殷瑞君,王云平
(山西农业大学资源环境学院,山西 太谷 030801)
土壤中PAHs提取纯化和测定方法研究进展
殷瑞君,王云平
(山西农业大学资源环境学院,山西 太谷 030801)
对土壤中常用的多环芳烃的提取、纯化和测定方法进行分类,介绍其原理和优缺点,并对其发展趋势进行展望。其中,提取方法包括索氏提取法(SOX)、超声萃取法(USE)、微波萃取法(MAE)、加速溶剂萃取法(ASE)、超临界流体萃取法(SFE)、固相萃取法(SPE)、固相微萃取法(SPME)、亚临界水萃取法(SCWE)及其协同提取技术等;纯化方法有柱层析法(硅胶、中性氧化铝、弗罗里土)、凝胶渗透净化法;测定方法有高效液相色谱(HPLC)法(紫外、荧光、二极管阵列检测器)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)法和恒能量同步荧光(CESF)法等。通过系统介绍土壤中PAHs的提取纯化和测定方法,可为研究者提供一定的技术参考,有利于提高土壤中PAHs定性定量分析的准确性,对土壤污染修复和保障人民身体健康具有重要意义。
多环芳烃;土壤;提取;纯化;测定
多环芳烃(PAHs)是环境中普遍存在的分子结构中含有2个和2个以上芳香环且具有“三致”毒性(致癌性、致畸性、致突变性)的一类微量有机物的总称,按照芳香环连接方式不同可分为非稠环型(芳香环与芳香环间各由一个碳原子相连)和稠环型(2个碳原子为2个芳香环所共有)。1976年,美国环保局(USEPA)把16种多环芳烃列入优先控制有毒有机污染物黑名单中。其中,有7种PAHs化合物被我国国家环保局公布为优先控制污染物[1]。除具有典型的“三致”效应外,多环芳烃还具有持久性有机物的通性,即持久性、生物积聚性、半挥发性、长距离迁移性等。
PAHs广泛分布于自然环境中,土壤中PAHs的来源主要有2类,即自然来源和人为来源。其中,大气环境中大部分PAHs是由人类生活和生产活动过程中垃圾和化石燃料不完全燃烧产生的。自然来源构成土壤中PAHs的背景值,如火山喷发、森林草原火灾、细菌生化作用等;人为来源是土壤中PAHs的主要来源,比如:煤、石油和天然气的不完全燃烧和高温分解、垃圾等废弃物焚烧、汽车等机动车辆的交通尾气排放等。
大气中的PAHs通过一系列吸附、干湿沉降和沉积作用直接或间接进入土壤环境中,植物根系吸收集聚土壤中的PAHs,通过动植物的集聚作用进入食物链,严重危及食品安全和人类健康。此外,人类也可通过职业暴露(焦化厂工人)、环境暴露(空气和饮用水污染)、生活方式(吸烟)等多种途径暴露于多环芳烃。
由于环境中PAHs含量处于痕量级或超痕量级,存在大量同分异构体,而且土壤中的干扰物多,难以直接测定,因此,选择合适的提取纯化和测定方法显得尤为重要。
本研究归纳总结近几年来土壤中多环芳烃的研究,对PAHs提取、纯化和测定方法进行分类,介绍其原理、优缺点,最后对其发展趋势进行展望,以期为土壤中PAHs的研究提供一定的技术支持,其对土壤污染修复、食品安全和保障人民的身体健康具有重要意义。
多环芳烃在土壤中含量处于痕量、超痕量级,同时土壤基质复杂,存在着多种干扰物质,难以直接测定。为保证土壤多环芳烃污染程度定性和定量分析的准确性,既要消除复杂环境基体中的干扰物质,同时又要保证待测组分的有效提取,降低检测限,提高检测灵敏度。因此,提取方法的选择是分析土壤和底泥中PAHs含量的关键。PAHs提取方法包括索氏提取(SOX)法、超声萃取(USE)法、微波萃取(MAE)法、加速溶剂萃取(ASE)法、超临界流体萃取(SFE)法、固相萃取(SPE)法、固相微萃取(SPME)法、亚临界水萃取(SCWE)法及其协同提取技术等9种。
基于不同的提取原理,将以上9种提取方法分为5类:传统经典的索氏提取法(SOX);通过控温和控压改变萃取剂萃取能力:超临界流体萃取法(SFE)、亚临界水萃取技术(SCWE);选用不同的萃取媒介提取被测物质:固相萃取法(SPE)、固相微萃取法(SPME);通过改变外部条件(超声波辐射、微波加热和控温控压等)改变被测物质的溶解率:超声波萃取法(USE)、微波萃取法(MAE);综合利用不同提取技术萃取被测物质:协同提取技术。
索氏提取法是土壤中PAHs提取的经典方法之一,是ISO标准测定方法之一。其原理是将固体在溶剂中浸润较长时间,并用索氏提取器提取出待测物质中的目标化合物,优点是回收率较高。张永兵等[2]提取处理后的土样4 h,结合固相萃取法和高效液相色谱法检测土壤中的苯并(a)芘,回收率为71.5%~83.4%。缺点是提取时间长,一般为24~72 h[3],操作过程复杂,有机溶剂使用量大。随着技术发展与改进,索氏提取法逐渐被快速、高效、节能、易于自动化操作的前处理技术所代替。
1.2.1 超临界流体萃取法(SFE) 超临界流体是指处在临界温度和压力以上的物质,利用其特殊性质可在超临界流体色谱中作流动相用。将超临界流体用作萃取剂,最早是在1986年[4]。
超临界流体萃取法的原理是利用物质和溶剂在临界点上的特性,通过改变温度与压力,进而改变流体密度与萃取能力,最终萃取分离混合物中的可溶性组分,常用CO2、乙烯、乙烷、氨乙烯等作为萃取溶剂。超临界流体萃取可使用CO2代替有害的氯氟烃或四氯乙烯等有机溶剂,对低沸点、易挥发化合物的萃取效果好,萃取高沸点化合物时应适当提高萃取温度和加入改进剂。欧阳勋[5]采用超临界流体法萃取土壤中4种PAHs,选用CO2流体作为萃取溶剂,结果表明,4种PAHs中二苯并蒽萃取率为83.98%,其他3种为50%左右。该技术具有提取时间短(10~60 min)、工艺流程简单、萃取效率高、无有机溶剂残留的优点。
由于超临界流体萃取法设备昂贵,土壤水分含量会对回收率产生影响,对操作人员有较高的技术要求,所以鲜见有关SFE提取PAHs的报道。
1.2.2 亚临界水萃取法(SCWE) 亚临界水是指在一定压力和温度(临界温度为100℃)条件下仍处于液体状态的水。
绿色环保的亚临界水萃取技术正在被研究者广泛研究使用。其原理是通过控温和控压使亚临界水的极性接近于样品中的待测组分,改变亚临界水的萃取能力,选择性萃取某些有机物。影响萃取效果的因素主要有:温度、压力(小于4 MPa)和时间(小于 1 h)[6]。
该方法的突出优点是绿色环保,此外,还具有萃取效率高、萃取效果好、重现性好、检出限低,装置和萃取条件易实现、操作难度也不高等特点。MCGOWIN等[7]采用静态亚临界水萃取技术提取土壤中的PAHs,萃取20 min就有很好的效果。缺点是在实验结束恢复至室温常压时,水极性的增强会使萃取到的PAHs重新分配到样品基体中,造成PAHs损失,影响结果的准确性。
1.3.1 固相萃取法(SPE) 固相萃取法是20世纪70年代发展起来的一种样品前处理技术。其原理是利用固体吸附剂吸附液体样品中的目标化合物,分离待测化合物与样品基体,最后用洗脱液洗脱,分离和富集目标化合物。固相萃取吸附剂(正相柱、反相柱及离子交换柱)的选择影响回收率的高低[8]。该方法具有分析物回收率高,选择性好,操作简单、省时、省力等突出特点。但是其不适用于萃取沸点高于溶剂的脱附温度的待测物质。张永涛等[9]应用固相萃取法萃取地下水中16种PAHs,用K-D浓缩器浓缩后,进行气相色谱-质谱仪测定,加标回收率为84.3%~112.3%。
1.3.2 固相微萃取法(SPME) 固相微萃取法发展于20世纪90年代,是在丰富固相萃取法中固体吸附剂种类和细化其具体萃取过程的基础上发展而来的。应用SPME技术萃取待测化合物一般有3种方法:直接浸入式萃取(DI-SPME)、顶空萃取(HS-SPME)、膜保护萃取。其中,DI-SPME法是将纤维头直接插入样品中,利用固相涂层萃取目标化合物,最终萃取体系达到平衡[10]。HS-SPME法萃取过程是一个待测样品在三相体系中达到平衡的过程,包括目标化合物从液相向顶空气相的迁移以及最终向固相涂层的迁移。膜保护萃取的原理是利用隔膜的选择透过性,通过选择性膜的待测物质吸附到涂层上,最后进行洗脱收集。固相微萃取法在操作过程中不需要使用溶剂,操作简便,样品预处理时间短,无需后处理,适合于分析高毒性物质。但是该方法应用的萃取头(纤维头)极易被破坏,导致萃取结果的可重复性和线性度很差。
1.4.1 超声波萃取法(USE) 超声波萃取法广泛用于土壤和底泥中PAHs的提取。其原理是利用超声波辐射产生的多级效应,例如:空化扰动效应、高加速度、击碎和搅拌作用,增大物质分子的运动活性,加速目标成分进入溶剂,提高萃取效率,最后分离提取液。其具有提取时间短、操作过程简单、回收率高的优点[11-13]。安长伟等[13]采用超声波萃取法提取处理后的1 g土壤样品,最终16种多环芳烃的平均加标回收率为85.6%~110.2%,回收率较高。缺点是由于超声波能量大、穿透力强,在萃取过程中可能会破坏不稳定化合物的结构。
1.4.2 微波萃取法(MAE) 微波萃取法是发展于1986年的一种样品前处理技术。其原理是利用微波与物质作用的特点,通过微波加热装置和萃取容器等提高溶剂萃取的效率,使试样中的有机物成分(或有机污染物)与基体物质有效地分离的技术。其具有加热均匀、选择性和萃取效率高、节省溶剂、不破坏被测物质、易萃取热不稳定的物质和无污染的特点,适用于快速处理大量样品[14-16]。但是其难以应用于极性较强的物质,不易自动化,缺乏与其他仪器在线联机的可能性。杨杰[17]对10 g土壤样品进行微波萃取,在100℃下微波萃取20 min,最终加标回收率为84.3%~93.3%,相对标准偏差为2.8%~5.8%,表明回收率和精密度都较好。
1.4.3 加速溶剂萃取法(ASE) 加速溶剂萃取是一种在较高的温度(30~200℃)和较大的压力(10~20 MPa)下用溶剂萃取固体或半固体的样品前处理方法,具有有机溶剂用量少,萃取速度快,样品回收率高等优点,已被美国环保局收录为处理固体样品的标准方法之一[18]。
加速溶剂萃取法原理是通过升温和加压,提高待测物质的运动活性,促使其快速进入萃取溶剂,最后使用加速溶剂萃取仪分离提取土壤样品的一种新型的固体或半固体样品前处理方法[19-20]。萃取效果好坏与温度和压力有关:升温提高溶质的溶解能力和使溶剂向基质中扩散,提高萃取效率;升压使溶剂在萃取的过程中始终保持液态,而液体对溶质的溶解能力远大于气体。
该方法具有样品回收率高、萃取速度快、有机溶剂使用量少、操作安全、自动化程度高等优点,被广泛应用于样品的前处理[21-22]。缺点是投资大、运行成本高,不易提取低分子量PAHs[23-24]。张亚楠等[25]在压力10 MPa、温度125℃条件下对土壤及蚯蚓样品中7种PAHs进行分析,土壤样品回收率在83.5%~110.2%,相对标准偏差为1.0%~4.6%;蚯蚓样品回收率在81.2%~97.1%,相对标准偏差为1.6%~4.2%,方法检出限为 0.15~0.85 μg/kg,且重现性好。
协同提取技术是指综合不同提取方法的优缺点、运用多种PAHs萃取技术对样品进行提取。在对多种萃取技术协调组合的条件下,实现提取技术间的优缺互补,具有提取效率高、提取时间短和有机溶剂使用量少等优点。彭驰等[26]综合利用经典索氏萃取法和固相萃取法协同提取土壤中多环芳烃,取得了较好的萃取效果,大部分多环芳烃的回收率在86.4%~119.1%。
经萃取后的土壤PAHs提取液中除了含有PAHs外,还含有一定量的杂质,这些杂质可能会干扰PAHs的定量分析。因此,在对提取液分析前要进行纯化,通用的纯化方法有柱层析法(硅胶、中性氧化铝、弗罗里土)和凝胶渗透净化法(表1)。
表1 纯化方法
PAHs在环境介质中含量一般为痕量级,且存在大量同分异构体,因此,后期监测分析时对仪器要求高。目前,检测多环芳烃的方法中被广泛应用的有高效液相色谱法(紫外、荧光、二极管阵列检测器)、气相色谱-质谱联用法,恒能量同步荧光法。此外,也有研究者使用液质联用(HPLC-MS)测定土壤中的多环芳烃。
高效液相色谱法(HPLC)发展于20世纪60年代,是ISO组织推荐使用的土壤PAHs分析的标准方法之一。其原理是采用高压输液系统将不同流动相泵入装有固定相的色谱柱,经色谱柱分离后的各成分进入检测器进行检测,从而对试样进行分析,其中,流动相可以是单一溶剂、混合溶剂和缓冲液等。
常用于多环芳烃的检测器主要有:紫外检测器(UVD)、荧光检测器(FLD)和二极管矩阵检测器(DAD)。
3.1.1 紫外检测器(UVD) 紫外检测器是利用溶质吸收紫外光进行检测的原理,根据紫外检测器检测后得出的紫外光谱图对PAHs进行定性和定量分析。紫外检测器具有快速、稳定、测定土壤中PAHs出峰时的重现性较好(尤其是对二环和三环化合物)等优点。邓樱花等[27]采用紫外检测器,建立索氏提取-高效液相色谱分离法,对土壤中5种多环芳烃进行定性和定量分析,结果表明,5种PAHs检出限在0.001~0.03 μg/mL,回收率在93.5%~112.0%,回收率高。
3.1.2 荧光检测器(FLD) 荧光检测器是利用待测物具有荧光性进行检测的原理,是使用最多的一种检测器,灵敏度高于紫外检测器一个数量级。即使是互为同分异构体的PAHs分子,其激发光谱和荧光光谱也不相同[28]。因此,可以应用荧光检测器测定土壤样品中PAHs的组分。荧光检测具有灵敏度高、选择性高、回收率高等特点。倪进治等[29]建立了超高效液相色谱系统(HPLC),采用荧光检测器定性和定量分析土壤中15种优控的多环芳烃,结果显示,检出限为0.03~1.53 μg/L,除了萘和苊外,土样加标的平均回收率为82.9%~103.4%,有较高的回收率。
3.1.3 二极管矩阵检测器(DAD) 二极管矩阵检测器是一种光学多通道检测器,发展于20世纪80年代。其具体检测过程如下:被流动相的组分对紫外或可见光进行特征吸收,然后DAD检测含有吸收信息的全部波长和波长的吸收值,提供每个色谱峰的光谱信息,利用得出的光谱和色谱谱图综合进行定性和定量分析。二极管矩阵检测器尤其适合分离分析复杂样品。
气象色谱-质谱联用测定法(GC-MS)是研究者使用最多来测定PAHs的一种方法,是ISO推荐使用的测定土壤中多环芳烃的标准方法。在美国环保局规定的优先控制的16种PAHs中,多种多环芳烃沸点较高且具有相近的化学性质,存在大量性质相近的同分异构体,因此,二者联用有利于分析测定多环芳烃[30]。该方法具有简便易行、灵敏度高、检出限低、可同时进行定性和定量分析等优点,但是GC-MS法对样品纯度要求高。
恒能量同步荧光法(CESF)具有高灵敏度、高选择性、光谱造成干扰少、操作简单等优点[31]。PAHs化合物光谱大量的重叠,激发和发射的波长非常相近,因此,恒能量同步荧光法比较适合多环芳烃系列化合物分析。但是国内鲜有CESF测定PAHs含量的研究[32]。
传统的提取技术如索氏萃取法和超声波萃取法,二者都有较高的回收率,但索氏提取时间长(24~72 h),超声波的巨能量和强穿透力可能会破坏不稳定化合物的结构。因此,发展具有快速、高效、有机溶剂使用量少、操作方便、易于实现自动化和不干扰待测物质等特点的技术成为一种必然趋势。20世纪后期,大量通过控温和控压等手段来提高萃取效率的提取技术和联用技术涌现,比如:加速溶剂萃取法(ASE)、超临界流体萃取法(SFE)、微波萃取法(MAE)等。基于环保的理念,环保无污染的绿色型提取技术越来越受到研究者的青睐。如亚临界水萃取法,萃取溶剂是水,而非有机溶剂,不会给环境带来污染;使用CO2代替有害的萃取溶剂的超临界流体萃取法等。总之,随着检测技术的进步,其发展阶段和趋势为:首先,单纯运用萃取溶剂和仪器进行萃取;其次,通过控温控压和其他技术手段(声波辐射、不同萃取媒介等)改进萃取过程,提高萃取效果和效率;最后,在前二者实现的具有高效、快速、易操作、自动化等特点的基础上,绿色无污染又成为当今技术研究的重点领域。
纯化作为土壤PAHs含量分析过程中重要的一步,在对提取液纯化时,应根据不同基质具有的特性选择合适的净化方法。此外,针对萃取后仍具有高浓度高污染的提取液可以使用多种净化方法,可以参考“优缺互补”的原则进行协调组合。
多环芳烃化合物在性质上存在比较大的差异但同时具有大量同分异构体,因此,在选择合适的预处理方法基础上,分析技术应具有选择性好、快速、灵敏度高、抗干扰能力强等特点。目前,主要采用HPLC,GC-MS和CESF等方法来测定和分析土壤中的PAHs,其中,GC-MS是研究者使用最多的多环芳烃测定方法。
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Research Progress on Extraction,Purification and Determination of PAHs in the Soil
YINRuijun,WANGYunping
(College ofResources and Environment,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,China)
This paper classifies the extraction,purification and determination of polycyclic aromatic hydrocarbons(PAHs)commonly used in the soil,and introduces its principles and advantages,disadvantages and prospects for its development trend.Extraction methods include soxhlet extraction method(SOX),ultrasonic extraction method(USE),microwave-assisted extraction(MAE)method,the method of accelerated solvent extraction(ASE),supercritical fluid extraction(SFE),solid-phase extraction(SPE)method,solid phase microextraction(SPME)method,the subcritical water extraction(SCWE)method and its synergistic extraction technique,etc.The methods of purification include cylindrical chromatography method (silica gel,neutral alumina,frolico soil)and gel filtration purification method.Measurement methods include high performance liquid chromatography method (HPLC)(UV,fluorescence,diode array detector),gas chromatography-mass spectrometry method (GC-MS)and the constant energy synchronous fluorescence method(CESF),etc.The paper can provide certain technical reference for the researchers,improve the accuracy of qualitative quantitative analysis of PAHs in soil,the soil pollution repair and protect people's health life is important through introducing systematically the extraction,purification and determination method ofPAHs in soil.
PAHs;soil;extraction;purification;determination
X53
A
1002-2481(2017)11-1894-06
10.3969/j.issn.1002-2481.2017.11.39
2017-06-13
殷瑞君(1992-),男,山西高平人,在读硕士,研究方向:土地资源管理。王云平为通信作者。