奶牛布鲁氏菌病血清学诊断方法的比较体会

武利宏

（临江镇农业畜牧服务中心，黑龙江同江 156400）

奶牛布鲁氏菌病血清学诊断方法的比较体会

武利宏

（临江镇农业畜牧服务中心，黑龙江同江 156400）

本文主要就对三种奶牛布鲁氏菌病血清学诊断方法展开了对比分析，即比较了虎红平板凝集试验、快速诊断试纸卡检测、间接酶联免疫吸附试验在进行奶牛布鲁氏菌病血清学检测时的优点与缺陷。结果显示：虎红平板凝集试验方法操作简便且成本相对较低，对于阳性病牛有着较高的检出率，然而且缺陷则是特异性相对较差，且较易发生假阳性情况；快速诊断试纸卡检测和间接酶联免疫吸附试验血清学诊断方法相对比，在敏感性、特异性、阳性检出率等方面的比较均无明显差异，无统计学意义（P＞0.05）。在实际的奶牛布鲁氏菌病血清学诊断过程中还应具体结合以发病地区的实际情况，与自身条件来选取出适宜的检测方法。

奶牛；布鲁氏菌病；血清学诊断；敏感性；特异性；阳性检出率

目前临床上针对布鲁氏菌病病症的诊断方法主要是以血清学检验为主，较为主流的血清学检验方法就包括了虎红平板凝集试验、快速诊断试纸卡检测、间接酶联免疫吸附试验等方面，据此，下文将就这三种血清学诊断方法的优缺点展开具体分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品

于2015年3月～2016年7月，分多次由某规模化养殖场采集具备布鲁氏菌病典型症状奶牛学样2627份。

1.1.2 试剂

采用布鲁氏菌虎红平板凝集抗原（生产企业：上海恪敏生物科技有限公司）、布鲁氏菌抗体快速检测试剂卡（生产企业：深圳真瑞生物科技有限公司）、间接酶联免疫吸附试验试剂盒（生产企业：上海抚生实业有限公司）

1.1.3 仪器

酶标仪（产品型号：南京德铁HBS-1096A）、自动洗板机（产品型号：五星行RT-6000）、高速冷冻离心机（产品型号：GL-2050MS）、Eppendorf 移液枪（产品规格：0.1～2.5μl，生产企业：上海艾研生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 制备血清

将所采集到的血液样本放置在37℃的环境下持续静置60min，再于4℃条件下静置60min。而后将样本放进离心套筒当中校对平衡，对称置入离心机内，离心机转速保持在3000r/min。抽取经过离心后的采血管，采用Eppendorf 移液枪抽出上部清液，分配到经高压灭菌处理后的离心管内，存储于-20℃的环境当中。

1.2.2 虎红平板凝集试验

预先准备好布鲁氏菌虎红平板凝集抗原、制备出的阳性及阴性血清；要确保所检测的血清保持清洁且未出现溶血及腐败现象；置于清洁玻璃板并聚集于4cm2的格状区域内，并对其进行均匀搅拌为凝集试验做好准备。依据国标GB/T18646-2002进行试验检测与结果判断。

1.2.3 快速诊断试纸卡检测

把未开启的快速诊断试纸卡以及检测样本置于正常室温环境下；吸取血清直至达到刻度线位置，于平面内所置入的试纸卡加样孔逐步滴加血清。对试纸卡加样孔内逐渐底滴加经稀释处理后的液体。依据试纸卡操作说明要求判定检测结果。

1.2.4 间接酶联免疫吸附试验

此项试验操作过程可依据试剂盒应用说明书来开展，把完成包装后的抗原板置入检测血清，对阳性血清样本及阴性血清样本进行对比分析，而后再通过孵育、洗板、加酶标抗体、加终止液等处理后再依据OD值对其结果做出判断。

1.3 数据分析

应用SPSS22.0软件开展统计学分析研究，以（%）来表示计数资料，采用x2来对三种不同诊断方法的阳性检出率进行组间对比验证，比较结果以P＜0.05表示有统计学意义。

2 结果

虎红平板凝集试验、快速诊断试纸卡检测、间接酶联免疫吸附试验三种诊断方法的阳性检出率分别达到了50.4%、45.26%、45.72%，其中虎红平板凝集试验的阳性检出率明显高于另外两种诊断方法，且组间对比差异显著有统计学意义（P＜0.05）。但在检出灵敏性方面相对较低。快速诊断试纸卡检测、间接酶联免疫吸附试验两种方法的组间对比结果无明显差异，不具有统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 三种检测方法的检测结果对比 （份）

3 讨论

奶牛布鲁氏菌病的传染来源主要为患病牲畜。其粪尿、乳汁等排出物均存在有不同程度的病原菌，在接触到周围环境后便会导致牲畜饮水、圈舍、饲料槽等将会受到病菌污染。在患病母畜流产时，病原菌也将会随子宫分泌物、胎衣等一起排出，其危害将更加巨大。布鲁氏菌病的爆发不但会导致养殖户将面临巨大的经济亏损，同时还会导致人体患病，所产生的安全隐患极其严重。

本次研究结果表明虎红平板凝集试验相较于快速诊断试纸卡检测、间接酶联免疫吸附试验在阳性检出率方面准确性较高，但其检出灵敏性相对较差。而后两种血清学诊断方面比较无明显差异。对此，在实际的奶牛布鲁氏菌病血清学诊断过程中还应具体结合以发病地区的实际情况与自身条件来选取相对更加科学、合理的检测方法。

[1] 王双山，王真，马延光，等.奶牛布鲁氏菌病微量凝集试验诊断方法的建立[J].中国畜牧兽医，2013，40（5）：206-210.

[2] 张鹏，弓瑞娟.浅谈奶牛布鲁氏菌病的诊断及防治[J].中国畜禽种业，2014，10（10）：104-105.