三种不同干燥方式对金银花活性成分与抗氧化性的影响

宋梦璐,蓝孝浩,陈潇潇

(山东中医药大学,山东 济南 250355)

三种不同干燥方式对金银花活性成分与抗氧化性的影响

宋梦璐,蓝孝浩,陈潇潇

(山东中医药大学,山东 济南 250355)

目的:探究不同干燥方法对金银花中活性成分的含量与抗氧化性的影响。方法:采用阴干、烘干、晒干三种方法对金银花进行干燥,用紫外分光光度法测定总酚酸、总黄酮的含量,以总还原力、DPPH清除率、·OH清除率为指标比较不同干燥方法对金银花抗氧化性的影响。结果:烘干金银花中总酚酸及黄酮含量最高,分别为6.23±0.28mg/g、6.90±0.28mg/g,晒干药材中总黄酮、总酚酸含量最低。所测定的三种抗氧化性指标中,总还原力以烘干药材最强;阴干药材DPPH自由基清除率最强,烘干与阴干药材间的清除率无显著性差异;·OH清除率同样以阴干药材最高,烘干次之;总还原力与总酚酸、黄酮含量呈显著正相关。结论：综合考虑干燥效率及活性成分含量、抗氧化性三个方面,烘干干燥应在金银花产区进行大力推广。

金银花;干燥方式;总酚酸;总黄酮;抗氧化性

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thumb.的干燥花蕾或带初开的花,为我国常用大宗商品药材,具有清热解毒、疏散风热的功效,主要用于痈肿疔疮,喉痹,丹毒,热毒血痢,风热感冒等疾病的治疗。现代研究表明,金银花富含黄酮类、酚酸类、环烯醚萜类、皂苷类等多种成分,具有抗菌、抗病毒、抗氧化、保肝等多种药理活性。

金银花需求量大,为满足需求,在山东、河南、河北、陕西等地广泛种植,产地不同,其产地加工方法存在一定差异,山东多采用晒干,河南、河北多采用烘干,烘干又分为炉火烘干、杀青烘干等,而传统上金银花多采用阴干,如李时珍在《本草纲目》中记载"四月采花,阴干"。对于这三种产地加工方法对药材质量的影响,我国学者从加工后药材性状、活性成分含量等方面进行了比较研究,而查阅目前文献,针对这三种干燥方式下金银花药材的抗氧化性差异比较未见相关报道。本文拟采摘同一农家品种金银花大白期花蕾,分别采用阴干、晒干、烘干的加工方法进行干燥,比较三种不同干燥方式下金银花药材总酚酸、总黄酮含量及其抗氧化性的差异,旨在揭示不同产地加工方法对金银花药材质量的影响,并试图从干燥方式差异上揭示三个不同产地间药材质量差异的原因。

1 材料、仪器与试剂

1.1 材料

于2016年5月金银花一茬花期间采摘山东中医药大学药用植物园忍冬种质资源圃中同一忍冬农家品种“大毛花”大白期花蕾,分别采用阴干(阴凉通风处干燥)、晒干(阳光下曝晒)和烘干(自制烘干机)的干燥方式进行干燥加工,干燥后的药材性状均符合《中国药典》(2015版一部)之规定。干燥后的药材经鉴定为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thumb.的干燥花蕾或带初开的花。

1.2 仪器

UV 5100B型紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司),KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),德国Eppendorf 5810R冷冻型台式大容量高速离心机(德国Eppendorf公司),HH-1数显恒温水浴锅(常州博远实验分析仪器厂),LE204E/02电子天平(梅特勒-多利多仪器(上海)有限公司)。

1.3 试剂

绿原酸标准品(批号:15112301,购自上海源叶生物科技有限责任公司),芦丁标准品(批号:100080-200707,购自中国食品药品检验研究院),其他试剂均用分析纯。

2 实验方法

2.1 不同干燥方法金银花总酚酸的含量测定

2.1.1 供试品溶液的制备

取药材粉末约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇25mL,称重,超声提取30min,放冷,称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,滤过,将滤液定容到25mL容量瓶中,即得供试品溶液,低温保存备用。

2.1.2 对照品溶液的制备

取绿原酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每mL含0.1982mg的溶液,即得。

2.1.3 总酚酸的含量测定

参照文献[2],精密量取绿原酸对照品溶液0.25,0.5,0.75,1.0,1.25,1.5mL,加无水乙醇至5mL,加0.3%十二烷基硫酸钠溶液2mL及0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾(1∶0.9)混合溶液1mL,混匀,在暗处放置5min,用0.1mol·L-1盐酸溶液定容至25mL,以显色剂0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾为空白,在740nm处测定吸光度A。以绿原酸的质量浓度为x,吸光度值为y,绘制标准曲线,得线性回归方程y=0.2013x-0.2575(R2=0.9976)。结果表明,绿原酸在1.982～11.892μg·mL-1与吸光度A呈良好的线性关系。精密量取2.1.1项下供试品溶液1.5mL按上述步骤进行测定,重复测定3次,根据线性回归方程得出样品中总酚酸的含量(mg·g-1)。

2.2 不同干燥方法金银花总黄酮含量测定

2.2.1 供试品溶液的制备

制备方法同2.1.1。

2.2.2 对照品溶液的制备

取芦丁对照品适量,精密称定,加甲醇制成每mL含0.3012mg的溶液,即得。

2.2.3 总黄酮的含量测定

参照文献[3],采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色体系法,以芦丁为对照品测定总黄酮含量。精密量取芦丁对照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1mL,依次加入蒸馏水2mL,5%亚硝酸钠0.5mL,振荡后静置6min,加入10%硝酸铝0.5mL,振荡后静置6min,然后加入5%氢氧化钠2.5mL,振荡后静置15min,最后用蒸馏水定容至10mL,在510nm处测定吸光度A。以芦丁浓度为x,吸光度值为y绘制标准曲线,得回归方程y=0.0087x+0.01(R2=0.9912)。结果表明芦丁在3.012～30.12μg·mL-1与吸光度呈良好的线性关系。精密量取2.2.1项下供试品溶液0.5mL,以蒸馏水为参比,按上述步骤进行测定,重复测定3次,根据线性回归方程计算总黄酮含量。

2.3 不同干燥方法对抗氧化性的影响

2.3.1 总还原力的测定

参照文献[4],采用铁氰化钾还原法。取2.1.1项下供试品溶液1mL,用70%乙醇补足至5mL,分别加入0.2mol·L-1磷酸缓冲液(pH值6.6)0.75mL及质量分数1%的铁氰化钾溶液0.75mL,于50℃保温10min,快速冷却,再加入10%三氯乙酸溶液0.75mL,以4000r·min-1离心10min,取上清液1mL,依次加入蒸馏水4mL、0.1%三氯化铁溶液0.5mL,摇匀,静置10min后在700nm下测其吸光度值。

2.3.2 DPPH清除率的测定

参照文献[4],在试管中加入DPPH·溶液(0.04mg·mL-1)2mL,供试品溶液0.5mL,摇匀,避光静置30min,以70%乙醇为参比在517nm处测量吸光度A样品。用70%乙醇代替供试品溶液,测定对照吸光度A对照。样品对DPPH的清除率E(%)=(1-A样品/ A对照)×100。

2.3.3 ·OH自由基清除率的测定

参照文献[4],采用邻二氮菲-Fe2+法测定。精密移取0.2mol·mL-1磷酸缓冲溶液(pH值7.4)2mL, 5mmol·L-1邻二氮菲溶液0.75mL,7.5mmol·L-1FeSO4溶液和0.5mL蒸馏水1mL于试管中,混匀作未损伤管,置于37℃水浴反应60min,在536nm处测其吸光度值A未损;损伤管用1% H2O20.5mL代替0.5mL蒸馏水,其余同未损伤管,测定吸光度值A损;样品管用0.5mL供试品溶液和1% H2O20.5mL代替1mL蒸馏水,其余同未损伤管测定吸光度值A供。·OH清除率(%)=(A供-A损)/(A未损-A损)×100。

2.4 数据处理与分析

数据统计分析采用SPSS 17.0进行处理,采用方差分析进行Duncan's多重比较分析,显著水平为Plt;0.05;相关性分析采用Pearson's法。

3 结果与分析

3.1 不同干燥方法对总酚酸与总黄酮含量的影响 结果见图1。

图1 不同干燥方式金银花总酚酸与总黄酮的含量

由图1可见,三种不同干燥方式金银花药材中总酚酸与总黄酮含量均以烘干方式为最高,晒干方式为最低。烘干方式中总酚酸含量为6.23mg·g-1,烘干与阴干间无显著性差异,晒干方式总酚酸含量仅为5.69mg·g-1;烘干方式中总黄酮含量为6.90mg·g-1,晒干方式总黄酮含量为5.70 mg·g-1。

3.2 不同干燥方法对抗氧化性的影响

图2 不同干燥方法金银花总还原力比较

抗氧化剂是通过自身的还原作用给出电子而清除自由基[4],还原力越强,抗氧化性越强。如图2所示,不同干燥方法金银花药材总还原力存在显著性差异,其大小顺序为：烘干gt;阴干gt;晒干,即烘干的抗氧化性最强,晒干的抗氧化性最弱。

图3 不同干燥方法金银花DPPH清除率(A)与OH清除率(B)的比较

DPPH自由基在有机溶剂中是一种稳定的自由基,在517nm附近有强吸收峰,当DPPH自由基清除剂与DPPH自由基的孤对电子结合时,吸收会减弱,以此可以判断清除剂的清除活性[4]。如图3A所示,不同干燥方法金银花药材间DPPH清除率的大小顺序为:阴干gt;烘干gt;晒干,阴干处理DPPH清除率最高为87.52%,阴干与烘干干间无显著性差异。如图3B所示,不同干燥方法金银花药材间·OH自由基清除率存在显著性差异,其大小顺序为:阴干gt;烘干gt;晒干,阴干清除率最高为25.10%,晒干清除率仅为13.57%。

3.3 抗氧化性与总酚酸、总黄酮含量的相关性

表1 不同干燥方法金银花总酚酸、总黄酮含量与抗氧化性活性的相关性分析

注:*Plt;0.05显著相关,**Plt;0.01显著相关。

不同干燥方法金银花的三种抗氧化性指标与总黄酮、总酚酸含量之间的相关性见表1。由表1可见,总还原力与总酚酸、总黄酮含量之间呈极显著正相关(Plt;0.01),DPPH清除率与总酚酸及总黄酮含量之间相关性不显著,·OH清除率与总酚酸含量呈显著相关,与总黄酮含量之间相关性不显著。

4 讨论与结论

《千金翼方》曾述:"夫药采取,不以阴曝干,虽有药名,终无药实",这里的"终无药实"即是指由于缺少干燥过程,或不依药材性质选择适当干燥方法而导致药材品质欠佳,表明了干燥方式对药材品质形成的重要性。本文研究结果表明,阴干、晒干、烘干三种干燥方式相比,就总黄酮和总酚酸来说,以烘干的药材含量最高,阴干次之,晒干药材含量最低。所测定的三种抗氧化性指标中,总还原力也以烘干药材最强;DPPH自由基清除试验结果表明,阴干药材清除率最强,而烘干与阴干药材间的清除率无显著性差异;·OH清除率同样以阴干药材最高,烘干次之。就干燥所用时间来讲,阴干所需时间相对较长,即便是天气比较晴朗的情况下,将新采摘的金银花置于阴凉、通风干燥处仍需要5～7天时间,若遇上阴雨天气,由于空气湿度较大,药材阴干所需时间会更长;晒干亦受天气情况影响,若遇上阴雨天干燥不及时,药材会霉烂、变质,降低商品等级,甚至导致失去药效;而烘干,是目前金银花河南、河北产区应用最多的一种干燥方式,干燥效率较高,如本次实验过程中采用自制干燥机械,整个的干燥程序仅为24小时。综上所述,综合考虑药材质量、抗氧化性指标的测定结果及干燥效率来讲,我们认为烘干干燥应在金银花产区进行大力推广。

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(本文文献格式：宋梦璐,蓝孝浩,陈潇潇.三种不同干燥方式对金银花活性成分与抗氧化性的影响[J].山东化工，2017，46(20)：89-91.)

EffectsofThreeDifferentDryingMethodsonActiveConstituentsandAntioxidantActivityofLonicerajaponica

SongMenglu,LanXiaohao,ChenXiaoxiao

(ShandongUniversity of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,China)

Objective:To study different drying methods on the content of active consituent and antioxidant activity of the Lonicerae japonicaFlos.Methods: The Lonicerae japonicaFlos was dried by three method including shading drying,sun drying and baking drying; the total phenolic acid and total flavonoid was determined by the method of UV spectrophotometry; the antioxidant activity was measured by the index including total reduction,DPPH scavening rate and·OH scavening rate.Results: The results showed that the total phenolic acid and total flavonoids of the samples dried by baking drying are highest up to 6.23±0.28mg/gand 6.90±0.28mg/g respectively;However,treatments of sundryingexhibited the lowest.Determination of three kinds of antioxidation indexes ,the reducing power is the strongest by baking drying,the DPPH scavening rate is the highest by shading drying and there was no significant difference in clearance between baking drying and shading drying.Similarly,the·OH scavening rate is the highest by shading drying followed by baking drying.The total reduction was positively correlated with the content of the total phenolic acid and flavonoids.Conclusions:The baking drying should be popularized in Lonicerae japonicaFlos region considering the drying efficiency , the content of active component and the antioxidant properties.

Lonicerae japonica Flos; drying methods; total phenolic acid; total flavonoids; antioxidant activity

2017-08-17

宋梦璐(1996—)，女，中药学专业，大学本科在读。

R284;TQ461

A

1008-021X(2017)20-0089-03