CCL5在膀胱癌中的表达及临床意义

2017-11-16 10:38陈杰虞伟星马文勇范晓松何非平夏未杰李波军
浙江医学 2017年20期
关键词:趋化因子阳性细胞膀胱癌

陈杰 虞伟星 马文勇 范晓松 何非平 夏未杰 李波军

CCL5在膀胱癌中的表达及临床意义

陈杰 虞伟星 马文勇 范晓松 何非平 夏未杰 李波军

目的检测趋化因子配体5(CCL5)在膀胱癌中的表达情况,探讨CCL5在膀胱癌中的临床意义。方法选择136例膀胱移行细胞癌患者标本和20例正常膀胱组织标本,采用免疫组化SP法检测膀胱癌和正常组织中CCL5的表达,并结合临床资料进行分析。结果正常膀胱组织中CCL5的表达阳性率明显低于膀胱癌组织,膀胱癌组织中随着病理分级和分期的增加,CCL5的表达阳性率逐渐增高。CCL5在低级别与高级别膀胱癌中高表达阳性率分别为27.3%和55.6%,差异有统计学意义(P=0.001)。肿瘤分期Ta~T1和T2~T4CCL5高表达阳性率分别为38.3%和57.1%,差异有统计学意义(P=0.041)。本组患者随访7~117个月,Kaplan-Merier分析CCL5高表达阳性率患者的术后生存时间明显降低(P<0.01);多因素研究分析,CCL5的表达是影响患者术后总生存期的独立预后因素(P=0.038)。结论CCL5的表达阳性率在膀胱癌组织中明显高于正常组织,检测CCL5的表达有助于膀胱癌的诊断及预后评估。

膀胱癌趋化因子配体5免疫组化诊断预后

肿瘤的生长、侵袭和转移依赖于宿主细胞和肿瘤复杂的相互作用,而趋化因子在肿瘤与宿主细胞的相互作用中扮演了重要的角色,趋化因子家族包含大量具有趋化作用的低分子量蛋白,以趋化粒细胞迁移到炎症部位。趋化因子家族按结构分为四大类:C、CC、CXC、CX3C,至今已鉴别出50多种不同的趋化因子,大部分是CC和CXC家族成员。趋化因子配体5(CCL5)属于CC类趋化因子家族,其受体有CCR1、CCR3和CCR5[1]。CCL5在肿瘤和炎性疾病中发挥重要作用,最近的研究发现乳腺癌患者中CCL5的表达与疾病进展直接相关;另外,在宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌和黑色素瘤患者的组织和血清中CCL5的表达与疾病进展具有相关性[2-3]。目前对CCL5的表达与膀胱癌的关系研究极少。笔者对比了CCL5在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达,并对膀胱癌患者CCL5的表达与膀胱癌的病理因素及生物学行为之间的关系进行分析,旨在为临床判断膀胱癌分期及疾病进展提供重要的分子生物学指标。

1 对象和方法

1.1 对象选取我院泌尿外科2005年1至12月有完整随访资料的136例膀胱移行细胞癌手术切除的病变膀胱组织和20例同期因其他疾病而手术患者的正常膀胱组织,均经病理检查证实。136例膀胱癌患者中男100例,女36例,年龄41~80岁,中位年龄70岁;20例同期手术患者中男15例,女5例,年龄48~76岁,中位年龄65岁。收集患者的资料包括肿瘤大小、数目、病理分级、分期(依据AJCC2002)标准等。

1.2 方法采用SP法进行免疫组化测定。组织经甲醛溶液固定,石蜡包埋,作4μm切片,并经常规脱蜡至水,柠檬酸(pH 6.0)高温修复抗原,PBS冲洗3次,每次5min,切片于二甲苯中脱蜡,每次15min,以0.3%过氧化氢孵育10min,清除内源性的过氧化物酶活性,PBS冲洗3次,每次5min,滴加正常山羊血清封闭,室温孵育30min,倾去,滴加1∶50抗兔单克隆抗体(美国RD公司,278-RN),4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3次,每次5min,再加生物素标记二抗(美国RD公司,HAF109),室温孵育30min,PBS冲洗3次,每次5min,DAB显色,苏木精复染,脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断CCL5表达于细胞质中,阳性细胞呈成棕黄色,用双盲法在高倍镜下计数1 000个细胞,根据阳性细胞占全部细胞的比例判断结果,CCL5阳性细胞<25%为阴性,25%≤CCL5阳性细胞<50%为中等阳性,CCL5阳性细胞≥50%为强阳性,以中等阳性、强阳性为高表达。

1.4 统计学处理应用SPSS17.0统计软件。不同分组间计数资料比较采用χ2检验。采用Kaplan-Meier作生存分析,并进行Log-Rank检验分析组间差异,Multivariate Cox分析多因素对患者术后生存的影响。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CCL5在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的表达CCL5表达主要在细胞质内(图1)。20例正常膀胱组织中CCL5高表达5例,占25%;136例膀胱癌组织中高表达60例,占44.1%,明显高于正常膀胱组织(P<0.05)。

图1 CCL5在膀胱癌中的表达(a:CCL5阴性;b:CCL5高表达;×200)

2.2 膀胱癌患者CCL5表达与临床病理因素的关系CCL5表达阳性率在膀胱癌患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数目等方面均无统计学差异(均P>0.05);低级别和高级别膀胱癌CCL5高表达阳性率分别为27.3%(15/55)、55.6%(45/81),差异有统计学意义(P=0.001)。肿瘤分期Ta~T1和T2~T4CCL5高表达阳性率分别为38.3%(36/94)和57.1%(24/42),差异有统计学意义(P=0.041)(表1)。本组随访7~118个月,38例患者死亡,Logrank检验比较性别、年龄、肿瘤大小、数目、分级及CCL5的表达等因素研究发现,CCL5高表达的患者术后总生存时间明显减少(图2)。多因素Cox分析,CCL5高表达是影响患者术后总生存的独立预后因素(表2)。

表1 膀胱癌患者CCL5表达与临床病理因素的关系(例)

3 讨论

图2 CCL5的表达对膀胱癌患者术后总生存的影响

表2 膀胱癌患者术后总生存影响因素分析

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,在美国男性恶性肿瘤发病率中占第4位,女性中占第7位。在美国2014年新发膀胱癌74 000例,其中16 000例死亡[4]。根据肿瘤浸润程度的不同,膀胱癌分为非肌层浸润性膀胱癌(non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC)和肌层浸润性膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)。在所有初次诊断的患者中,大约75%的患者是NMIBC Ta~T1,25%的患者是MIBC T2~。NMIBC 5年生存率>90%,但复发率高达60%~85%,其中20%可进展为MIBC[6]。对于MIBC,即使及时给予全膀胱切除术治疗和各种辅助治疗,5年的肿瘤特异性生存率仅为50%~70%[7-8]。目前NMIBC的复发给临床上治疗带了很大的挑战。MIBC仍是患者死亡的主要原因,根治性的膀胱切除术仍是治疗金标准,但患者的预后较差,现在的治疗方案主要依靠病理分级和分期,而传统的组织病理学评价如分级和分期在预测膀胱癌的生物学行为方面受到限制,因此明确导致肿瘤形成和进展的分子生物学改变,能为临床患者的治疗选择提供合理证据。

本研究发现,CCL5在膀胱癌组织中呈高表达,与正常膀胱组织相比差异有统计学意义,CCL5高表达与患者年龄、性别、肿瘤大小及数目无关,肿瘤分级越高、浸润越深的患者组织中CCL5高表达阳性率越高,说明CCL5与膀胱癌的生长及侵袭密切相关。

CCL5主要表达于T淋巴细胞、巨噬细胞、血小板、滑膜成纤维细胞、肾小管上皮细胞和一定类型的肿瘤细胞[9]。CCL5可以招募大量的粒细胞到达炎症部位,包括T细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞,同时对由T细胞分泌的细胞因子如IL-2也有趋化作用。CCL5主要通过其受体发挥作用,目前发现的受体有CCR1、CCR3和CCR5,而CCR5是最主要的[9]。在胃癌中,CCL5/CCR5的相互作用导致胃癌肿瘤进展主要有以下几种方式:作为生长因子促进血管发生;调节细胞外基质,包括招募其他的基质细胞和炎细胞;节细胞外基质,包括招募其他的基质细胞和炎细胞;参与免疫逃逸机制[10]。因此以CCL5/CCR5轴为靶点的治疗已经在乳腺癌患者中得到应用,在其他肿瘤治疗中的应用尚待进一步研究[11]。

本研究结果表明CCL5表达与膀胱癌的病理分级、分期有关,而且CCL5的表达也是预测患者术后生存的一个有效指标。因此笔者认为进一步探讨CCL5导致膀胱癌形成的分子机制,有望为判断膀胱癌预后提供一种新的分子生物学指标,同时还可为膀胱癌的靶向治疗提供特异性的靶点。

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Expression of CCL5 in patients with bladder cancer and its clinico pathological significance

CHEN Jie,YU Weixing,MA Wenyong,et al.

Department of Urology,Shaoxing Shangyu People's Hospital,Shaoxing 312300,China

ObjectiveTo investigate the expression of CCL5 in tumor tissue of patients with bladder cancer and its clinicopathological significance.MethodsThe expression of CCL5 protein in 136 specimens of bladder cancer and 20 specimens of normal bladder tissues was detected by SP immunohistochemtry,its correlations with clinicopathologic features of patients was analyzed.ResultsThe expression of CCL5 was higher in tumor tissues than that in normal bladder tissues.The positive rate of CCL5 in low grade bladder cancer was lower than that in high grade bladder cancer(27.3%vs.55.6%,P=0.01);the expression rate in non-muscle-invasive bladder cancer was lower than that in muscle-invasive bladder cancer(38.3%vs 57.1%,P=0.041).The patients were followed up for 7-117 months.Kaplan-Meier survival analysis demonstrated that CCL5 expression was significantly associated with shorter overall survival(P<0.01).Multivariate analysis further demonstrated that CCL5 was an independent prognostic factor for patients with bladder cancer.ConclusionThe expression of CCL5 protein is highly in bladder cancer,the detection of the expression of CCL5 protein can be used for diagnosis and prognosis of bladder cancer.

Bladder cancer CCL5 Immunohistochemtry Diagnosis Prognosis

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.20.2017-43

312300绍兴市上虞人民医院泌尿外科

虞伟星,E-mail:shangh_wei@hotmail.com

2017-01-18)

(本文编辑:严玮雯)

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