided into operation group (n=93) and chemoradiotherapy group (n=57). At the same time, 36 patients with skull base necrosis were selected as control group (without recurrence). The positive rates of VCA-IgA, EA-IgA and EBV-DNA in each group before and after treatment were compared.ResultsBefore treatment, the positive rate of plasma EBV-DNA of recurrence group was significantly higher than that of the control group(P<0.01). The positive rate of VCA-IgA and EA-IgA between two groups showed no statistically significant difference (P>0.05). Before treatment, there was no statistical significant difference in the positive rate of plasma EBV-DNA, VCA-IgA and EA-IgA among different groups (P>0.05). The higher clinical stage was, and the higher positive rate of EBV-DNA was before treatment (P<0.01). There was no significant difference in the positive rate of plasma VCA-IgA and EA-IgA among the patients with different clinical stages (P>0.05). After treatment, the negative rate of EBV-DNA was 91.30% in the operation group, which was significantly higher than 68.75% in the chemoradiotherapy group. The positive rate of plasma EBV-DNA in chemotherapy group was significantly higher than that in the surgery group (P<0.01), but the positive rate of VCA-IgA and EA-IgA between groups showed no significant difference (P>0.05).ConclusionEndoscopic sinus surgery can significantly reduce the level of EBV in NPC patients, and the detection of EBV-DNA is of great significance in the diagnosis of recurrence and clinical staging of NPC.

nasopharyngeal carcinoma; epstein-barr virus DNA; viral capsid antigen-lgA; early antigen-IgA; nasal endoscope

2017-07-18

广西壮族自治区卫生厅基金项目(Z2011236)

R 739.6

A

1672-2353(2017)23-064-04

10.7619/jcmp.201723019