左金丸抗溃疡活性部位筛选与作用机制研究

龚来觐 李鹤

江西农业工程职业学院江西樟树331200

左金丸抗溃疡活性部位筛选与作用机制研究

龚来觐 李鹤

江西农业工程职业学院江西樟树331200

目的：溶剂提取法确定左金丸抗溃疡活性部位，并初步探讨其作用机制。方法：采取无水乙醇灌胃法造大鼠胃溃疡模型，以胃溃疡指数（UI）为指标筛选活性部位，并测定胃液pH值、血清中前列腺素E2（PGE2）含量。结果：不同溶剂提取的左金丸活性部位组均能不同程度地抑制大鼠胃溃疡指数，其中以盐酸-乙醇实验组作用最强。结论：盐酸-乙醇提取左金丸活性部位具有显著的抗溃疡作用；作用机制为左金丸使大鼠胃液pH值和血清中PGE2含量升高，达到降低胃黏膜攻击因素和增强胃黏膜防御功能的作用，从而起到保护大鼠胃黏膜的作用。

左金丸活性部位溃疡作用机制大鼠

左金丸出自《丹溪心法》，为朱丹溪名方之一。该方由黄连、吴茱萸按6：1的剂量组成，具有清泻肝火、降逆止呕之效，常用于胃炎、食管炎、胃溃疡等属肝火犯胃者[1]。现代药理研究其有多方面作用，而抗溃疡为最主要的药理作用之一[2]。目前，左金丸的提取方法主要有水提、醇提、盐酸-甲醇提取、半仿生提取等[3-6]。而不同提取方法的左金丸活性部位抗胃溃疡的药效研究尚未见报道。本文在前人基础上，通过抗大鼠胃溃疡的实验研究，综合比较不同溶剂提取的左金丸优选活性部位，并对其活性部位抗溃疡机制作初步探讨，为左金丸的制备及临床应用提供理论依据。

1 实验材料

1.1 实验药物：左金丸（温州海鹤药业有限公司，国药准字Z33020737，生产批号：20160314）；奥美拉唑肠溶胶囊（20mg×14粒，珠海润都制药股份有限公司，国药准字：H20066724，生产批号：20151209）。

1.2 实验动物：Wister大鼠104只，雌雄各半，体重180～220g，购于北京维通利华实验动物有限公司，实验动物合格证号：SCXK20160010。

1.3 试剂及仪器：前列腺素E2（PGE2）Elisa试剂盒（购于Bio-Swamp Life Science公司）；电子天平、恒温水浴箱、低温冰箱、酶标仪、高压蒸汽灭菌锅、高速离心机等（均由江西农业工程职业学院中药综合分析实验室提供）。

2 实验方法

2.1 活性部位筛选：分述如下。

2.1.1 不同溶剂提取活性部位：左金丸加适量硅藻土研匀，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、65%乙醇、盐酸-乙醇（1：100）、水提取，提取液低温烘干，配成含生药量1g/ml的混悬水溶液。

2.1.2 抗溃疡活性筛选：取大鼠54只，随机分为9组，模型对照组（生理盐水）、阳性对照组（现配的1g/ml奥美拉唑混悬水溶液）、左金丸实验组，给药体积均为5ml/kg，模型对照组给予同体积生理盐水。每日灌胃1次，连续给药5d，第4d给药后，开始禁食24h，不禁水，于末次给药后3h，各组大鼠均灌胃无水乙醇1ml/只。造模结束后，各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛（300mg/kg）进行深度麻醉，麻醉后开腹。将鼠胃从幽门至贲门沿胃大弯剪开胃壁，使黏膜面外翻后用生理盐水轻轻漂洗，再刷去胃黏膜表面粘液，铺平，观察大鼠的胃黏膜损伤情况，计算胃溃疡指数。

2.2 活性部位抗溃疡作用机制研究：分述如下。

2.2.1 活性部位不同剂量制备：左金丸加适量硅藻土研匀，用盐酸-乙醇提取，提取液低温烘干，分别配成含生药量0.5g/ml（低剂量组）、1g/ml（中剂量组）、2g/ml（高剂量组）的混悬水溶液。

2.2.2 活性部位不同剂量指标测定：将50只大鼠按随机数字表法分为5组：模型对照组、阳性对照组、左金丸活性部位低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组各10只大鼠。按照活性筛选相同的方法造模，处死，迅速分离腹主动脉后采血，静置于无抗凝剂采血管中4h，再置离心机中于3000r/min离心10min，分离血清，放在EP管中于-20℃下保存备用。采血后，迅速结扎幽门，取出鼠胃，测定pH值。

2.3 指标检测方法：胃液pH值测定：结扎鼠胃幽门，由贲门吸取少量胃液滴在pH试纸上，测定pH值。胃溃疡指数（UI）计算：参照Guth[7]标准，即胃黏膜损伤长度以mm计算，斑点糜烂计1分；糜烂长度＜1mm计2分；糜烂长度1～2mm计3分；糜烂长度2～3mm计4分；糜烂长度＞4mm计5分；宽度＞1mm时分值×2，全胃得分相加即为胃溃疡指数。酶联免疫法检测血清中PGE2的含量：按Elisa试剂盒的说明进行操作。

2.4 统计学方法：采用SPSS19.0软件进行统计学分析，结果以均数±标准差（±s）表示，组间均数比较采用单因素方差分析，并用LSD法进行两两比较、相关性检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 对大鼠胃溃疡的影响：与模型对照组比较，阳性对照组和左金丸不同溶剂提取组大鼠UI值明显降低（P＜0.01），各提取组溃疡指数均小于模型对照组，对溃疡均有一定的抑制作用；与阳性对照组比较，左金丸盐酸-乙醇组大鼠UI值差异无统计学意义（P＞0.05），抗溃疡效果最为显著，其溃疡抑制率高达90.12%。见表1。

表1 对大鼠溃疡作用的影响结果（±s）

表1 对大鼠溃疡作用的影响结果（±s）

注：与模型对照组比较，*P＜0.01。

组别模型对照组阳性对照组石油醚组氯仿组乙酸乙酯组乙醇组65%乙醇组盐酸-乙醇组水组抑制率（%）-91.38 45.14 71.80 71.05 54.95 66.40 90.12 62.10例数5 6 5 5 6 6 6 6 5胃黏膜损伤指数80.30±10.43 6.92±1.56*44.05±15.53*22.64±8.34*23.25±8.26*36.17±12.53*26.98±9.48*7.93±1.92*30.43±10.86*

3.2 各组大鼠胃液pH值、血清PGE2含量比较：与模型对照组比较，阳性对照组、左金丸中、高剂量组均明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与阳性对照组比较，左金丸中、高剂量组差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 各组大鼠胃液pH值、血清PGE2含量比较（±s）

表2 各组大鼠胃液pH值、血清PGE2含量比较（±s）

注：与模型对照组比较，*P＜0.01。

组别模型对照组阳性对照组活性部位低剂量组活性部位中剂量组活性部位高剂量组PGE2（ng/L）89.48±1.55 94.52±2.22*90.89±1.55 92.95±4.10*93.81±2.21*例数9 10 10 9 9胃液pH值1.74±0.25 2.78±0.27*1.81±0.25 2.26±0.24*2.80±0.23*

4 讨论

从实验结果看，不同溶剂提取的左金丸活性部位对大鼠胃溃疡均有不同程度的抑制作用，其中盐酸-乙醇（1：100）组对胃溃疡的抑制率最高，原因可能是由于左金丸中的生物碱一般是季铵型生物碱的形式，当其与盐酸反应后，生成了盐，增加了在溶剂中的溶解度，因此左金丸中的有效成分提取充分。

导致胃黏膜损伤的主要原因之一是胃酸分泌过多。本实验观察到模型对照组大鼠胃液pH值显著降低，且和胃溃疡的发生有关。随着左金丸活性部位剂量的升高，大鼠胃内pH值明显增大，实验结果显示左金丸能有效抑制胃酸的分泌，使胃液pH值提高，从而抑制大鼠胃溃疡。其原理可能是由于小檗碱的苯并二噁茂环结构类似于奥美拉唑的苯并咪唑环结构，属于生物电子等排体，起到质子泵抑制剂即H+/K+-ATP酶抑制剂的作用，从而抑制胃酸分泌。胃黏膜屏障的主要影响因素是PG，尤其是PGE2对胃黏膜具有强烈的保护作用。从本实验结果可以看出，与模型对照组相比，左金丸活性部位中高剂量组大鼠血清PGE2水平明显上升，说明此活性部位可显著促进胃溃疡大鼠上皮细胞合成和分泌PGE2，使胃黏膜防御功能增强，然后对大鼠胃溃疡有抑制作用。

本实验研究通过采取无水乙醇灌胃法造大鼠胃溃疡模型，以胃溃疡指数（UI）为指标筛选出活性部位，然后测定该活性部位不同剂量情况下胃液pH值、血清中PGE2含量，得出结论：盐酸-乙醇提取左金丸活性部位具有显著的抗溃疡作用，其作用机制为左金丸使大鼠胃液pH值和血清中PGE2含量升高，达到降低胃黏膜攻击因素和增强胃黏膜防御功能的作用，从而起到保护大鼠胃黏膜的作用。

[1] 陈永灿.简易名方临证备要[M].北京：人民卫生出版社，2016：540.

[2] 鲍晨汝，潘宗海，年莉.左金丸的药理作用及临床研究进展[J].上海中医药杂志，2010，44（11）：79-82.

[3] 刘陶世，赵新慧，黄耀州.不同溶媒对左金丸小檗碱和吴茱萸碱等5中生物碱溶出行为的影响[J].南京中医药大学学报，2007，23（3）：172-174.

[4] 彭明兴，吴永江，程翼宇.不同溶媒对黄连-吴茱萸药对中小檗碱型生物碱溶出率的影响[J].中国现代应用药学，2003，20（6）：461-463.

[5] 赖庆宽，廖芳，李世娟，等.左金丸提取工艺的优化研究[J].中成药，2008，30（10）：1560-1562.

[6] 张颖，张兆旺.均匀设计法优选左金丸方药的半仿生提取工艺[J].中国中药杂志，2008，33（4）：466-469.

[7] Guth PH，Daures PH，Paulsen G.Topical aspirin plus HCL gastric lesions in the rat[J].Gastroenterrology，1979，76（1）：88.

2017-04-09