WT1和VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

李 会 王俊杰

(三峡大学仁和医院妇产科，湖北 宜昌 443000)

WT1和VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

李 会 王俊杰

(三峡大学仁和医院妇产科，湖北 宜昌 443000)

目的探讨肾母细胞瘤基因(WT1)和血管内皮生长因子(VEGF)在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法经手术切除的50例原发性上皮性卵巢癌组织标本，另选取同期获得的20例良性卵巢肿瘤组织标本和20例正常卵巢组织标本。采用免疫组化SP法对所有组织标本中的WT1和VEGF表达情况进行测定，并结合患者的病理资料进行综合分析。结果卵巢癌、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织WT1阳性率分别为66.0%、10.0%和5.0%，VEGF阳性率分别为74.0%、30.0%和15.0%。WT1和VEGF均在卵巢癌组织中阳性表达最高(Plt;0.05)；卵巢癌组织中WT1的表达与病理分期、病理分级和病理类型有关(Plt;0.05)，与年龄和淋巴转移无关(Pgt;0.05)；VEGF的表达则与病理分期有关(Plt;0.05)，与年龄、病理分级、病理类型和淋巴转移均无关(Pgt;0.05)；卵巢癌组织中WT1与VEGF的阳性表达呈正相关(r=0.728，Plt;0.05)。结论WT1和VEGF均在上皮性卵巢癌的发生发展和侵袭中起到了重要作用，且两者表达呈正相关，可作为卵巢癌诊断、预后判断的重要指标。

肾母细胞瘤基因；血管内皮生长因子；免疫组织化学；卵巢癌

上皮性卵巢癌早期发病隐匿，无特异性症状且病情进展较快，大部分患者确诊时病情大多已发展至晚期，病死率极高〔1〕。肾母细胞瘤基因(WT1)是从胎儿肾母细胞瘤细胞中分离出的一种转录因子，该基因在肿瘤的浸润与转移过程中也发挥了一定作用〔2〕。血管内皮生长因子(VEGF)是一种能够增加肿瘤血管通透性、促进内皮细胞分裂的物质，能诱导肿瘤血管新生并促使其发展与转移。目前，有关WT1和VEGF在上皮性卵巢癌中的表达及相关性研究报道较少。本研究初步探讨二者在上皮性卵巢癌中组织的表达及临床意义。

1 材料与方法

1.1一般材料 选取三峡大学仁和医院2013年6月至2015年6月经手术切除的原发性上皮性卵巢癌组织标本50例，所有标本经组织病理检查均确诊为上皮性卵巢癌，且患者为首次接受卵巢切除术治疗，术前均未接受过放、化疗，年龄36～67〔平均(51.7±5.3)〕岁，术后根据国际妇产科协会(FIGO)病理分期标准进行分级与分期：病理分级为G1 19例、G2 21例、G3 10例；病理分期为Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期33例；病理类型：浆液性癌31例，未分化癌1例，子宫内膜样癌9例，黏液性癌6例，透明细胞癌3例；发生淋巴转移30例，未发生20例。另选取同期获得的20例良性卵巢肿瘤组织标本，年龄37～67〔平均(51.3±6.1)〕岁，病理类型：卵巢黏液性囊腺瘤10例，卵巢乳头状浆液性囊腺瘤10例；20例正常卵巢组织标本(因子宫良性肿瘤而切除的卵巢组织)，年龄36～66〔平均(51.5±5.8)〕岁。将所有石蜡标本进行连续切片，片厚4～5 μm，并经苏木素-伊红(HE)染色与病理学检查确诊。3组年龄比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)，具有可比性。

1.2主要试剂 采用美国圣克鲁斯生物技术公司生产的鼠抗人WT1单克隆抗体，北京中山生物技术有限公司生产的兔抗人VEGF单克隆抗体试剂盒，合肥康源生物科技研究所的免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色剂，武汉BOSTER公司生产的抗原修复液。

1.3检测方法 使用SP法检测WT1和VEGF，将已知的WT1阳性片和VEGF阳性片作为阳性一抗，并将磷酸盐缓冲液(PBS)替代一抗作为阴性对照，根据SP试剂盒配套说明书严格进行操作。WT1和VEGF工作液浓度均为1∶100。

1.4免疫组化结果判定 WT1阳性表达位于细胞核，呈现清晰的棕黄色颗粒，着色强度明显高于其他非特异性染色细胞；细胞质中呈现棕黄色颗粒表明VEGF阳性表达。根据阳性细胞比例和染色强度计分。阳性细胞比例计分方法：从400倍高倍镜下，随机选取每张切片的5个高倍视野，阳性细胞所占百分比lt;5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，≥76%计4分。染色强度计分方法：未染色计0分，黄色计1分，棕黄色计2分，黄褐色计3分。把两个分数相加，0或1分为阴性(-)，2分为弱阳性(+)，3或4分为阳性()，≥5分为强阳性()，其中+～均为阳性表达。

1.5统计学方法 应用SPSS22.0软件进行χ2检验、Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1WT1、VEGF在不同卵巢组织中的表达 卵巢癌、良性卵巢肿瘤组织中WT1和VEGF的阳性率均显著高于正常卵巢组织，且卵巢癌组织中阳性率显著高于良性卵巢肿瘤组织(Plt;0.05)。见表1。

2.2WT1、VEGF的表达与卵巢癌病理特征相关因素分析 卵巢癌组织中WT1的表达和病理分期、病理分级及病理类型有关(Plt;0.05)，与年龄和淋巴转移无关(Pgt;0.05)；VEGF的表达与病理分期有关(Plt;0.05)，与年龄、病理分级、病理类型和淋巴转移均无关(Pgt;0.05)。见表2。

表1 WT1、VEGF在不同卵巢组织中的表达(n)

与正常卵巢组织比较:1)Plt;0.05；与良性卵巢肿瘤组织比较:2)Plt;0.05

表2 WT1、VEGF的表达与卵巢癌病理特征的关系〔n(%)〕

2.3卵巢癌组织中WT1与VEGF相关性 卵巢癌组织中WT1阳性表达与VEGF阳性表达呈正相关(r=0.728，P=0.035)。

3 讨 论

卵巢癌作为临床上极为常见的一种妇科肿瘤疾病，近年来发病率不断升高，其中尤以上皮性卵巢癌为主〔3〕。WT1基因是一种从肾母细胞瘤中提取出的具有4个锌指结构的转录调节因子，处在瀑式调控体系中，在肿瘤的发生与发展过程中有重要作用。有研究表明，WT1基因能够通过对肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、血小板衍生生长因子B等因子进行调控，从而对机体细胞的各种生理过程进行调节，介导细胞增殖、凋亡，促使新生血管、新生淋巴管形成，并协同相关因子的效应〔4〕。本研究结果表明，WT1在上皮性卵巢癌的发生、发展中起重要作用。WT1的表达情况主要由肿瘤的类型、分化的程度决定，某些基因的突变会使癌基因活化，并通过抑制抑癌基因产物的活性达到增加WT1表达的作用，而WT1的长时间高表达又使WT1持续活化，各种因子则借此参与并推动肿瘤浸润与转移。有研究还显示，WT1能够通过直接改变凝溶胶蛋白、α肌动蛋白等直接改变细胞骨架蛋白，使细胞的形态发生变化，黏附性下降，从而促进细胞迁移〔5〕。

VEGF是具有高度特异性的一种促血管生成因子，能通过促进肿瘤血管新生来加快肿瘤的发展〔6〕。新生血管的形成在肿瘤的生态系统中是一个重要因素，能够加速肿瘤的浸润与转移，其表达水平能够有效反映肿瘤的发生与发展情况〔7〕。本研究结果提示，VEGF促进了上皮性卵巢癌的发生，并可能参与其浸润与发展。笔者认为，在肿瘤组织中VEGF能够刺激血管内皮细胞增生，诱导血管的新生，并增强血管通透性，导致血浆蛋白向外渗出，促使蛋白水解酶生成，降解细胞外基质，从而进一步加快卵巢癌的浸润与转移。本研究还提示WT1和VEGF在卵巢癌的发生与发展中可能起到协同作用。在卵巢癌发生发展的过程中，WT1能够抑制抑癌基因，同时活化癌基因，且其亚型的比例失衡也可能是导致卵巢癌进展的重要因素，所以WT1是反映卵巢癌恶性程度和侵袭性的重要指标。VEGF主要通过诱导肿瘤新生血管形成达到加速卵巢癌进展与转移的目的，同样是判断卵巢癌恶性程度的重要指标。

1张 恒,王宇平,谷 杨,等.不同给药途径的新辅助化疗在晚期上皮性卵巢癌的疗效观察〔J〕.现代生物医学进展,2015;15(1):96-9.

2周 君,刘海玲,陈亦乐,等.VEGF和miR-205及靶蛋白Ezrin和Lamin A/C在卵巢癌中的表达及意义〔J〕.中南大学学报(医学版),2014;39(2):142-50.

3刘星烁,李红雨,赵书君,等.上皮性卵巢癌组织中miR-126、EGFL7的表达与微血管密度的检测〔J〕.郑州大学学报(医学版),2015;50(2):244-7,248.

4劳小斌,刘晓强,邱春嫦,等.WT1在晚期浆液性卵巢上皮癌中的表达及意义〔J〕.中国妇幼保健,2013;28(12):1968-70.

5张彭南,孙 红,蒋红元.miR-483-5p在上皮性卵巢癌中的表达及其对顺铂敏感性的影响〔J〕.中国癌症杂志,2016;26(5):394-8.

6任春霞,徐 娜,宋亚琴,等.癌相关成纤维细胞通过Gro-α激活NF-кB核转位和VEGF表达促进卵巢癌的生长〔J〕.中国癌症杂志,2014;24(5):321-8.

7杨丽娜,吴 娟,赵 静,等.Twist和VEGF在上皮性卵巢癌中的表达〔J〕.西安交通大学学报(医学版),2015;32(3):341-4.

〔2017-04-11修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)

R73

A

1005-9202(2017)22-5609-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.055

国家自然科学基金(No.81302269)

王俊杰(1977-)，女，博士，副主任医师，主要从事妇科肿瘤研究。

李 会(1982-)，女，主治医师，主要从事妇科肿瘤研究。