枸杞多糖对甲醛致小鼠睾丸组织氧化损伤和酶活性的影响

孙晶，常会忠，张立群，张小蕾＊

（1.山西省长治市人民医院，山西 长治 046000；2.贵州医科大学医学检验学院，贵州 贵阳 550025）

枸杞多糖对甲醛致小鼠睾丸组织氧化损伤和酶活性的影响

孙晶1，常会忠1，张立群1，张小蕾2＊

（1.山西省长治市人民医院，山西 长治 046000；2.贵州医科大学医学检验学院，贵州 贵阳 550025）

目的观察枸杞多糖（LBP）对甲醛（FA）致雄性小鼠睾丸组织氧化损伤和酶活性的影响。方法健康雄性昆明种小鼠96只，随机分为8组，FA低、中、高［0.2 mg/(kg.d)、2.0 mg/(kg.d)、20 mg/(kg.d)］剂量组，LBP低、中、高［50 mg/(kg.d)、100 mg/(kg.d)、200 mg/(kg.d)］剂量拮抗组，阳性对照组［环磷酰胺50 mg/(kg.d)］和阴性对照组（生理盐水）。FA染毒组和阴性对照组腹腔注射，每天1次，连续14 d，阳性对照组腹腔注射，隔天1次，共14 d。LBP拮抗组腹腔注射高剂量FA，同时灌胃LBP溶液，每天1次，连续14 d。给药结束后，处死小鼠，测定小鼠睾丸组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量、葡萄糖6磷酸脱氢酶（G-6-PD）和山梨醇脱氢酶（SDH）活性。结果FA染毒组睾丸组织SOD下降，MDA含量增高，LBP组较FA染毒组SOD升高，MDA含量下降；FA染毒组睾丸组织G-6-PD、SDH活性降低，LBP中、高剂量组均明显增高。结论FA染毒雄性小鼠致睾丸组织氧化损伤和标志酶活性下降，LBP可能通过抗氧化作用减轻睾丸组织氧化损伤，提高标志酶活性。

甲醛；枸杞多糖；雄性小鼠；生殖毒性；氧化损伤

枸杞子是我国的传统中药材，LBP是枸杞子的主要功能成分之一，具有较强的生理活性[1-5]。前期研究证实，LBP可明显改善小鼠的精子数量，活动率和畸形率，也可改善小鼠体内性激素水平。本实验主要研究枸杞多糖对小鼠睾丸组织氧化损伤和酶活性的影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 甲醛（重庆江川化工）、LBP（湖北远成药业）、环磷酰胺（江苏恒瑞医药）、考马斯亮兰试剂盒、超氧化物歧化酶试剂盒、丙二醛试剂盒（南京建成生物工程研究所），葡萄糖6磷酸脱氢酶试剂盒、山梨醇脱氢酶试剂盒（美国Rapidbio(RB)公司），主要仪器有低速多管架自动平衡离心机（长沙迈佳森）、721型分光光度计（山东高密彩虹）、自动平衡微型离心机（德国）、低温离心机（sigma公司）、酶标仪（芬兰）。

1.2 实验动物及处理 由贵州医科大学动物中心提供的6周龄-8周龄健康雄性昆明种小鼠96只，体质量30 g-35 g，适应性喂养1周后，随机分为8组，FA低、中、高［0.2 mg/(kg.d)、2.0 mg/(kg.d)、20 mg/(kg.d)］剂量组，LBP低、中、高［50 mg/(kg.d)、100 mg/(kg.d)、200 mg/(kg.d)］剂量拮抗组，阳性对照组［环磷酰胺50 mg/(kg.d)］和阴性对照组（生理盐水）。甲醛染毒组和阴性对照组腹腔注射，每天1次，连续14 d，阳性对照组腹腔注射，隔天1次，共14 d。LBP拮抗组腹腔注射高剂量甲醛，同时灌胃LBP溶液，每天1次，连续14 d。给药体积为0.05 mL/g体质量，小鼠给药期间，自由饮食饮水。染毒结束后，禁食24 h，眼球取血，脱臼处死。取一侧睾丸，制备睾丸匀浆，按说明书操作测定睾丸SOD、MDA和G-6-PD、SDH活性[6]。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0软件进行数据分析，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组睾丸组织SOD、MDA结果比较 FA染毒组SOD降低，LBP中、高剂量组与FA高剂量组比较，SOD增高，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。FA中、高剂量组MDA增高，LBP低、中、高剂量拮抗组与FA高剂量组比较，MDA降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

3.2 各组睾丸组织G-6-PD、SDH结果比较 FA组G-6-PD下降，LBP中、高剂量组与FA高剂量组比较，G-6-PD增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。FA各组SDH活性下降，LBP低、中、高剂量组SDH升高，与FA高剂量组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），见表2。

表1 各组睾丸组织SOD、MDA结果比较（Mean±SD）

表2 各组睾丸组织G-6-PD、SDH结果比较（Mean±SD）

3 讨论

本研究中，随LBP拮抗剂量的增高，SOD活性逐渐升高，MDA含量逐渐下降，与高剂量FA染毒组相比，差异有统计学意义。这与国内学者的结论是一致的。LBP拮抗甲醛氧化损伤的途径可能有两种：一是LBP直接清除体内过多的自由基；二是通过提高抗氧化酶活力的间接作用来清除过多自由基。而且有学者指出，LBP清除自由基的能力与LBP浓度成正相关性[7]。

G-6-PD可作为反映睾丸间质细胞功能的标志酶，SDH可作为睾丸成熟、精子功能成熟和形态完善的标志酶。本研究中，FA染毒组G-6-PD、SDH活力显著下渐，提示睾丸和精子功能成熟障碍，这与谢颖等的结果是一致的。LBP各组，G-6-PD、SDH均升高，表明LBP可以提高睾丸细胞标志酶活性，减轻FA对睾丸功能的损害。其具体机制尚有待于进一步研究。

[1]Zhu CP,Zhang SH.Lycium barbarum polysaccharide inhibits the proliferation of He La cells by inducing apoptosis [J].J Sci Food Agric,2013,93(1): 149-156.

[2]燕宪涛,路新国.枸杞多糖生物活性的研究进展[J].中国食物与营养,2011,17(11): 73-75.

[3]张雅莉,黄晓旭,蔡美琴.枸杞多糖的抗氧化及缓解体力疲劳作用研究进展[J].上海交通大学学报,2015(6): 24-26.

[4]谭克力,罗琼.枸杞多糖对受照射大鼠生殖系统的保护作用[J].中华放射医学与防护杂志,2008,28(3): 258-259.

[5]罗琼,黄晓兰,李卓能,等.枸杞多糖对雄性大鼠性功能及生殖功能的影响[J].营养学报,2006,28(1): 62-65．

[6]谢颖,易义珍,唐明德,等.甲醛对雄性小鼠生殖细胞的毒性[J].环境与健康杂志,2003,20(2): 84-85.

[7]周党侠,王海旭,张洁,等.甲醛急性染毒对性成熟期雄性大鼠睾丸支持细胞结构和功能的影响[J].现代泌尿外科杂志,2009,14(2): 125-127.