尿液Tenascin-C测定在膀胱肿瘤患者筛查中的应用

李春梦, 张 红, 贺龙梅，王建利

1.陕西省中医医院 (西安 710003)，2.陕西省咸阳市干部保健局(咸阳712000)

尿液Tenascin-C测定在膀胱肿瘤患者筛查中的应用

李春梦1, 张 红1, 贺龙梅1，王建利2△

1.陕西省中医医院 (西安 710003)，2.陕西省咸阳市干部保健局(咸阳712000)

目的：分析TN-C在可疑膀胱肿瘤患者尿液中的含量，探讨尿液TN-C含量与膀胱肿瘤及肿瘤分级之间的关系。方法：收集可疑膀胱肿瘤患者及健康志愿者尿液，离心后取上清液，用ELISA试剂盒测定其TN-C含量，并对数据进行统计学分析。结果：可疑膀胱肿瘤患者尿液中TN-C含量显著高于健康志愿者；尿液TN-C含量作为初步诊断膀胱肿瘤的灵敏度和特异度分别是0.9635和0.9452；膀胱肿瘤患者，尿液TN-C含量与肿瘤分级呈正相关。结论：尿液TN-C含量可作为膀胱肿瘤患者初步诊断的一个参考因素，且与肿瘤分级呈正相关，但需排除炎症性疾病等。

世界范围内，每年大约有350 000例新增膀胱肿瘤患者，其中绝大多数为移行细胞癌，此类患者中，约70%～80%患者初步诊断为表浅性膀胱肿瘤，其余则为浸润性膀胱肿瘤[1]；本研究通过测定膀胱肿瘤患者以及志愿者(作为对照)尿液中TN-C的含量，初步阐明TN-C在膀胱肿瘤筛查中的应用。

资料与方法

1 一般资料 收集首诊可疑膀胱肿瘤且无其它器官肿瘤病史患者的新鲜尿液(患者检查如输尿管镜检、膀胱镜检与碎石等治疗前留取)98例(实验组)，其中男性57例，女性41例，平均年龄56.75岁(24～82岁)，膀胱肿瘤最后的病理分级由手术或膀胱镜取活检送病理科确诊；同时，收集健康志愿者新鲜尿液80例(对照组)，其中男性48例，女性32例，平均年龄45岁(20～67岁)。

2 仪器与试剂 离心机(Eppendorf 5810R，德国)，酶标仪(Bio-Tek Epoch，美国)，TN-C ELISA试剂盒购于上海西塘生物科技公司(灵敏度大于2ng/ml)。

3 方 法 所有尿液3 000转/min离心10 min，吸取上清液按照ELISA试剂盒说明书操作，酶标仪测定尿液中TN-C浓度。

4 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。 实验组与对照组尿液TN-C浓度通过t检验分析，尿液TN-C浓度与肿瘤分级之间的关系通过Rank相关性分析进行分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 实验组与对照组尿液TN-C含量测定结果比较 见表1。与对照组比较，实验组尿液中TN-C含量显著升高(P<0.05)。

表1 实验组与对照组尿液TN-C含量测定结果比较

注：*P<0.05

2 尿液TN-C诊断膀胱肿瘤的灵敏度和特异度 见表2。通过对实验组尿液中TN-C含量的测定并结合后期对应的病理学诊断，以对照组尿液TN-C含量平均值(0.0025±0.0023)μg/ml为分界线，大于该均值者初步判断为尿液TN-C阳性；发现以尿液中TN-C的含量作为标记，初步判定膀胱肿瘤有很好的灵敏度(0.9635)和特异度(0.9452)。

表2 尿液TN-C诊断膀胱肿瘤的灵敏度和特异度(例)

注：灵敏度=0.9635；特异度=0.9452

3 尿液TN-C浓度作为膀胱肿瘤标记物，对膀胱肿瘤误诊(漏诊)情况 通过相关分析发现，在已确诊的膀胱肿瘤患者中有8例与对照组相比，尿液TN-C浓度降低；在对照组中有9例尿液TN-C浓度高于膀胱肿瘤患者，即存在一定的误诊和漏诊。

4 膀胱肿瘤患者尿液TN-C含量与其肿瘤分级呈正相关 为进一步明确尿液TN-C含量与患者肿瘤分级的关系，依据病理诊断结果将其分为三组即G1、G2 和G3，分别计算其TN-C含量平均值，观察尿液TN-C含量与肿瘤分级的关系，尿液TN-C含量在不同分级的膀胱肿瘤患者中含量不同，且G3组含量显著高于G1和G2组的含量(P<0.05)；提示随着膀胱肿瘤级别升高，尿液中TN-C显著升高。

讨 论

目前膀胱肿瘤诊断的金指标即膀胱镜下取得肿瘤标本，但因其有创，加之花费较大，应用受限[2]。尿液脱落细胞学检查中发现肿瘤细胞有重要意义，但是多为阴性结果[3,4]。前期相关报道也指出了应用相关体液中肿瘤标记物诸如尿液中BTA[5]，NMP22[6]等来预测膀胱肿瘤相关情况，除NMP22为大家广泛接受外，其余因报道各异，因而也存在争议。因此，在膀胱肿瘤患者中寻求一种更好的、更简单易行的标记物来初步估计膀胱肿瘤的情况显得尤为重要。

Tenascin-C(TN-C，也称腱糖蛋白-C，腱生蛋白-C)是一种具有六臂体结构的糖蛋白。广泛表达于胚胎发育、炎症反应以及创伤修复过程中，但在成熟的正常组织中很少见或缺如。TN-C最早于1983年在脑胶质瘤中被发现，后期的相关研究证实，该糖蛋白在众多肿瘤中表达升高，且与肿瘤进展以及预后有重要关系，表现为一个肿瘤促进因子，如乳腺癌、黑色素瘤、胰腺癌、甲状腺癌、结直肠癌等等。早期已有报道认为体液(血液、尿液)中TN-C含量会在肿瘤患者中出现，且这种升高与肿瘤患者的肿瘤级别、预后显著正相关。有学者测定了尿液中特异性TN-C剪切体片段(即并非包含全部外显子的序列编码蛋白)可以作为评估肿瘤情况的一个指标。

本研究中，我们在可疑膀胱肿瘤患者中通过ELISA测定的尿液TN-C浓度， 并通过与最终病理结果对比，发现相对于健康志愿者，膀胱肿瘤患者尿液中TN-C含量极大升高，然而，我们注意到，在膀胱肿瘤患者中，仍有8例尿液TN-C含量极低，仔细分析此8例患者，发现6病理类型为G1，T1N0，1例为G2，T1N0，1例为G2，T2N0。其表达低于健康志愿者，确实出乎意料。我们分析造成这个结果的原因可能与这8例患者尿液的留取、保存有关，例如，门诊留尿前嘱病人大量喝水导致尿液被稀释等。然而此仅为推测，可能还存在某些需要进一步深入研究的机制。另一方面，我们注意到，有9例非膀胱肿瘤患者尿液TN-C极大升高，这个结果令我们很疑惑。通过详细分析这8例非膀胱肿瘤患者病史和相关病历资料发现，9例患者中，2例有肝炎(乙肝)病史，内科治疗中，4例有肾炎，1例有较严重的溃疡性结肠炎，还有2例分别因为数月前的意外和车祸而行骨科手术治疗。如前所述，TN-C被报道在炎症反应、损伤修复等过程中急剧升高，我们推测此9例非膀胱肿瘤患者尿液中TN-C升高可能与炎症反应及损伤修复有关。

此前，在乳腺癌的相关研究中，学者发现了促进乳腺癌进展的特异性TN-C剪切体。在此基础上，已经有相关学者通过测定膀胱肿瘤患者尿液中TN-C不同剪切体的片段来预测膀胱肿瘤预后，并试图测定某些与膀胱肿瘤关系最为密切的特异性剪切体。本研究中，我们采用的试剂盒针对的是完整的TN-C序列，即可以识别所有TN-C的剪切体。我们认为，一方面，尿液中总的TN-C含量已经很低，即达到ng级别，故而不同剪切体片段的浓度更低。所以，相对而言，测定不同剪切体片段含量时的误差更大，针对总的TN-C的抗体即能识别所有TN-C片段的抗体反而有相对较低的测定误差；另一方面，结合目前相关报道，我们认为对TN-C多种剪切体的研究并没有取得一致的结论，其功能尚未完全清楚，所以测定尿液中特异性的TN-C作为判断膀胱肿瘤的意义有待深入一步研究证实。

[1] Cheluvappa R, Smith DP, Cerimagic S,etal. A Comprehensive Evaluation of Bladder Cancer Epidemiology and Outcomes in Australia[J]. Int Urol Nephrol,2014,46:1351-1360.

[2] Eimvw, PS, Prasanna KV,etal. To Cystoscope or not to cystoscope patients with traumatic spinal cord injuries managed with Indwelling urethral or suprapubic catheters? That is The Question[J]. Spinal Cord,2014,52:500-505.

[3] Martinez-Giron R, Martinez-Torre S ,Mosquera-Martinez J.Bladder aspergillosis detected byurine cytology[J]. Diagn Cytopathol, 2015,43:403-406

[4] Palaoro LA,Angerosa M.Correlation between the cytology of urine sediment in fresh sample and smears stained by papanicolaou and giemsa methods[J]. J Cytol,2014,31:25-31.

[5] Guo A, Wang X, Gao L,etal. Bladder tumour antigen (BTA Stat) test compared to the urine cytology in the diagnosis of bladder Cancer: A Meta-Analysis[J]. Can Urol Assoc J,2014,8:E347-52

[6] Jia H, Gao P, Ma H,etal. Preparation of Au-Pt nanostructures by combining Top-Down with Bottom-Up strategies and application in label-Free electrochemical immunosensor for detection of NMP22[J]. Bioelectrochemistry,2015,101:22-27

△通讯作者

膀胱肿瘤 肿瘤分级 @尿液 Tenascin-C

R737.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.12.074

(收稿：2017-07-15)