甲状腺良恶性病变中HCK、HBME-1及TPO的表达及临床价值

周荣璟 丁金旺 赵海菲 徐益平 徐骁诚 吴龙凤 陈凯 罗定存

甲状腺良恶性病变中HCK、HBME-1及TPO的表达及临床价值

周荣璟 丁金旺 赵海菲 徐益平 徐骁诚 吴龙凤 陈凯 罗定存

目的 探讨高分子量角蛋白（HCK）、人骨髓内皮细胞标记物（HBME-1）及甲状腺过氧化物酶（TPO）3个蛋白标记物在甲状腺良恶性病变中的表达差异，评价其在观察组甲状腺乳头状癌（PTC）与对照组甲状腺良性病变中的临床诊断价值。方法 采用免疫组化方法检测并比较268例PTC与134例甲状腺良性病变组织中HCK、HBME-1及TPO的表达，分析3个蛋白标记物与PTC临床病理特征的相关性，并计算上述指标对PTC的诊断效能。结果 观察组中HCK、HBME-1的阳性表达率分别为96.64%（259/268）、95.15%（255/268），TPO的阴性表达率为88.48%（237/268），与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。不同性别、年龄、病灶数目、肿瘤大小、被膜是否突破、淋巴结转移状况、TNM分期及复发危险度PTC患者HCK、HBME-1、TPO表达的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。HCK、HBME-1及TPO 诊断PTC 的灵敏度分别为96.64%（259/268）、95.15%（255/268）、88.48%（237/268），特异度分别为 91.79%（123/134）、84.33%（113/134）、95.52%（128/134），准确度分别为 95.02%（382/402）、91.54%（368/402）、90.79%（365/402）。结论 HCK、HBME-1及TPO在甲状腺良恶性病变中的表达差异有统计学意义，其对鉴别甲状腺结节的良恶性质具有重要的临床价值。

甲状腺肿瘤 高分子量角蛋白 人骨髓内皮细胞标记物 甲状腺过氧化物酶

甲状腺癌是内分泌系统常见的恶性肿瘤，其中甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是常见的组织学亚型，约占90%以上。尤其是直径≤1.0cm的微小乳头状癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC），近年来发病率增长迅速[1]。PTC发病隐匿，病灶往往较小，部分PTC缺乏典型的镜下特征，因此容易误诊和漏诊[2]。随着免疫组织化学技术的迅速发展和广泛应用，若干有助于甲状腺肿瘤临床诊断的蛋白标记物，如高分子量角蛋白（HCK）、人骨髓内皮细胞标记物（HBME-1）及甲状腺过氧化物酶（TPO）等日益受到研究者的关注[2-4]。笔者观察和分析PTC和良性甲状腺病变组织中HCK、HBME-1及TPO的表达状况，探讨其在甲状腺良恶性病变中的临床诊断价值，现将结果报道如下。

1 资料和方法

1.1 对象 选择2014年1月至2015年7月在杭州市肿瘤医院外科接受手术治疗的PTC患者268例作为观察组，其中男68例，女200例，年龄15～75（46.18±11.30）岁；单发199例、多发69例，PTC病灶大小0.1～4.0cm，其中PTMC194例，伴有被膜突破并累及周围组织或器官者31例，伴有颈部淋巴结转移者116例。另取同期甲状腺良性病变患者134例作为对照组，其中男25例、女 109 例，年龄 15～70（47.84±10.87）岁，其中结节性甲状腺肿88例、甲状腺腺瘤25例、桥本甲状腺炎9例，结节性甲状腺肿合并腺瘤样结节10例，桥本甲状腺炎合并腺瘤1例，亚急性甲状腺炎1例。以上两组患者均有完整的临床资料，最终诊断均经手术及病理证实，术前均未接受任何治疗，且排除甲状腺外其他脏器的恶性肿瘤病史。本研究获得患者知情同意和医院伦理委员会批准。两组患者性别、年龄比较差异均无统计学意义（均 P＞0.05）。

1.2 实验试剂 鼠抗 HCK、HBME-1、TPO及 En VisionTM试剂盒等均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 实验方法 两组患者的手术标本常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，常规行HE染色。免疫组织化学采用En VisionTM二步染色法，DAB显色，苏木精复染，梯度乙醇脱水，中性树胶封固。每批实验均设有阳性和阴性对照，使用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。对可疑病例进行反复检测。本研究以免疫组化HCK和HBME-1阳性、TPO阴性作为PTC的判断依据，计算各评价指标对诊断PTC的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度。

1.4 结果判断标准 所有免疫组化结果均经2位主治以上医师独立阅片和诊断。本实验HCK、HBME-1及TPO均以甲状腺肿瘤细胞内出现棕黄色颗粒分布为阳性。HCK免疫组化染色主要分布于PTC的细胞质和细胞膜；HBME-1染色主要见于PTC的细胞膜，少数可伴有细胞质着色；TPO染色定位在胞质，PTC细胞为阴性，周围正常甲状腺细胞呈阳性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 19.0统计软件。计量资料以表示，组间比较采用t检验；计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 两组HCK、HBME-1及TPO表达的差异 见表1。

表1 两组HCK、HBME-1及TPO表达的差异[例（%）]

由表1可见，两组HCK、HBME-1及TPO阳性或阴性表达率差异有统计学意义（χ2=316.778、262.226、263.365，均P＜0.01）。免疫组化HCK和HBME-1阳性、TPO阴性的典型图例见图1－3。

图1 PTC中HCK阳性表达，定位于细胞膜及细胞质（Envision 法，×200）

图2 PTC中HBME-1阳性表达，定位于细胞膜及部分细胞质（Envision 法，×200）

图3 PTC中TPO表达阴性，肿瘤细胞几乎不见着色，而癌旁正常的滤泡上皮细胞胞质（右上角）则见大量的棕褐色颗粒分布（Envision法，×100）

2.2 HCK、HBME-1及TPO表达与PTC临床病理因素 的相关性 见表2。

表2 HCK、HBME-1及TPO表达与PTC临床病理因素的相关性[例（%）]

由表2可见，PTC患者不同性别、年龄、病灶数目、肿瘤大小、被膜是否突破、淋巴结转移状况、TNM分期及复发危险度中的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

2.3 HCK、HBME-1及TPO在PTC与甲状腺良性病变中的鉴别诊断效能 见表3。

表3 HCK、HBME-1及TPO在PTC与甲状腺良性病变中的鉴别诊断效能（%）

由表3可见，3个指标中HCK和HBME-1的诊断灵敏度均较高，TPO相对偏低。特异度上，TPO最高，HBME-1最低。HCK、HBME-1及TPO的准确度均较理想。

3 讨论

HCK的克隆号为34βE12，是前列腺基底细胞的特异性标记物，多与p63联合显示前列腺基底细胞以协助前列腺良性增生性疾病和前列腺癌的诊断，还可用鉴别乳腺导管及小叶上皮来源的肿瘤。近年来的研究发现，PTC中HCK也呈强阳性表达，而甲状腺良性病变大部分呈阴性表达或少数弱阳性表达[3,5]。HBME-1是间皮瘤相关抗体，最初在恶性间皮瘤发现，近来逐渐被用于甲状腺恶性病变的诊断，尤其是PTC，Ozolins等[6]发现96%的PTC表达HBME-1，但在良性甲状腺组织无表达。Abd-El等[7]也进一步证实HBME-1在PTC（包括经典与滤泡亚型）中的表达显著高于良性甲状腺疾病。TPO是一种糖基化血红蛋白，是合成甲状腺素的关键酶，在正常甲状腺和甲状腺良性病变中均有表达，但在甲状腺恶性肿瘤中表达低下或缺失。林茂华等[8]报道，PTC中TPO表达阳性率仅为2.33%，而滤泡性腺瘤中的表达率高达90.00%，两者的差异有统计学意义。本研究显示，PTC中HCK、HBME-1的阳性表达率分别为96.64%、95.15%，TPO的阴性表达率为88.48%，与对照组比较，差异有统计学意义。

在HCK、HBME-1及TPO与PTC临床病理因素关系的研究中，Tan等[3]最早发现，HCK在PTC中的表达与其年龄、性别和病灶大小等因素无关，而Cui[2]和Liu[9]的研究结果均显示，HBME-1在不同PTC患者的性别、年龄、肿瘤大小、被膜累及情况、淋巴结转移状况中的表达无明显差异。对于TPO，郦秀芳等[4]认为其在PTC中的表达与患者的临床病理因素均无关。本研究显示，上述3项指标的表达与PTC患者的不同性别、年龄、病灶数目、肿瘤大小、被膜是否突破、淋巴结转移状况、TNM分期及复发危险度等因素之间的差异均无统计学意义，支持上述研究结论。这些研究充分说明，HCK、HBME-1及TPO的表达仅与疾病性质（即良恶性）相关，与PTC的不同临床、病理特征均无明显关系，因此笔者认为这更有利于对甲状腺结节性质的鉴别诊断。

有文献报道，HCK（34βE12）在鉴别甲状腺良恶性结节中的诊断灵敏度为94.90%，特异度为88.90%[2]。而1项包含PTMC的研究中，HBME-1对诊断PTC的灵敏度为86%，特异度为100%，如联合其他指标则诊断准确率更高[10]。另有研究表明，TPO也具有较高的临床诊断价值，其阴性表达对PTC的诊断灵敏度为88.00%，特异度为86.20%[11]。本研究观察的结果是HCK、HBME-1及TPO诊断PTC的灵敏度、特异度均较高，其诊断的准确率均超过90%，分别为95.02%、91.54%、90.79%；此外还发现194例PTMC中，HCK、HBME-1及TPO的诊断灵敏度也分别高达95.36%、94.32%、89.17%，接近于全组PTC及直径＞1cm的PTC诊断水平，这充分说明3个蛋白指标是甲状腺良恶性病变性质判断的理想标记物，具有重要的临床诊断价值。

综上所述，HCK、HBME-1及TPO在甲状腺良恶性病变中存在差异性表达，其表达与PTC的各种临床病理因素无关，在鉴别PTC与甲状腺良性病变性质方面具有较高的辅助诊断价值，值得临床推广应用。

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Expression of HCK,HBME-1 and TPO in thyroid neoplasm and their clinical significance

ZHOU Rongjing,DING Jinwang,ZHAO Haifei,et al.Department of Pathology,Hangzhou Cancer Hospital,Hangzhou 310002,China

Objective To investigate the expressions of high molecular weight cytokeratin(HCK),human bone marrow endothelial cell-1(HBME-1)and thyroid peroxidase(TPO)in thyroid neoplasm,and their clinical significance. Methods En VisionTMimmunohistochemical technique was performed to detect the expression of HCK,HBME-1 and TPO in 268 samples of papillary thyroid carcinoma(PTC)and 134 samples benign thyroid nodules.The correlation between expressions of the three markers and clinicpathological characteristics was evaluated. Results The positive rate of HCK,HBME-1 and TPO in PTC was significantly higher than those in benign nodules(all P＜0.01).There was no association between the expression ofthe three protein markers and clinicpathological characteristics of patients,including sex,age,numbers of lesions,tumor size,capsular invasion,lymph node metastasis,TNM staging and recurrence relative risk.The sensitivity of HCK,HBME-1 and TPO for diagnosis of PTC was 96.64%,95.15%and 88.48%,and the specificity was 91.79%,84.33%and 95.52%with a diagnostic accuracy rate of 95.02%,91.54%and 90.79%,respectively. Conclusion The expressions of HCK,HBME-1 and TPO in PTC are higher than those in benign lesions,indicating that these protein markers may have diagnostic value for PTC.

Thyroid neoplasm High molecular weight cytokeratin(HCK) Human bone marrow endothelial cell-1(HBME-1) Thyroid peroxidase(TPO)

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.22.2016-1435

浙江省公益技术应用研究项目（2017C33180）；杭州市重大科技创新专项项目（20131813A08）；杭州市科技计划项目（20160533B05）

310002 杭州，杭州市肿瘤医院病理科（周荣璟、赵海菲、徐益平），肿瘤外科（吴龙凤）；杭州市第一人民医院（南京医科大学附属杭州医院）肿瘤外科（丁金旺、陈凯、罗定存）；江苏省苏州市吴江区第一人民医院甲乳外科（徐骁诚）

丁金旺，E-mail：zjlsdjw@163.com

2016-09-18）

杨丽）