基因重组鸡α-干扰素在肉鸡体内的药代动力学研究

张 伟 于忠娜 邹本革 （青岛农业大学海都学院 山东 莱阳 265200）

朱凤华 （青岛农业大学动物科技学院 山东 青岛）

朱连勤* （青岛农业大学动物医学院 山东 青岛）

基因重组鸡α-干扰素在肉鸡体内的药代动力学研究

张 伟 于忠娜 邹本革 （青岛农业大学海都学院 山东 莱阳 265200）

朱凤华 （青岛农业大学动物科技学院 山东 青岛）

朱连勤*（青岛农业大学动物医学院 山东 青岛）

选择40只32日龄健康AA肉鸡按1万IU/0.6ml基因重组鸡α-干扰素0.6ml肌肉注射给药后，不同时间点采血。用基因重组鸡α-干扰素检测试剂盒检测血清中浓度，研究其在血清中的药代动力学。通过3P97药动学软件分析主要药物动力学参数：分布半衰期(T1/2α)、消除半衰期(T1/2β)、药物清除率(CL)、药时曲线下面积(AUC)等。结果表明，肌肉注射1万单位基因重组鸡α-干扰素后肉鸡吸收迅速，达峰时间短，吸收较完全，能在体内较快的消除。

基因重组鸡α-干扰素 肉鸡 药代动力学

干扰素是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白质，其活性受细胞基因组的调节与控制、涉及RNA和蛋白质的合成等环节，即干扰素是一种类似多肽激素的细胞功能的调节物质，属细胞因子类[1]。尽管首先被发现的干扰素为鸡干扰素，但对于家禽干扰素的研究，尤其是分子生物学和产品研发方面的研究，要远落后于对人和其他哺乳动物干扰素的研究[2-4]。近年来，各种动物干扰素的研究取得了突破性进展，禽类的干扰素基因己经被克隆，其编码的蛋白的活性也被阐明[5-6]。基因重组干扰素产品作为新一代细胞因子类药物目前已广泛应用于牛、猪及禽类动物的病毒性疾病的防治[7]。基因重组α-干扰素在多种动物体内的药代动力学曾有报道，在家禽方面还未见报道。本试验通过给肉鸡注射一定剂量的被标记的基因重组鸡α-干扰素，研究被标记的基因重组鸡α-干扰素在肉鸡体内的药代动力学参数的变化，旨在丰富基因重组鸡α-干扰素的药代动力学数据，为临床合理用药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物及处理 选择40只32d健康AA肉鸡，肌肉注射1万单位/0.6ml被标记的基因重组鸡α-干扰素0.6ml。试验期为7d。

1.2 基础日粮 本试验采用全价日粮(肉鸡全价颗粒料，购自新希望六和饲料有限公司莱阳分公司)。

1.3 主要仪器设备与试剂 （1）主要仪器设备：台式高速离心机、水浴恒温摇床、ZW-A微量振荡器、ELX800酶联免疫检测仪。（2）试剂：鸡α-干扰素注射液由山东信得药业有限公司提供。基因工程鸡α-干扰素检测试剂盒购自Kit QIAGEN公司。

1.4 检测指标和方法 在注射前，注射后0.5、1、2、4、8、12、24、48、96和168h时每次随机取4只受试鸡，心脏采血放置于已编号离心管内，4000rpmin离心20min，分离血清，置-20℃冰箱保存至测定。用基因重组鸡α-干扰素检测试剂盒检测其含量。

1.5 统计分析 血药浓度-时间数据分别按单室、二室、三室模型运用最小二乘法拟合，通过对模型拟合的评价，利用F检验法及根据AIC值最小的原则选出二室模型为最佳，计算药代动力学参数。计算过程采用中国药理学会编制的3P97程序运行。用SPSS20.0软件进行方差分析。

2 结果

肌肉注射1万IU被标记的基因重组鸡α-干扰素后1h肉鸡体内被标记的基因重组鸡α-干扰素含量在1h达到峰值，随后含量降低并在48h降低到未注射基因重组鸡α-干扰素时的水平。见表1。

表1 肉鸡体内被标记的基因重组鸡α-干扰素含量(不同采取时间(h)) (pg/ml)

基因工程鸡α-干扰素的药动学参数结果表明，肌肉注射1万单位基因重组鸡α-干扰素后肉鸡吸收迅速，达峰时间短，吸收较完全，能在体内较快的消除。见表2。

表2 肉鸡血清中基因重组鸡α-干扰素药代动力学参数

3 讨论

杨丽等报道，基因重组人干扰素α-2b纳米粒组小鼠体内分布半衰期T1/2α为0.556h，消除半衰期T1/2β为2.786h，血药浓度时间曲线下面积AUC为488.705(ng/ml)*h，药物清除率CL为4.813ml/h；基因重组人干扰素α-2b溶液剂组小鼠体内T1/2α为0.318h，T1/2β=0.599h，AUC为123.74(ng/ml)*h，CL为19.47ml/h，说明重组人干扰素α-2b纳米粒在血液中的清除率均小于其溶液剂，说明其在血液中存留时间都较溶液剂延长[8]。吕厚峰等用干扰素α-2b溶液和基因重组干扰素α-2b脂质体在大鼠体内的药代动力学做比较后发现：干扰素α-2b脂质体3个剂量T1/2α差别不大，分别为0.13h，0.11h和0.12h，T1/2β为3.36h，3.02h和2.34h，AUC为6253，3428和1522(u/ml)*h，CL为1.15×10-3，1.05×10-3和1.18×10-3ml/h；而干扰素α-2b溶液T1/2α为0.065h，T1/2β为0.69h，AUC为2260(u/ml)*h，CL为3.54×10-3ml/h。与干扰素α-2b溶液组相比，基因重组干扰素α-2b脂质体的消除速率明显减慢，平均血浆清除率也较低[9]。本试验结果表明，肌肉注射1万单位被标记的基因重组鸡α-干扰素后，主要的药代动力学参数T1/2α为0.16±0.01h，T1/2β为5.66±0.23h，AUC为116.2±8.21 (pg/ml)*h，CL为0.086±0.001pg/ml。说明肉鸡对其吸收迅速，达峰时间短，吸收较完全，能在体内较快的消除。

4 结论

肌肉注射1万IU被标记的基因重组鸡α-干扰素后，用基因重组鸡α-干扰素检测试剂盒检测肉鸡血清中被标记的基因重组鸡α-干扰素后发现肉鸡对其吸收迅速，吸收较完全，达峰时间短，能在体内较快的消除。

[1] 孙瑛, 刘永乐, 王应玉. 干扰素在兽医临床的应用[J]. 山东畜牧兽医, 2016(4)： 46-47.

[2] 李世芳, 刘泽众, 常惠芸. 细胞因子佐剂研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2017, 44(1)： 296-301.

[3] 杨志远, 项勋, 段纲等. 禽类α干扰素研究进展[J]. 上海畜牧兽医通讯, 2016(1)： 24-26.

[4] 吴春荣. 畜禽干扰素研究进展[J]. 当代畜禽养殖业, 2009(5)： 3-4.

[5] 王春霞, 王林川, 都志强等. 番鸭IFN-α基因在毕赤酵母中的分泌表达[J]. 中国兽医科技, 2003, 33(7)： 44-48.

[6] 周庆丰. 鸡干扰素在毕赤酵母中的分泌表达[M]. 广州： 华南农业大学出版社. 2003.

[7] 岑路, 李华雁, 郭霄峰. 基因重组猪α-干扰素防治猪无名高热小量临床试验效果显著[J]. 中国动物保健, 2007(3)： 62-63.

[8] 杨丽, 刘茜, 王东凯等. 重组人干扰素α-2b纳米粒小鼠体内药物动力学及组织分布[J]. 沈阳药科大学学报, 2006, 23(11)： 690-693.

[9] 吕厚峰, 孙迎基, 邹文艺等. 基因重组干扰素α-2b脂质体的药代动力学研究[J]. 药物生物技术, 2005, 12(3)： 186-189.

S852.4+3

A

1007-1733(2017)12-0018-02

*通讯作者

2017-08-16）