胃癌患者血清miR-21水平变化及意义

戴凌，蒋志庆，张广钰，甘信利

(桂林医学院附属医院，广西桂林 541001)

胃癌患者血清miR-21水平变化及意义

戴凌，蒋志庆，张广钰，甘信利

(桂林医学院附属医院，广西桂林 541001)

目的观察胃癌患者血清miR-21的水平变化，并探讨其意义。方法选取胃癌患者60例(观察组)，同期与之年龄、性别相匹配的体检中心健康人群60例作为对照组，测定两组受试者血清miR-21水平，并分析血清miR-21水平与胃癌患者组织分化程度、临床分期、淋巴结转移、肿瘤大小、年龄、性别的相关性。结果观察组血清miR-21水平高于对照组(Plt;0.05)，预后良好者血清miR-21水平低于预后不良者(Plt;0.05)。血清miR-21水平与胃癌患者的组织分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期有关(P均﹤0.05);与患者的年龄、性别无关(P均gt;0.05)。结论胃癌患者血清miR-21水平升高，miR-21可能参与胃癌的发生发展。

胃癌；微小RNA-21；临床病理特征

胃癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，其致死率在肿瘤引起的死亡中排名第三[1]。据最新研究报道，全球每年约有952 000例胃癌患者，且每年约有700 000例死于胃癌[2]。引起胃癌的原因有多种：宿主的易感性，幽门螺杆菌的感染，环境因素，特别是饮食模式和吸烟[3]。根除幽门螺杆菌对于减少胃癌的发生有很大作用，但大部分胃癌患者就诊时已处于晚期。CA199和CEA是两大常见的肿瘤标志物，但诊断胃癌的特异性和敏感性较低。微小RNA(miRNAs)是小的单链RNA分子，其长度为18～25个核苷酸，在转录后水平调节基因表达。研究发现，miRNAs参与细胞的多种生物学过程，包括增殖、分化、凋亡、生长等[4]，且miRNAs在癌症发生发展中起重要作用[5]。其中，miR-21与肿瘤进展关系密切，包括肝细胞肝癌、胃癌、成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、喉癌[6]等。2015年1～12月，我们观察了胃癌患者血清miR-21的水平变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择本院2015年1～12月诊断为原发性胃癌患者60例(观察组)，男35例、女25例，年龄45～70岁，其中﹤60岁者20例，≥60岁者40例。组织病理类型的判断标准均参照WHO胃癌的病理学分类组织分化程度：低分化19例，中分化20例，高分化21例；有淋巴结转移30例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期22例，Ⅲ+Ⅳ期38例。随访1年，失联12例，获随访48例，48例中预后良好(判断标准：无死亡，无远处转移，无复发)30例，预后不良18例(死亡6例，发生转移10例，复发2例)。另选取同期与观察组匹配的体检中心查体健康人群60例作为对照组。病例排除标准：严重电解质紊乱者；严重肝肾功能不全、心功能不全、严重感染者；神志不清，无法配合者。所有受试者获得知情同意，并已通过我院伦理委员会的批准。两组年龄、性别具有可比性。

1.2 胃癌患者血清miR-21水平检测 抽取患者空腹静脉血液样本2 mL，3 500 r/min，离心15 min，分离血清，置于-70 ℃低温冰箱保存。采用TRIzol法从血清内提取总RNA，然后反转录成cDNA(PrimeScript RT Reagent Kit，Takara)。用qRT-PCR法测定血清总miR-21，用U6 miRNA作为对照。miR-21扩增引物：正向引物：5′-ACGTTGTGTAGCTTATCAGACTG-3′,反向引物:5′-AATGGTTGTTCTCCACACTCTC-3′;U6 miRNA扩增引物：正向引物：5′-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3′,反向引物：5′-GGAACGCTTCACGAATTTG-3′。使用公式2-ΔΔCt计算miR-21相对表达量。

2 结果

2.1 两组患者血清miR-21水平比较 观察组与对照组血清miR-21水平分别为50.23±4.78、18.62±5.14，两组比较，Plt;0.05。预后良好者与预后不良者血清miR-21水平分别为22.15±3.78、36.74±4.21，二者比较，P﹤0.05。

2.2 血清miR-21水平与胃癌患者临床病理特征的关系 血清miR-21水平与胃癌患者组织分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期有关(P均﹤0.05)，与患者的年龄、性别无关(P均gt;0.05)。见表1。

表1 血清miR-21水平与胃癌患者临床病理特征的关系

3 讨论

胃癌是世界上第二大常见肿瘤，目前仍缺乏有效诊断的特异性标志物。肿瘤的发生是一个复杂生物学过程，涉及到多种细胞因子、蛋白、生长分化因子的参与。近年来，关于miRNA与肿瘤发生发展的关系逐渐成为研究热点，研究[7]发现，miRNA与多种肿瘤的发生发展相关。

miRNAs参与人类30%～60%基因的转录后调节。由于一个miRNA可作用于上百个不同的基因，因此miRNA的功能失调，可导致正常细胞向癌细胞转化。国外文献报道，超过一半的miRNAs基因位于肿瘤相关基因组区或脆性位点[8]。提示miRNAs在人类肿瘤的发生发展中起重要作用。miR-21的成熟形式亦称作hsa-miR-21或miRNA21，由MIR21基因编码而来。该基因位于染色体正义链17q23.2(55273409～55273480)，与蛋白编码基因TMEM49重叠[9]。miR-21受到多种细胞转录因子或细胞信号调节，其基因转录调节机制复杂。

本研究发现，观察组血清miR-21水平高于对照组，预后不良者血清miR-21水平高于预后良好者，差异均有统计学意义；血清miR-21水平与胃癌患者的组织分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期有关；组织分化程度越低、肿瘤直径越大、有淋巴结转移、临床分期越高者血清miR-21水平越高，与国内外研究报道一致。Chan等[10]研究认为，miR-21在胃癌组织中表达升高，且与胃癌患者的预后、临床病理相关参数有关，提示miR-21可作为胃癌诊断和预后的一项特异性分子标志物。miR-21在胃癌中的可能作用机制：PTEN是继p53之后重要的肿瘤抑制蛋白，而PTEN是miR-21的靶基因，miR-21升高可抑制PTEN表达，从而促进胃癌的发生[11]；miR-21基因的上游有STAT-3结合位点，STAT-3可促进miR-21表达，而STAT-3在肿瘤的病理生理过程中发挥重要作用，STAT-3激活Bcl-2、Bcl-X等抗凋亡基因，延迟细胞的生存周期[12]；幽门螺杆菌感染是胃癌重要病因之一，Chan等[10]研究发现，在幽门螺杆菌感染的胃组织中，miR-21表达升高。而Shiotani等[13]发现，对胃癌患者进行幽门螺杆菌根除治疗后，miR-21水平明显下降。提示miR-21与幽门螺杆菌有一定关联。

综上所述，胃癌患者血清miR-21水平升高，miR-21可能参与胃癌患者的病情进展。

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广西壮族自治区临床重点专科建设项目(Z2012403)。

2017-05-24)