白僵菌Bb38菌株小米培养基与SDAY培养基培养耐热性状差异研究

谢翎

摘 要：该实验从菌株培养条件入手，模拟夏季田间高温环境，采用热胁迫的方法，研究白僵菌Bb38菌株小米培养基与SDAY培养基培养的耐热性状差异，以期筛选出耐热性更强的菌株。结果表明：小米培养基培养的Bb38菌株的耐热性能更好。

关键词：球孢白僵菌；分生孢子；热胁迫；耐热性

中图分类号 S476 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）23-0015-2

Abstract： In this study， the thermostability difference of Bb38 Beauveria bassiana strains which are respectively cultured on millet culture medium and SDAY medium are detected.The results show that the thermostability of Bb38 strains which are cultured on millet culture is better than the other one.

Key words： Beauveria bassiana；Conidium；Thermostability；Thermal stress

1 前言

白僵菌是一类寄主范围广且致病性强的昆虫病原真菌，在真菌分类学上属于丝孢纲（Hyphomycetes）丛梗孢目（Moniliales）从梗孢科（Moniliaceae）白僵菌属（Beauveria）。其菌体由菌丝和分生孢子组成，根据孢子形态可以将白僵菌分为球孢白僵菌和布氏白僵菌[B.brongniartii（Sacc.）Petch]。自1897年美国利用球孢白僵菌（Beauveria bassiana）防治麦长蝽（Blissus lercoplerus）至今，其作为害虫生物防治的重要因子受到了广泛关注。由于白僵菌具有对环境和温血动物无害、易培养、杀虫谱广、致病力强等特点，目前已广泛应用于农林害虫的防治。

然而，相关研究结果也表明球孢白僵菌分生孢子对不利环境的抗逆力在很大程度上决定着菌剂的生态适应性和田间应用效果。其分生孢子萌发和侵染害虫的主要制约因子是湿度，而温度与湿度具有互补与综合作用。当夏季田间温度高于35℃时，球孢白僵菌的孢子萌发和生长一般会受到抑制。因此，目前球孢白僵菌的大面积田间应用还面临着一定的难题。本研究从菌株培养条件入手，研究白僵菌Bb38菌株小米培养基与SDAY培养基培养的耐热性状差异，以期培养获得耐热性更强的白僵菌孢子。

2 材料与方法

2.1 菌种 原始菌株为实验室保存分离的球孢白僵菌菌株Bb38。

2.2 培养基配方 SDAY培养基（W/V）葡萄糖4%，蛋白胨1%，酵母粉1%，琼脂粉2%。小米粉培养基（W/V）：小米粉7.5%，琼脂粉1.5%。萌发液（W/V）：蔗糖2%，蛋白胨0.5%。

2.3 培养 球孢白僵菌菌株Bb38孢子配成浓度为1×106孢子/mL浓度的孢悬液，取100μL接种涂布于SDAY或小米粉培养基中，置于25℃恒温培养14d至其完全产孢。

2.4 热处理 分别钩取2種培养基上的适量孢子于冷却后的2支离心管中，标记为S（表示SDAY培养基培养的孢子）、M（表示小米培养基培养的孢子）。在恒温振荡培养箱中25℃高速120r振荡。用血球计数板镜检，计算孢子数，将离心管中液体制成108孢子/mL的孢悬液。若达不到此浓度则继续钩取孢子、振荡均匀。在41℃、43℃与45℃水浴下，采取不同处理时间分别热激不同培养基中收获的孢子，并检测其活孢率（详见表1、表2）。以上所有处理，均重复3次。

2.5 检测孢子萌发率 水浴处理完成后将样品置于恒温振荡培养箱中振荡培养一昼夜，然后用血球计数板计数，计算离心管中孢子的萌发率。每个样品重复观察3次，记录每次的孢子萌发数a、总孢子数b，则萌发率c（%）=a/b×100，3次平均萌发率为d=（c1+c2+c3）/3。

3 结果与分析

3.1 Bb38孢子在小米和SDAY培养基上30min热处理后萌发率 从图1中可以看出：无论实在小米培养基还是在SDAY培养基上，Bb38菌株的分生孢子随温度升高，萌发率明显下降。在25～43℃，萌发率下降相对缓慢，在43～45℃，萌发率快速下降。在同一温度下，除在41℃附近时小米培养基培养的分生孢子萌发率比SDAY低之外，其它温度下，前者都比后者的萌发率要高。

3.2 Bb38孢子在小米和SDAY培养基上60min热处理后萌发率 从图2中可以看出：在小米和SDAY培养基上，Bb38菌株分生孢子的萌发率都随着温度的升高而下降。同一培养基培养的分生孢子，相比于水浴30min的相同温度下，处理时间增加一倍后，萌发率极大降低。SDAY培养基上培养的孢子萌发率随温度疾速下降，在达到43℃时，萌发率已经为0。而小米培养基上培养的孢子萌发随温度下降，在25～41℃疾速下降，在41～45℃，下降相对变缓。整个温度下（25～45℃），小米培养基培养的分生孢子萌发率均高于SDAY。

4 讨论

本研究基于球孢白僵菌分生孢子的热胁迫反应（水浴处理），探究培养条件（2种不同培养基）对同一菌株耐热性的影响，发现小米培养基培养的Bb38菌株的耐热性能比SDAY培养基培养的Bb38菌株要好。球孢白僵菌分生孢子对不利环境的抗逆力在很大程度上决定着菌剂的生态适应性和田间应用效果，尤其是温度。不同培养基质造成了白僵菌孢子热稳定性的不同，可能是由于孢子在形成过程中营养摄取的不同，造成了其孢子内部结构或代谢形成了差异。也有可能孢子在成熟期基质中的不同离子强度、pH值或其他条件，造成了其最终热稳定性的不同。本研究对今后筛选耐热性菌株孢子生产和抗逆相关机制研究无疑是新的探索，其相关深层机理还有待于进一步研究。

参考文献

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（责编：张宏民）endprint