脑胶质瘤组织SPARC、p15表达及意义

戚继，孙涛，赵澎，任同

(首都医科大学附属北京天坛医院，北京100050)

脑胶质瘤组织SPARC、p15表达及意义

戚继，孙涛，赵澎，任同

(首都医科大学附属北京天坛医院，北京100050)

目的探讨脑胶质瘤组织富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)、p15蛋白表达变化及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测83例脑胶质瘤患者(Ⅰ～Ⅱ级28例、Ⅲ级32例、Ⅳ级23例)脑胶质瘤组织及瘤旁正常脑组织中SPARC、p15表达；分析不同临床分期、不同存活时间患者瘤组织SPARC、p15阳性表达情况。结果瘤组织SPARC阳性表达率高于瘤旁组织,P<0.05；p15阳性表达率低于瘤旁组织，P<0.05。随着临床分级升高， 瘤组织SPARC表达升高(P<0.05)，p15表达下降(P<0.05)；存活不足5年者SPARC阳性表达率高于存活5年及以上者(P<0.05)，p15阳性表达率低于存活5年及以上者(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中SPARC表达上调、p15表达下调。检测脑胶质瘤组织中SPARC、p15有助于判断脑胶质瘤患者病情及评估预后。

脑胶质瘤；富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白；p15蛋白；临床分级；存活时间

脑胶质瘤是颅内肿瘤的高发类型[1，2]，患者预后较差[3]，其发生机制目前仍不明确。胶质瘤早期没有明显的临床症状，亦无明确的肿瘤标记物辅助确诊，因此早期确诊率低。富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)曾被称为骨连蛋白，参与发育、组织修复等多种生理过程，与黑色素瘤、胰腺癌、肺癌、卵巢癌等的发生发展有关[5]。p15蛋白是一种细胞周期依赖性的蛋白激酶抑制因子，可与CDK4或CDK6结合抑制细胞从G1期进入S期，使细胞周期停滞于G1期，p15蛋白表达缺失可以导致大量细胞进入S期，细胞增殖异常活跃形成肿瘤[6，7]。本研究探讨脑胶质瘤组织SPARC、p15表达变化及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 研究对象为2011年1月～2012年1月于我院行手术治疗的脑胶质瘤患者83例，其中男34例、女49例，年龄20～59(41.5±9.2)岁。均经术后病理学证实诊断。参照WHO 2007年版中枢神经系统肿瘤分级标准[8]，Ⅰ～Ⅱ级28例，Ⅲ级32例，Ⅳ级23例。患者术前均未接受放化疗及肿瘤免疫治疗。排除患有其他部位恶性肿瘤的患者，排除患有心、肝、肺等严重脏器损伤的患者。术后存活不足5年者69例，5年及以上者14例。

1.2 瘤组织及瘤旁组织SPARC、p15表达检测 取手术切除的脑胶质瘤组织存档蜡块及其瘤旁正常脑组织存档蜡块。采用免疫组化SP法检测SPARC、p15表达。以已知阳性切片为阳性对照，以PBS代替一抗为阴性对照。由两位病理科医师阅片。 采用染色强度评分和阳性细胞百分比评分[9]判断结果。染色强度评分： 细胞质中出现棕黄色颗粒为SPARC阳性细胞，免疫组化SP染色后细胞核中出现棕黄色颗粒为p15阳性细胞。光镜下细胞质(核)无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色依次记为0、1、2、3分。阳性细胞百分比评分：计数5个400×高倍视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞百分比(阳性细胞数/500×100%)。阳性细胞百分比：0～5%为0分，>5%～25%为1分，>25%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%为4分。染色强度评分与阳性细胞百分比的乘积为0判为阴性，其余为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS21.0统计软件。瘤组织、瘤旁组织SPARC、p15阳性表达率比较以及不同临床分期、不同存活时间者瘤组织SPARC、p15阳性表达情况比较采用χ2检验和Fisher确切概率法。瘤组织SPARC、p15阳性表达情况相关性分析采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 瘤组织及瘤旁组织SPARC、 p15表达 瘤组织及瘤旁组织SPARC阳性表达率分别为81.9%(68/83)、24.1%(20/83),P<0.05；p15阳性表达率分别为25.3%(21/83)、50.6%(42/83)，P<0.05。

2.2 不同临床分级、存活时间者瘤组织SPARC、p15表达，随着临床分级升高，瘤组织SPARC表达升高(P<0.05)、p15表达下降(P<0.05)；存活不足5年者SPARC阳性表达率高于存活5年及以上者(P<0.05)，存活不足5年者p15阳性表达率低于存活5年及以上者(P<0.05)；见表1。Spearman等级相关分析结果显示，瘤组织SPARC、p15表达呈负相关(rs=-0.810，P<0.01)。

表1 不同临床分级及存活时间者瘤组织SPARC、p15表达

3 讨论

脑胶质瘤在脑部呈浸润性生长，通常与正常的脑组织没有明确的界限，且不局限于一个脑叶[10]。患者早期没有明显症状，常规影像学、血常规等无创检查手段不能确诊。SPARC蛋白的编码基因SPARC定位于染色体5q31～32，SPARC蛋白相对分子质量32 kD,是一种富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白，是一种非结构性糖蛋白，又称为骨连接素或基膜40。SPARC蛋白广泛分布于人体组织，通过于细胞外基质不同蛋白的相互作用，参与人组织的生成及结构维持、细胞增殖、细胞迁移等多种生理过程。SPARC与多种肿瘤的发生发展有关。但是SPARC与肿瘤的关系存在异质性，如其在乳腺癌、黑色素瘤组织中表达上调，而在胰腺癌组织中表达下调。这可能是由于不同肿瘤组织内含有的蛋白水解酶对SPARC的剪切位点不同，产生的蛋白水解片段也不相同，不同的蛋白水解片段产生的生物学效果也不相同；另外不同肿瘤的受体表达情况不同，这也可能导致不同肿瘤对SPARC的反应不同[12～15]。本研究结果显示，胶质瘤组织中SPARC 阳性表达率高于瘤旁组织，表明脑胶质瘤组织中SPARC表达上调。进一步研究发现，瘤组织SPARC表达随临床分期而升高，表明检测脑胶质瘤组织SPARC表达有助于判断患者病情。本研究结果显示，存活不足5年者SPARC阳性表达率高于存活5年及以上者。提示瘤组织SPARC表达有助于脑胶质瘤患者的预后判断。脑胶质瘤恶性程度较高，不同临床分期的脑胶质细胞瘤治疗方案和预后差距较大。对脑胶质细胞瘤的分期标准进行改进以获得准确的临床分期和最恰当的治疗方案一直是神经外科努力的方向。本研究结果为神经外科工作者今后的研究提供了方向。

p15基因又称细胞周期依赖性激酶抑制基因，是一种和多种肿瘤相关的抑癌基因，定位于9p21，与编码的p15蛋白和p16蛋白一起，通过结合CDK4或CDK6(p15/p16-CDK4/CDK6-Rb通路)抑制细胞增殖，抑制肿瘤[16～20]。本研究结果显示，瘤组织p15阳性表达率低于瘤旁组织；提示瘤组织p15表达下降可能参与了脑胶质瘤的发生过程；临床分期越晚，瘤组织p15表达越低。提示检测瘤组织p15表达有助于判断病情。本研究结果显示，存活不足5年者p15阳性表达率低于存活5年及以上者。提示检测瘤组织p15表达有助于胶质瘤患者的预后判断。细胞周期调控主要通过p53通路和Rb通路。p15是Rb通路的重要组成部分。p15可以通过调控CDK4蛋白的表达影响Rb的磷酸化，进而发挥细胞周期调控作用，p15表达缺失与多种肿瘤的发生发展有关。本研究结果表明，脑胶质瘤组织中p15蛋白表达缺失可能是脑胶质细胞恶性转化为脑胶质瘤细胞的重要原因，检测脑胶质瘤组织中p15蛋白表达可能助于判断脑胶质瘤患者的病情，并有助于医师确定治疗方案和评估预后。

SPARC、p15均参与了脑胶质瘤的发生发展过程。SPARC发挥作用可能通过调节肿瘤细胞因子表达、局部血管生成、细胞外基质合成、上皮细胞间质细胞转化等多种途径，这些途径可能与p15有交叉，故脑胶质瘤组织中SPARC、p15表达存在相关性。本研究结果显示，脑胶质瘤组织中SPARC、p15表达呈负相关，验证了笔者的推测。

综上所述，脑胶质瘤组织中SPARC表达上调、p15表达下调。检测脑胶质瘤组织中SPARC、p15有助于判断脑胶质瘤患者的病情及评估预后。但是本研究样本量较小，今后需要进一步扩大样本量以验证本研究结果的正确性。

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