霍尔果斯口岸入境人员携带的动物性食品中化学污染及致病菌检测分析

张 超，王振宝，张晓红，郭佳琦，张 妍，葛 婷，阿热阿依·海依拉提，代 婧，刘英玉*，姚 刚*

(1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052；2.伊犁出入境检验检疫局，新疆伊宁 835000)

霍尔果斯口岸入境人员携带的动物性食品中化学污染及致病菌检测分析

张 超1，王振宝2，张晓红1，郭佳琦1，张 妍1，葛 婷1，阿热阿依·海依拉提1，代 婧1，刘英玉1*，姚 刚1*

(1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052；2.伊犁出入境检验检疫局，新疆伊宁 835000)

为了解新疆伊犁入境人员携带禁止入境的动物性食品中食源性细菌和化学污染物状况，抽检了2016年上半年霍尔果斯口岸截获的部分动物性食品，包括肉灌肠10份、马肉罐头10份、牛奶饮料5份、食用动物油16份、蜂蜜5份、罐头鱼子酱7份、盒装鱼子酱3份、奶油10份，共计66份样品。检测项目有重金属铅含量、添加剂亚硝酸盐含量、微生物污染大肠菌群、致病菌沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌。检测结果表明，沙门菌检出5份，其中马肉罐头、奶油和蜂蜜中各检出1株，食用动物油检出2株，检出率7.5%，其余检测项目结果均低于《食品中致病菌限量》(GB/29921—2013)、《食品中污染物限量》(GB/2762—2012)等国家标准中的限定值。新疆伊犁入境人员携带的动物性食品中，食源性细菌污染问题较突出。

动物性食品；污染物；检测分析；食品安全

动物性食品安全是一个全球性的重大公共卫生问题，2015年国家卫生计生委共收到28个省市食物中毒报告169起，中毒5 926人，死亡121人[1]，微生物食物中毒人数比例最大，占全年食物中毒人数的53.7%。2016年前两个季度全国食品安全抽检工作中，各类食品微生物污染达到22.9%和25.5%[2]，相关统计显示，美国等欧美国家每年约7 600万人患食源性疾病[3]。动物性食品微生物污染是导致食物中毒和发生食源性疾病的重要因素之一，主要致病因子有沙门菌、致病性大肠埃希菌、肉毒毒素等。沙门菌是引起食源性疾病的人畜共患致病菌，其引发的食源性腹泻病逐年上升使其成为世界卫生组织(WHO)主要关注的公共卫生问题之一[4]，在世界各地的食品中毒事件中，由沙门菌污染造成的病例占前两位，我国70%～80%细菌性食品中毒由沙门菌所引发[5]，致病性大肠埃希菌中的出血性大肠埃希菌(EHEC)在国内外多次暴发感染事件中占重要位置，其产生的主要致病因子是志贺毒素[6]。化学性食物中毒的主要致病因子是亚硝酸盐、甲醇、氟乙酰胺、毒鼠强等，其中亚硝酸盐导致的中毒事件9起，占该类事件的39.1%。亚硝酸盐广泛存在于自然环境中，尤其在食品加工业中，被用作发色剂和防腐剂[7]。20世纪初期，亚硝酸盐首次被允许作为动物性食品添加剂，在我国传统肉制品包括肉灌肠、罐头等制作过程中也一直被用作腌制剂[8]。亚硝酸盐过量摄入会导致机体携氧能力下降，引起高铁血红蛋白症，达到1 g～3 g可能引起急性死亡[9]。动物性食品中的铅、镉等重金属通过生物作用蓄积，其隐蔽性和不易迁移性导致机体慢性中毒，危害性较强，近年来已经成为WHO、FAO的全球食物污染监测计划中的重要项目[10]，我国也将食品中铅污染纳入“十二五规划”重点防控的项目之一。

随着我国与周边国家物质文化的交流日益增多，入境旅客携带动物性食品入境的现象也随之增多，且存在携带动物性食品种类繁杂、小数量、多批次的特点。部分食品可能通过非正常渠道获得，未经备案和登记，部分临近国家属于禽流感、口蹄疫、食源性致病菌或化学污染等较严重的地区，入境旅客携带的动物性食品都可能造成这些疫病和污染的传入[11]。而目前检验检疫部门还无法对境外食品相关企业进行备案、监管，也无法对动物性食品的原料进行溯源管理，使得入境旅客携带的动物性食品存在巨大的风险。新疆伊犁与周边多个国家相邻，有全国最多的出入境口岸，霍尔果斯口岸是中国陆路最大的通商口岸，大量动物性食品的流动对该地区的食品安全造成潜在的威胁，出入境检验人员严格按照相关法律法规对违规的携带物进行截留。本研究对2016年上半年霍尔果斯口岸入境人员携带的部分动物性食品进行实验室检验，检测项目有重金属铅含量、添加剂亚硝酸盐含量、大肠菌群、食源性致病菌沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌，分析样品中的食源性细菌和化学污染物的污染情况。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 铅标准溶液、亚硝酸钠标准溶液、亚铁氰化钾、乙酸锌、盐酸萘乙二胺、硼氢酸钾等，中国沈阳试剂一厂产品；月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)、亚硒酸盐胱氨酸增菌液培养基(SC)、伊红美蓝琼脂(EMB)、麦康凯培养基、沙门菌生化鉴定管等，北京奥博星生物技术公司产品；TaqMasterMix、DNA标准DL 2 000，北京天根生化科技公司产品；引物invA、stx1和stx2由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.1.2 主要仪器 微波消解炉、 MAS9000型原子吸收光谱仪、WHG-103A型流动注射氢化物发生器，北京盈安美诚科学仪器有限公司产品；PCR仪，德国Eppendorf公司产品；凝胶成像仪，美国伯乐公司产品；电泳仪，北京六一仪器厂产品；UV1800PC型紫外分光光度计，上海菁华科技仪器公司产品。

1.2 方法

1.2.1 样品采集 对2016年上半年霍尔果斯口岸入境人员携带禁止入境的部分动物性食品进行取样，包括肉灌肠、马肉罐头、牛奶饮料、食用动物油(獾油、鼬油、狼油)、蜂蜜、罐头鱼子酱、盒装鱼子酱、奶油共8种动物性食品，共计66份。

1.2.2 铅含量的检测 根据《食品中铅的测定》(GB/5009.12—2010)[12]，将样品经混合酸-微波消解法消化后，以10 mL/L HCl溶液作为载液，与硼氢酸钾(KBH4)反应生成挥发性氢化物(PbH4)，用氩气作为载气将铅的氢化物导入石英加热管中原子化，铅空心阴极灯发出的特定光谱穿过气化原子，于波长283.3 nm处测定吸光度，与铅标准系列比较后定量。

1.2.3 亚硝酸盐含量的检测 根据《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》(GB/5009.3—2010)[13]，将样品预处理后，加入亚铁氰化钾和乙酸锌以沉淀蛋白，加入显色剂并除去脂肪后，滤液用分光光度计在波长538 nm处测定吸光度，将样品吸光度值带入亚硝酸盐标准液所建立的标准曲线中，并根据亚硝酸与含量公式计算得到所测样品中亚硝酸盐含量。

1.2.4 大肠菌群MPN值的检测 根据《食品微生物学检验 大肠菌群计数》(GB/4789.3—2010)[14]中第一法(大肠菌群MPN计数法)，将样品稀释、均质处理后，经10倍倍比稀释后接种月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤管，37℃培养24 h，进行初发酵试验，观察倒置小管的产气情况，产气者移种到煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中，37℃培养48 h，产气者计为大肠菌群阳性管，检索食品安全国家标准中MPN表，报告样品中大肠菌群的MPN值。

1.2.5 食源性致病菌的检测 根据《食品微生物学检验 沙门菌检验》(GB/4789.4—2010)[15]和《进出口食品中产志贺毒素大肠埃希菌检验方法》(SN/T 1827—2006)[16]对样品中沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌进行了细菌分离鉴定。对疑似菌株采用PCR检测，选用沙门菌特异性侵袭蛋白invA[17]和产志贺毒素大肠埃希菌的毒力基因stx1和stx2[18]作为靶基因合成引物，采用水煮法制备菌株DNA模板，PCR反应体系是25 μL：2×TaqPCR MasterMix 10 μL，引物(10 μmol/L)各1 μL，DNA模板2 μL，ddH2O 11 μL。反应条件：95℃预变性5 min；95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s,共35个循环；最后72℃ 10 min。扩增产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳后，EB染色，在凝胶成像系统下判定结果。挑取PCR阳性菌株进行生化反应鉴定。

1.2.6 评价标准 8种样品中铅含量、亚硝酸盐含量、大肠菌群MPN值、沙门菌、产志贺毒素大肠埃希菌的限定值参考食品安全国家标准中《食品中致病菌限量》(GB/29921—2013)[19]、《食品添加剂使用标准》(GB/2760—2014)[20]、《食品中污染物限量》(GB/2762—2012)[21](表1)。

表1 食品安全国家标准限值Table 1 The national standard limit of food safety

2 结果

8种入境携带动物性食品中，铅含量为0.01 mg/kg～0.089 mg/kg(表2)，均低于《食品中污染物限量》(GB/2762—2012)中规定的最高限值0.5 mg/kg，其中马肉罐头铅含量最高，均值0.089 mg/kg，盒装鱼子酱铅含量最低，均值0.01 mg/kg。

8种入境携带动物性食品中，亚硝酸盐含量为3.458 mg/kg～13.438 mg/kg(表2)，均低于《食品添加剂使用标准》(GB/2760—2014)中规定的最高限值30 mg/kg，其中肉灌肠亚硝酸盐含量最高，均值13.438 mg/kg，蜂蜜亚硝酸盐含量最低，均值3.458 mg/kg。

8种入境携带动物性食品中，大肠菌群最可能数(MPN)为3.110 MPN/100 g～14.520 MPN/100 g(表3)，均低于《食品中致病菌限量》(GB/29921—2013)中规定的最高限值30 MPN/100 g，其中肉灌肠大肠菌群MPN值最高，均值14.520 MPN/100 g，马肉罐头MPN值最低，均值3.110 MPN/100 g；沙门菌总共检出5份，其中马肉罐头、奶油和蜂蜜中各检出1株，食用动物油检出2株，超过《食品中致病菌限量》(GB/29921—2013)中不得检出的标准；产志贺毒素大肠埃希菌均未检出。

表2 动物性食品化学污染物检测结果Table 2 Detection results of animal origin-food chemical contaminants

3 讨论

试验中所检测的肉灌肠、马肉罐头、牛奶饮料、食用动物油、蜂蜜、罐头鱼子酱、盒装鱼子酱、奶油8种动物性食品样品，采集于霍尔果斯口岸截留物品，入境人员禁止携带入境的动物性食品，且这8种样品在各类动物性食品中具有生产量大、消费量大、流通范围广的代表性。2016年上半年霍尔果斯口岸入境人员携带禁止入境的部分动物性食品中各项检测指标显示，沙门菌超过《食品中致病菌限量》(GB/29921—2013)标准中的限定值。刘艳等[22]对2010年—2014年新疆食源性致病菌鉴定分析结果显示，各监测实验室上送的分离菌共295株，沙门菌29株。李宏英等[23]对2010年—2015年新疆伊宁市食物中毒事件的监测分析中，细菌性食物中毒15起，其中沙门菌2起。沙门菌作为食品安全国家标准和出入境食品行业标准的必检致病性微生物，其监测和分析对于动物性食品安全具有重要的意义。8种动物性食品样品中大肠菌群MPN值平均7.107 MPN/100 g，均未超标，其中肉灌肠14.520 MPN/100 g，污染程度最高，肉制品由于其制作工序复杂，屠宰、加工、包装、储存等环节容易造成二次污染，严格执行各个环节的消毒工作，加强对肉制品加工场所的监管才能最大限度的保证食品安全。亚硝酸盐检测结果显示，8种动物性食品亚硝酸盐含量均值5.533 mg/kg，均未超标，其中肉灌肠13.438 mg/kg，含量最高，可能与肉灌肠的加工工艺有关，高彭等[24]对2013年—2015年北京市散装熟肉制品的监测结果中，肉灌肠亚硝酸盐含量超标率6.3%。王猛等[25]对2015年新疆乌鲁木齐市售熟肉制品中亚硝酸盐含量调查中，检出率为10%。亚硝酸盐作为肉制品加工中使用的发色剂，能使其保持鲜红色，还可以抑制肉毒芽胞杆菌的生长，因此也被用作罐头等包装熟食的防腐剂。亚硝酸盐作为食品加工中的添加剂，除非过量摄入才会引起机体高铁血红蛋白症等急性中毒症状[26]，在人体内急性摄入量达到3 g可致死。虽然亚硝酸盐本身不具有致癌性，且日常通过饮食摄入的大部分亚硝酸盐会通过尿液排出体外，但近年来越来越多的研究表明，亚硝酸盐在酸性条件下，与机体组织中的胺结合转化成具有直接致癌性质的亚硝酸胺[27]。目前已证实的300多种亚硝酸盐化合物中，80%以上在动物试验中出现致癌活性[28]。铅含量检测结果显示，8种动物性食品中铅含量平均0.044 mg/kg，均未超标，但样品中罐头类食品铅含量较高。有研究显示，食品包装袋、用铅锡焊接的灌装容器等是食品铅污染的重要来源[29]，接触食品中的酸性物质致使铅溶出。我国各个地区食品中铅含量的检测结果显示，在各类食品中铅污染较严重的是畜禽肉类和肉制品，广州市市场畜禽肉样品中铅的检出率高达65.42%；江苏南通市即食类包装肉制品中铅超标率达到52%[30]。目前国际公认铅中毒造成的神经系统损伤是儿童发育过程中最大的危害因素，体内血铅浓度超过0.1 μg/mL便会使儿童智力指数下降，成为全球环境监测计划中食品化学污染物的必检项目[31]。我国出入境检验检疫部分文件对入境旅客携带物品做出相关的规定，如《出入境人员携带物检疫管理办法》、《关于加强对旅客携带入境食品管理的公告》、《禁止携带邮寄入境动植物及其产品名录》等，对出入境的旅客随身携带的食品规定了限量标准，公告中也提出禁止入境人员携带肉类、肉制品、水生动物及其制品、生鲜奶以及动物源性奶油、黄油、奶酪等奶类制品、新鲜蔬菜水果[32]，然而我国入境旅客携带动物性食品的相关法律与检验检疫相关规定和公告之间缺乏有机的衔接，在监督管理方面存在着很多不确定性，使得入境人员携带违规动物性食品入境屡禁不止，也给了利用法律漏洞来谋求私利的不法分子以可趁之机。我国在修订动物性食品安全国家标准时，应加强跟进相应国际标准，提高食品安全标准的可靠性，同时提高动物性食品中污染物的检验检疫能力。

新疆伊犁作为亚欧大陆桥在中国境内的西部桥头堡，与哈萨克斯坦、俄罗斯、蒙古人民共和国接壤，并设有巴克图、霍尔果斯、吉木乃等8个国家一类口岸，是全国向西开放的重要通道。近年来，中哈两国贸易往来频繁，民间交往日益增多，霍尔果斯口岸出入境人数不断攀升，口岸检验检疫部门从入境人员随身携带物品中截获国家禁止入境的动物性食品数量和种类也愈来愈多，且其来源、品种、质量及卫生状况不明，动物疫病病原、人畜共患病病原及其他有毒有害物质经旅检口岸传入的风险随之增大，因此，加大对旅客携带物的查验力度、实验室检测和预警工作，对保障国门生物安全和公共卫生安全具有重大意义。

[1] 国家卫生计生委办公厅.关于2015年全国食物中毒事件情况的通报[J].中国食品卫生杂志,2016(3):290，391，408.

[2] 国家食品药品监督管理总局.关于2016年第二季度食品安全监督抽检情况的通报(2016年第109号)[EB/OL].(2016-07-20)[2016-07-05].http://www.sda.cn/WS01/CL1687/159821.html.

[3] Mead P S,Slutsker L,Dietz V,et al.Food-related illness and death in the United States [J].Emerg Infect Dis,1999,5(5):607-625.

[4] Albufera U,Bhugaloo-Vial P,Issack M I,et al.Molecular characterization ofSalmonellaisolates by REP-PCR and RAPD analysis[J].Infect Genet Evol,2009,9(3):322-327.

[5] 黄 磊,刘玉婷,郎小倩,等.贵阳市食品中沙门氏菌污染检测[J].贵州师范大学学报:自然科学版,2016(5):36-40.

[6] 刘英玉,杨 舟,吾买尔江·牙合甫,等.新疆伊犁某肉牛场大肠埃希菌及其毒力基因的检测[J].动物医学进展,2016,37(4):45-48.

[7] 丁之恩.NIT和亚硝胺在食品中的作用和机理[J].安徽农业大学学报，1994，21(2)：199-205.

[8] 张坤生.无硝腌制系统的研究及其进展[J].天津商学院学报，1999，19(6)：31-33.

[9] 吴 坤.营养与食品卫生学[M]．北京:人民卫生出版社，2004．

[10] Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives( JECFA). Summary and conclusions of the seventy-third meeting of Joint FAO / WHO Expert committee on Food additives [R]．Geneva:FAO / WHO，2010:1-17.

[11] 王殿华,黄斗铉.俄罗斯粮食安全问题与中俄食品贸易[J].欧亚经济,2010(12):12-17.

[12] GB/5009.12—2010，食品中铅的测定[S].

[13] GB/5009.3—2010，食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定[S].

[14] GB/4789.3—2010，食品微生物学检验大肠菌群计数[S].

[15] GB/4789.4—2010，食品微生物学检验沙门氏菌检验[S].

[16] SN/T1827—2006，进出口食品中产志贺毒素大肠杆菌检验方法[S].

[17] 黄 磊,刘玉婷,郎小倩,等.贵阳市食品中沙门氏菌污染检测[J].贵州师范大学学报：自然科学版,2016(5):36-40.

[18] Jianfa B,Xiaorong S,Nagaraja T G,et al.A multiplex PCR procedure for the detection of six major virulence genes inEscherichiacoliO157:H7[J].J Microbiol Meth,2010，82(1):85-89.

[19] GB/29921—2013，食品中致病菌限量[S].

[20] GB/2760—2014，食品添加剂使用标准[S].

[21] GB/2762—2012，食品中污染物限量[S].

[22] 刘 艳,于 烽,苏 静,等.2010—2014年新疆食源性致病菌鉴定分析[J].疾病预防控制通报,2015(4):78-79.

[23] 李宏英,闻 捷,张逸静,等.2010—2015年伊宁市食物中毒实验室监测分析[J].疾病预防控制通报,2016(5):73-74,86.

[24] 高 彭,吕金昌,李永进,等.北京市顺义区278件即食类散装熟肉制品的风险监测结果[J].现代预防医学,2016(13):2352-2354，2362.

[25] 王 猛,杜相品,雒婉霞,等.2015年乌鲁木齐市售熟肉制品、酱腌菜中亚硝酸盐含量调查[J].食品安全导刊,2016(19):68-69.

[26] 张 英.亚硝酸盐在肉制品中的作用及其替代物的研究现状[J].江苏调味副食品,2012(6):22-24.

[27] 皇甫超申,史 齐,李延红,等.亚硝酸盐对人体健康的利害分析[J].环境与健康杂志,2010,27(8):733-736.

[28] 何田静,林 昆.腌制食品与人类肿瘤的关系[J].汕头大学医学院学报,2010,23(3):181-183.

[29] 格莱翰.食品安全性[M].北京：轻工业出版社,1987.

[30] 赵 静,孙海娟,冯叙桥.食品中重金属铅污染状况及其检测技术研究进展[J].食品与发酵工业,2014(9):122-127.

[31] Organization W H.Safety evaluation of certain food additives and contaminants:Seventy-third meeting of the joint FAO/WHO expert committee on food additives (JECFA)[M]//Evaluation of certain food additives and contaminants:World Health Organization,1999:1-128.

[32] 裴希超,孙善华,聂雪梅,等.中俄口岸入境旅客携带食品风险浅析[J].食品安全质量检测学报,2013(2):357-360.

DetectionofChemicalContaminationandPathogensinAnimal-originFoodCarriedbyPortEnteringPassengersinHelgasPort

ZHANG Chao1,WANG Zhen-bao2, ZHANG Xiao-hong1,GUO Jia-qi1,ZHANG Yan1,GE Ting1,Areayi·Haiyilati1,DAI Jing1, LIU Ying-yu1,YAO Gang1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi,Xinjiang,830052,China; 2.YiliEntry-exitInspectionandQuarantineBureau,Yining,Xinjiang,835000,China)

In order to study food-borne bacteria and chemical contamination in animal-origin food carried by port entering passengers in Yili,Xinjiang.Samples of sausage,canned horse meat,milk beverage,edible animal oil,honey,canned or boxed caviar,butter were taken and the lead,nitrite,bacterial colony,Salmonellaand Shiga toxin-producingE.coliwere tested.The results showed that 5 strains ofSalmonellawere detected,the detectable rate was 7.5%,the rest detected items were all below the corresponding standards in GB/29921—2013 and GB/2762—2012.Problems of food-borne bacterial contamination in animal-origin food carried by port entering passengers in Yili,Xinjiang are serious,strictly in accordance.

animal origin-food;contamination;monitoring analysis;food safety

2017-02-18

动物源性食品病原微生物快速检测技术研究与应用项目(201411105)；新疆农业大学产学研联合培养研究生项目(xjaucxy-yjs-20152004)；霍尔果斯重大研究项目(HEGS-2016ZDYJXM-QD04)；库尔勒市畜产品中致病菌快检技术的示范与应用

张 超(1991-)，男，新疆伊犁人，硕士研究生，主要从事畜产品质量安全研究。*

S851.347.7

A

1007-5038(2017)10-0051-05