六斑刺鲀人工育苗技术研究

岳彦峰， 彭士明， 张晨捷， 高权新， 施兆鸿， 夏连军， 王 伟

(农业部东海渔业资源开发利用重点实验室，中国水产科学研究院东海水产研究所，上海 200090)

六斑刺鲀人工育苗技术研究

岳彦峰， 彭士明*， 张晨捷， 高权新， 施兆鸿， 夏连军， 王 伟

(农业部东海渔业资源开发利用重点实验室，中国水产科学研究院东海水产研究所，上海 200090)

六斑刺鲀是一种极具养殖开发潜力的经济鱼类，广泛分布于我国东南沿海，本文研究了六斑刺鲀的人工育苗技术。2017年于海南琼海潭门收购性成熟的六斑刺鲀亲鱼，运回至实验基地进行人工驯养，亲鱼在营养强化培育后，自然产卵受精，将受精卵置于水泥池中进行孵化，得到的初孵仔鱼直接在孵化池中进行培育。在水温29.0～31.0 ℃、盐度30.0～32.0条件下，受精卵经80 h左右孵化出膜，初孵仔鱼全长约3.1 mm。初孵仔鱼第2 d开口摄食，可以投喂营养强化后的轮虫以及卤虫无节幼体为主；第4 d时，改投1 mm以下小规格的桡足类以及卤虫无节幼体；第10 d时，可以投1 mm以上大规格的桡足类；第15 d发育至稚鱼时，投喂南美白对虾的无节幼体以及2 mm左右的丰年虫；第20 d时，投喂5 mm以上的丰年虫；第35 d发育至幼鱼时，适量投喂虾肉糜和鱼宝颗粒饲料，使六斑刺鲀幼鱼逐渐转化为摄食人工饲料。经约40 d 培育，获得全长2.0～2.6 cm的六斑刺鲀幼鱼。育苗成活率为5～6%。

六斑刺鲀； 驯化； 仔鱼； 人工繁殖

六斑刺鲀(Diodonholocanthus)隶属于鲀形目(Tetraodontiformes)，刺鲀科(Diodontidae)，刺鲀属(Diodon)，俗名气瓜仔、刺龟等；分布较广，在我国各海域均有分布，栖息于岩礁区之浅水域，不善游泳，行动缓慢[1-2]。肉食性，坚硬的颌齿可咬碎贝类、棘皮动物及螃蟹等无脊椎动物。六斑刺鲀肉质鲜美，鱼皮富含胶原蛋白，深受市场欢迎，最高时可达200～240元/kg。近年来，六班刺鲀因其具有食用、药用及观赏等价值而越来越受到关注，市场潜力巨大。目前六斑刺鲀来源全部为捕捞，天然资源也因过度捕捞呈锐减趋势[3]，而且其人工养殖和繁育技术研究也较少[4-5]。本研究通过在海南收集活的亲本，通过人工驯养，成功获得受精卵，并孵化培育出幼鱼，已初步摸清了六斑刺鲀亲本人工驯养的技术方法以及人工繁育技术。

1 材料与方法

1.1亲鱼来源与培育

亲鱼来源于海南琼海潭门渔港收购渔民捕捞的野生亲鱼。亲鱼培育期间每天定点定时投喂两次，投喂饵料为鲜活的蛏子或者蛤类，饱食投喂。养殖期间水温27.5～30.0 ℃，pH 7.8～8.2，盐度29.0～32.0‰，溶氧保持>5 mg/L。

1.2受精卵获得及孵化

亲本经人工驯养后，成熟亲鱼会在产卵季节(5～9月)每月上中旬的晚上自然产卵，为浮性卵，次日用100目的筛绢网收集受精卵；将收集后的受精卵用新鲜海水和纱网反复清洗干净并去除杂质以及死卵；1 ppm甲醛杀菌10 min后放入孵化池(3 m×4 m×1.2 m)内孵化，受精卵密度为5 000 粒/m3。

1.3开口饵料筛选

在苗种培育期间进行了轮虫、卤虫无节幼体、轮虫+卤虫无节幼体、轮虫+卤虫无节幼体+微囊悬浮饲料BP+车元配合饲料四种不同开口饵料以及培育过程中添加VC与EM菌对初孵仔鱼成活率影响的研究。不同投喂饵料以及添加VC与EM菌对初孵仔鱼成活率的影响试验开始时间均为初孵仔鱼第2 d；两个试验周期均为35 d；两个试验每组均设3个平行，每个平行100尾初孵仔鱼，待初孵仔鱼发育为幼鱼时分别统计各自的成活率，数据以平均值±标准误( mean±SE) 表示，试验结果用SPSS13软件进行统计与分析，采用Duncan氏检验进行多重比较，P<0.05即认为有显著性差异。

1.4苗种培育

初孵仔鱼前3d投喂经营养强化的轮虫(7～8 个/mL)，卤虫无节幼体(3～5 个/mL)，同时添加1 ppm的BP(一种微囊悬浮饲料)，1 ppm车元(一种人工配合颗粒饲料)。

初孵仔鱼生长到第4 d时，改投1 mm以下小规格的桡足类和卤虫无节幼体，池内桡足类和卤虫无节幼体密度维持3～5个/mL，同时添加 1 ppm的BP，1ppm车元。

初孵仔鱼生长到10天时，投喂1 mm以上大规格的桡足类(或者大型枝角类，例如蒙古裸腹溞)，以及营养强化后丰年虫，饵料密度维持3～5 个/mL。

第15d左右，初孵仔鱼发育至稚鱼期，此时可投喂南美白对虾的无节幼体以及2 mm左右的丰年虫；第20 d时，可投喂5 mm以上的丰年虫以及10 mm以下的南美白对虾虾苗。第35天左右，发育至幼鱼期，可适量投喂虾肉糜和鱼宝颗粒饲料，使六斑刺鲀幼鱼逐渐转化为摄食鱼宝颗粒饲料。

换水操作：初孵仔鱼入池第1天至第3天一般不换水或少量换水，换水量不宜超过20%，第4天以后可以逐渐加大换水量至50%左右，在仔鱼发育成稚鱼及幼鱼阶段，换水量可以增大至80%左右，以后慢慢换水改成流水饲养，流速50～80 L/min，池底垃圾要及时吸出。苗种培育期间池内可泼洒1ppm的VC用以提高苗种免疫力及抗应激能力以及0.5 ppmEM菌用以改善水质。在改为流水培育之前的育苗过程中，育苗池需每天加入微绿球藻，使水色保持淡绿色，定时测池内亚硝酸盐含量，池内亚硝酸盐含量控制在0.3 mg/L以下。

育苗海水经砂滤，水质符合我国《海水水质标准》 ( GB3097—1997 ) 中一类海水，孵化盐度30.0～32.0，温度29.0 ～31.0℃，pH 7.8～8.2，溶氧保持>5 mg/L。每m20.5个充气头，光照强度控制在5 000 lx～10 000 lx。

每天检查育苗池内饵料生物量，观察仔、稚、幼鱼的生活习性，摄食情况以及形态变化。

2 育苗结果

2.1亲鱼驯养

研究期间共收集野生六斑刺鲀亲鱼641尾，驯养成活率90.3%，可见野生六斑刺鲀亲鱼在人工驯养环境下具有较高的存活率。

表1 六斑刺鲀亲鱼人工驯养情况Tab.1 Domestication of brood fish

2.2受精卵孵化与苗种培育

研究期间共有2批较大规模自然产卵，共获受精卵32.0万粒，平均受精率60.0%。六斑刺鲀受精卵在水温29.0～30.0 ℃、盐度 30.0～32.0的条件下，经过约84 h孵出出膜，平均孵化率30.9%，共获初孵仔鱼5.5万尾(表2)。两批受精卵的受精率在60%左右，孵化率都低于50%，两批人工育苗的结果显示，培育的幼鱼数量不多，育苗的成活率在5%左右。

表2 两批受精卵的受精、孵化情况及对应苗种数量Tab.2 Fertilization and hatching of fertilized eggs

图1 六斑刺鲀全长与日龄关系Fig.1 Relationship between length and daily age

由图1可知，前15 d生长曲线比较平缓，初孵仔鱼生长比较缓慢，15 d后生长曲线呈明显的升高趋势，仔鱼生长速度逐渐加快。

表3 不同开口饵料对仔鱼成活率的影响Tab.3 Effects of initial feedingon survival rate of larvae

注：不同上标字母表示具有显著性差异(P< 0.05)

Note: Different letters indicate significant differences from each other groups (P< 0.05)

如表3所示，从不同开口饵料仔鱼成活率情况可知，苗池中7～8个/mL轮虫密度、3～5 个/mL卤虫无节幼体密度、及1 mg/L的BP、1 mg/L车元处理组仔鱼成活率为最高，显著高于其它处理组(P< 0.05)。

如表4所示，正常培育处理组与额外添加VC、EM菌处理组仔鱼成活率的情况。由表4可以看出，VC与EM菌的添加可显著提高仔鱼的成活率(P< 0.05)。

表4 VC与EM菌处理对刺鲀仔鱼(孵化后9 d)成活率的影响Tab.4 Effects of feed fortified with VCand EM on survival rate of larvae

注：*表示显著性高于对照组(P< 0.05)

Note: *indicates significant differences between experimental group and the control group (P< 0.05)

3 讨论

3.1六斑刺鲀亲鱼驯养

人工育苗技术一般包括野生原种的驯化、亲鱼培育、疾病防治、营养添加、促生长、促性腺发育产卵孵化、鱼苗培育以及生物饵料培养、营养强化等一些过程[5]。为了提供足够的优质苗种，培养亲鱼产生优质的卵子显得尤为重要，亲鱼的来源有两种途径：一是海捕，二是保种、留种或者引种[6]。六斑刺鲀人工繁育技术在国内尚属空白，因此采用了海捕亲本。

一般在驯化野生亲本时要考虑其生长环境、食性和繁殖等生物学特性，并且驯化阶段、饵料和驯化环境对驯化成功率的影响很大[7-8]。本次亲本驯化属于初次尝试，存在着一些问题，六斑刺鲀亲鱼驯化期间，死亡数量较多的阶段主要集中在前15 d。推测其原因为：第一，刚刚运回的亲鱼由于运输过程中受到刺激，产生应激反应致死；再者，在驯化过程中饵料转化阶段，有些亲鱼不能从野生饵料转化为人工投喂的饵料，不摄食，饥饿而死，因此合理设计饲料投喂配方显得尤为重要；最后就是驯养亲鱼密度不宜太高，密度过高病害增多，致使亲鱼死亡，因此应当选择体质健硕的个体、尽量模仿天然水域环境，减少养殖密度[9]。

3.2受精率和孵化率

鱼卵质量很大程度上决定了卵子的成活率和出膜率，亲鱼的培育直接影响鱼卵和鱼苗质量[10-11]。日本学者研究发现，5月份以后，水温在23 ℃以上，便可观察到性成熟的六斑刺鲀有互相追尾和产卵的行为[12]。孵化率受水温及盐度等外界环境影响比较大，而内在因素如精、卵成熟度及受精率是关键影响因子。其他鲀类受精卵研究人员也进行过相关研究，比如在水温 18.6～21.5 ℃ 条件下，暗纹东方鲀约139 h，而弓斑东方鲀约为169 h，与本研究中的六斑刺鲀孵化时间有很大差异，原因可能是鱼种类不同或者受不同孵化温度的影响，在适宜孵化温度条件下，温度越低孵化时间越长。此次试验受精卵全部为亲鱼在人工驯养环境下自然产卵，受精率以及孵化率都不是很高，分析原因可能是野生亲鱼对人工养殖环境不能在短期内完全适应，加之人工驯化方法还有待改进，导致雌雄性成熟的同步性较差，雌鱼产卵时，雄鱼性腺成熟度不高，精子质量较差，受精率较低。

另外，刺鲀卵为浮性卵，浮在水面后聚成一片，略有粘性，孵化时可采用充气增加水流，以避免粘连和堆叠造成卵霉，影响孵化率[13]。

3.3初孵仔鱼培育

六斑刺鲀初孵仔鱼全长2.84 mm左右，个体相对于鲀科鱼类中尚属较小，因此其育苗要较鲀科鱼类复杂，暗纹东方鲀育苗技术现已比较成熟，初孵仔鱼开口培育阶段中投喂初孵丰年虫便可获得较大的成活率[15]。六斑刺鲀鱼开口时口裂(1.1～1.3 mm)相对一般海水鱼类略大，卤虫幼体(0.4～0.6 mm)或者规格较小(0.5～0.7 mm)的桡足类完全能被吞咽。但即使稚鱼可以摄食卤虫幼体，但仔鱼阶段的培育死亡率仍比较高。在对死亡的仔鱼进行解剖后，在镜检观察时发现，死亡仔鱼消化道都空空如也，说明从内源性营养到外源性开口饵料转化没有成功，致死原因不排除外界环境条件和初孵仔鱼本身的质量问题。相比于东方鲀，六斑刺鲀人工繁育技术与其人工繁育技术还是存在一定的不同之处，具体机制还需后期进行深入的研究[15]。另外，在苗种培育中，做到饵料转换时的适度重叠，以符合仔鱼摄食行为和饵料适口性转换的过渡性需要，提高苗种成活率[16]，提高初孵仔鱼的成活率尚需进一步研究，可以从开口饵料的多元化、培育过程中加入VC以及EM菌来提高仔鱼的成活率。

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ArtificialpropagationtechniqueofDiodonholocanthus

YUE Yan-feng, PENG Shi-ming*, ZHANG Chen-jie, GAO Quan-xin, SHI Zhao-hong, XIA Lian-jun, WANG Wei

(KeyLaboratoryofEastChinaSeaFisheryResourcesExploitation,MinistryofAgriculture;EastChinaSeaFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Shanghai200090,China)

Porcupine puffers (Diodonholocanthus) are distributed widely in the southeast coast of China, and they are regarded as a significant commercial fish species with high economic potential. The paper explored the artificial propagation technique ofD.holocanthus. At breeding season of 2017, we purchased some matureD.holocanthusfrom Tanmen dock, Hainan Province, and then transported them to experimental base for domestication. Brood fish spawned naturally after nutrient enrichment culture. Fertilized eggs were transferred into cement ponds for hatch. And hatched larvae were cultivated in the cement ponds. Fertilized eggs would hatch in about 80 hrs under ambient temperature (29.0 -31.0 ℃) and salinity (30.0-32.0). Length of hatched larvae was about 3.1 mm. At 2 days after hatch, larvae were fed with rotifer and artemia nauplii. After 4 days, larvae were fed with copepod and artemianauplii with size smaller than 1mm. After 10 days，larvae were fed with copepod with size bigger than 1mm.Penaeusvannameinauplii and 2mm copepod could be fed at 15 days after hatch when the fish entered the larval stage. After 20 days ,the size of food organism could be bigger than 5mm. After 35 days, shrimp meat and pellet could be fed when the fish entered the juvenile stage. Then the fish were gradually transformed into feeding pellets. After 40 days of artificial cultivation, we acquiredD.holocanthusjuvenile whose sizes were 2.0-2.6 cm. Survival rate of fry during studies on artificial propagation was 5%-6%.

Diodonholocanthus；domestication；larvae；artificial propagation

2095-3666(2017)04-0290-05

10.13233/j.cnki.fishis.2017.04.009

2017-09-20

2017-10-18

中央级公益性科研院所基本科研业务费(1910-2017)

岳彦峰(1985-)，助理研究员，主要从事海水鱼类繁育生物研究。E-mail：492431429@qq.com

彭士明，博士，副研究员。E-mail: shiming.peng@163.com

S 962.2

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