MTHFR C677T基因多态性与云南省楚雄地区彝族青年脑梗死相关性

李文武

（大理大学第四附属医院神经内一科，云南楚雄 675000）

MTHFR C677T基因多态性与云南省楚雄地区彝族青年脑梗死相关性

李文武

（大理大学第四附属医院神经内一科，云南楚雄 675000）

目的：探讨MTHFR C677T基因多态性与云南省楚雄地区彝族青年脑梗死的相关性。方法：用位点特异性PCR+琼脂糖凝胶电泳方法分别检测脑梗死组68例和对照组30例MTHFR C677T基因型，同时检测血浆Hcy浓度。结果：脑梗死组MTHFR C677T基因TT纯合型、CT杂合型及T等位基因频率均显著高于对照组，且与性别无关；TT纯合型血浆Hcy浓度明显高于CT杂合型及CC野生型，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论：MTHFR C677T等位基因T突变直接影响血浆Hcy浓度；MTHFR C677T基因多态性T等位基因可能是云南省楚雄地区彝族青年脑梗死遗传易感基因。

MTHFR C677T基因；楚雄彝族；青年脑梗死

青年脑梗死是指45岁下成年人发生的脑梗死，约占脑梗死的9．77%。血浆同型半胱氨酸（Homocystcine，Hcy）水平增高是脑梗死重要的独立危险因素〔1〕，目前国内外相关研究认为脑梗死其发病有众多而复杂的遗传和环境因素，基因变异是脑血管病的重要发病因素之一。亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reduc-tase，MTHFR）是Hcy代谢的关键酶，MTHFR C677T基因错义突变可引起此酶缺乏或活性降低，引起高同型半胱氨酸血症，其中C677T位碱基突变最为常见，且TT突变型可能是缺血性脑血管病的独立危险因素〔2〕，且受种族、性别、地区分布、饮食习惯及居住环境等多因素的影响。我国是一个多民族的国家，其饮食习惯、居住环境各不相同，云南省楚雄地区作为全国彝族聚居地区之一，其饮食习惯、居住环境大致相同。本文对云南省楚雄地区68例彝族青年脑梗死患者及30例健康彝族青年进行血浆Hcy含量的测定及MTHFR C677T基因多态性检测，探讨MTHFR C677T基因多态性与楚雄地区彝族青年脑梗死相关性，现报道如下。

1 材料与方法

1．1一般资料病例均选自我科2013年1月至2016年10月收治的彝族青年脑梗死患者68例，年龄18～45岁，平均年龄（40±2．8）岁，男38例，女30例，所有患者均符合第四届全国脑血管病学术会议制定的“脑梗死”诊断标准，并经颅脑CT或MRI检查证实，既往无高血压、糖尿病、高脂血症、心脏病病史及吸烟、喝酒史，并排外甲状腺、免疫系统、凝血功能异常、严重肝病及肾功能不全等疾病，近2周内无特殊药物服用史。另选同期健康彝族青年30例作为对照组，平均年龄（39±3．2）岁，男17例，女13例。两组年龄、性别构成差异无统计学意义（P＞0．05），具有可比性。

1．2方法

1．2．1 血浆Hcy监测 所有受检者清晨空腹采集静脉血3 mL，待全血凝固3 000 r∕min离心10 min，分离血清，采用奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪测定Hcy（正常值5～15 μmol∕L）。所有操作严格按照试剂盒标准操作程序进行，试剂全部在有效期内。

1．2．2 MTHFR C677T基因多态性检测 提取DNA基因组后，以位点特异性PCR+琼脂糖凝胶电泳方法检测MTHFR C677T基因多态性。引物序列设计以NCBI序列为准，基因参考序列号：NC_000001．10，由Invitrogen公司合成。

外周血中DNA提取：EDTA抗凝血采集后按照试剂盒操作说明提取外周血中的全基因组DNA。提取后的DNA经微量核酸定量仪测定其浓度和纯度后进行PCR扩增（2×Taq PCR Master Mix（Tiangen Biotech））。

PCR扩增：提取后DNA经过PCR扩增获取PCR产物。采用9700热循环仪（Applied Biosystems），条件为：94 ℃ 2 min，94 ℃ 30 s；60 ℃ 30 s，72 ℃30 s，40个循环；72℃5 min。扩增片段为chr1：11856205-11856401 197 bp ；chr4：88035964+88036363 400 b进行扩增。扩增反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳（Power300电泳仪BIO-RAD）；BIORAD凝胶成像系统（BIO-RAD）检测。

MTHFR基因分型结果判读：共对7个样本进行MTHFR基因分型，分别进行667C及667T检测，每个反应均设置了内参基因片段的扩增（扩增条带为400 bp），内参基因片段成功扩增时根据对应管中有无目的扩增条带进行MTHFR基因型的判读；每个样本重复检测（对应4个泳道）结果一致时接受，结果不一致时重新检测，7个样本内参基因片段（400 bp条带）均成功扩增，重复检测结果一致时，根据所得结果将所有患者分为CC野生型、CT杂合型、TT纯合型。

1．3统计学处理应用SPSS 17．0统计学软件进行统计分析，所有计量资料均采用卡方检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1血浆Hcy水平检测结果脑梗死组血浆Hcy水平明显高于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。见表1。

表1 脑梗死组与对照组血浆Hcy比较

2．2 MTHFR C677T基因多态性及T等位基因频率分布脑梗死组TT突变型、CT杂合型和T等位基因频率明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0．05）。见表2。不同性别脑梗死组TT突变型、CT杂合型和T等位基因频率差异无统计学意义（P＞0．05）。见表 3。

表2 脑梗死组与对照组MTHFR C677T基因频率比较［n（%）］

表3 脑梗死组不同性别MTHFR C677T基因频率比较［n（%）］

2．3 MTHFR C677T基因多态性与血浆Hcy浓度的关系分析所有受检者MTHFR C677T基因型及血浆Hcy浓度，结果显示TT纯合型血浆Hcy浓度明显高于CT杂合型及CC野生型，差异有统计学意义（P＜0．05）；CT 杂合型血浆Hcy浓度明显高于CC 野生型，差异有统计学意义（P＜0．05）。见表4。

表4 MTHFR C677T基因多态性不同基因型血浆Hcy浓度比较［n（%）］

2．4 MTHFR基因分型结果根据电泳结果将所有患者分为CC野生型、TT纯合型，CT杂合型。见图1～2 。

图1MTHER基因分型结果Ⅰ

图2MTHER基因分型结果Ⅱ

3 讨论

脑梗死是高致残率疾病，中国脑血管病防治指南指出，只有做好一级预防，才能有效降低脑梗死的发病率，因此应高度重视并积极开展脑梗死一级预防的相关性研究。国内外研究表明〔3-6〕脑梗死的独立危险因素包括除了可干预的高血压、糖尿病、高血脂、吸烟等因素外，还包括了不可干预的年龄、性别、种族差异、遗传性因素等危险因素，因此积极开展不可干预危险因素的相关性研究，认真做好一级预防便能显著降低脑梗死的患病率。

高Hcy血症是脑梗死的独立危险因素，其机制目前认为Hcy可直接破坏血管壁弹力层和胶原纤维最终导致血管内皮细胞损伤。Hcy及其衍生物能影响血小板的聚集性，同时促进血栓调节因子的表达，激活蛋白C及凝血因子，促使血小板聚集形成血栓〔7〕。目前研究认为MTHFR C677T基因第4外显子677位点上存在等位基因C和T多态现象，认为等位基因C为野生型，T为突变型。C与T对应氨基酸残基分别为丙氨酸和缬氨酸，缬氨酸取代丙氨酸后使MTHFR稳定性和活性下降，影响了Hcy再甲基化，从而导致Hcy升高〔3〕。本研究MTHFR C677T基因多态性及血浆Hcy浓度检测结果显示，TT纯合型血浆Hcy浓度明显高于CT杂合型及CC野生型；CT杂合型血浆Hcy浓度明显高于CC野生型，差异均有统计学意义（P＜0．05）。国内研究〔8-9〕认为我国北方人群的MTHFR C677T基因多态性及血浆Hcy水平明显高于南方人群，且与种族、遗传背景、生活方式等不同有关，本研究结果与国内〔5-6，9〕和国外〔10〕研究结果报道基本一致，提示MTHFR C677T等位基因T突变直接影响血浆Hcy浓度，这可能是楚雄地区彝族青年脑梗死发生的重要机制之一；楚雄地区彝族青年脑梗死患者MTHFR C677T基因多态性、等位基因T突变率及血浆Hcy浓度是否与其他民族存在种族及地区差异，需要今后进一步完善其他民族的相关研究资料进行对比分析总结。

研究结果显示，脑梗死组和对照组MTHFR基因多态性TT纯合型基因突变率分别为33．82%、13．33%；T等位基因频率分别为60．29%、33．33%，两组比较差异有统计学意义（P＜0．05），其结果与国内〔9，11-12〕和国外〔10〕报道结果比较相对偏低；导致该研究结果偏低可能与本研究样本量相对较少以及检测方法不同有关，需今后扩大样本量进一步深入研究。研究结果表明不同性别脑梗死组TT突变型、CT杂合型和T等位基因频率差异无统计学意义（P＞0．05），提示MTFHR基因多态性及等位基因T突变率与楚雄地区彝族青年脑梗死患者性别无关。其研究结果表明MTHFR C677T基因多态性T等位基因可能是楚雄地区彝族青年脑梗死遗传易感基因。

亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸代谢过程中的关键酶，在叶酸代谢过程中起到重要的作用，在临床工作中通过MTHFR C677T基因多态性检测，对于携带MTHFR C677T基因突变型（TT纯合型和CT杂合型）的人群建议补充一定剂量的叶酸和B族维生素早期进行干预，提高酶活性，维持正常的血浆Hcy代谢浓度，不仅可以降低由于高Hcy血症所致的血管壁损害导致脑梗死并发症的发生，而且还为楚雄地区彝族青年脑梗死一级预防及临床个体化治疗方案的确立提供了重要的理论基础依据。

综上所述，MTHFR C677T等位基因T突变直接影响血浆Hcy浓度；MTHFR C677T基因多态性T等位基因可能是楚雄地区彝族青年脑梗死遗传易感基因；该基因检测为楚雄地区彝族青年脑梗死一级预防及临床个体化治疗方案的确立提供了重要的理论基础依据。

〔1〕吴华彰，赵云利，王玉珏，等．安徽蚌埠地区汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性〔J〕．包头医学院学报，2011，27（2）：5-6．

〔2〕袁利和，黄维星．亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与脑梗死的相关性研究〔J〕．包头医学院学报，2013，29（4）：11-13．

〔3〕LYDEN P D．In anticipation of international stroke trial-3（IST-3）〔J〕．Stroke，2012，43：1691-1694．

〔4〕WARDLAW J M，MURRAY V，BERGE E，et al．Recombinant tissueplasminogenactivatorforacuteischaemic stroke：an updated an updated systematic review and meta-analysis〔J〕．Lancet，2012，379：2364-2372．

〔5〕肖湘雪，白树风．MTHFR基因多态性与脑卒中的关系研究〔J〕．中国实验诊断，2012，16（7）：1311-1313．

〔6〕李文武．急性脑梗死TOAST分型尿激酶静脉溶栓治疗198例临床疗效分析〔J〕．大理大学学报，2017，2（4）：41-45．

〔7〕杨庆河，常万生．脑梗死患者血清同型半胱氨酸水平变化及其与预后的关系〔J〕．山东医药，2013，53（29）：46-47．

〔8〕王春霞，张铁华．急性脑梗死患者血浆同型半胱氨酸、尿酸及血脂水平的变化〔J〕．检验医学，2015，30（3）：303-304．

〔9〕李蕊，杨柳，苏明权，等．MTHFR基因多态性及血浆同型半胱氨酸水平与心脑血管疾病的相关性分析〔J〕．检验医学，2016，31（10）：922-924．

〔10〕THEY T P，NADIFI S，RAFAI M A，et al．Methylenehydrofolate reductase（C677T） polymorphism and large artery ischemic stroke subtypes〔J〕．Acta Neurol Scand，2011，123（2）：105-110．

〔11〕李文帆，张华，范玉佳，等．Hcy及MTHFR C677T基因多态性与河南汉族脑梗死的关系〔J〕．中风与神经疾病杂志，2014，31（6）：510-513．

〔12〕高波，陈杰，余宗涛，等．脑梗死患者MTHFR C677T基因多态性检测的意义〔J〕．贵州医药，2016，40（5）：476-477．

（责任编辑 董 杰）

Association between MTHFR C677T Gene Polymorphism and Cerebral Infarctino in the Yi Nationality Youth in Chuxiong

Li Wenwu
（Department of Neurology,The Fourth Affiliated Hospital of Dali University,Chuxiong,Yunnan 675000,China）

Objective：To study the relationship between MTHFR C677T gene polymorphism and cerebral infarctino in the Yi nationality youth in Chuxiong．Methods:The site-specific DNA Nnogxing method was used to detect MTHFR C667T gene in the experimental group of 68 cases with cerebral infarctino and the control group of 30 cases．Plasma Hcy concentrations were also measured．Results:The homozygous MTHFR C677T gene of TT and CT allele frequency of T in the group of cerebral infarcation was significantly higher than that of the control group,and the result had nothing to do with gender．TT plasma Hcy concentration was significantly higher than that of CT heterozygous and wild-type CC．The differences were statistically significant（P＜0．05）．Conclusion:MTHFR C677T allele T mutation directly affects plasma Hcy concentration;MTHFR C667T gene polymorphism T allele may be a genetic susceptibility gene of cerebral infarction in the young Yi people in Chuxiong area．

MTHFR C667T gene;Yi people Chuxiong;the youth cerebral infarction

R743．32

A

2096-2266（2017）10-0039-04

10．3969 ∕j．issn．2096-2266．2017．10．010

2017-03-21

李文武，副主任医师，主要从事神经内科临床研究．