温州地区规模猪场O型口蹄疫免疫程序优化初探

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(1.温州市动物疫病预防控制中心，浙江温州 325000; 2.苍南县畜牧兽医局； 3.瑞安市农业局)

试验研究

温州地区规模猪场O型口蹄疫免疫程序优化初探

吴波1，赵妍1，姜斌1，薛成俊2，潘翔翔3

(1.温州市动物疫病预防控制中心，浙江温州 325000; 2.苍南县畜牧兽医局； 3.瑞安市农业局)

为确定口蹄疫O型灭活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+ O/GX/09-7株)的最佳首免和二免日龄，对母源抗体消长规律进行检测、分析。试验选用哺过初乳的同窝健康仔猪10头，检测母源抗体消长情况；同时选用30-70日龄哺过初乳的健康仔猪50头，每组10头，分别于30、40、50、60和70日龄首免，50、60、70、80和90日龄二免，各组分别于首免后至130日龄测定免疫抗体效价。结果表明，30日龄仔猪母源抗体效价达到高峰后逐渐下降；仔猪40日龄首免、60日龄二免的情况下，110日龄内免疫抗体合格率均维持在70%以上。

O型口蹄疫；免疫程序；猪

母源抗体在仔猪早期抵抗疫病侵扰中发挥着重要作用，这种保护会随着仔猪日龄的增长和母源抗体效价的消减而降低；但很多学者认为母源抗体对接种疫苗的干扰作用会造成免疫失败，仔猪发生疫病主要由于该疫病的首免时间不当而引起[1]。因此，掌握仔猪母源抗体消长规律是科学制定免疫程序的前提。

口蹄疫O型灭活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+O/GX/09-7株)于2014年获得新兽药证书和批准文号，能更好覆盖各种O型口蹄疫流行毒。由该毒株所制备疫苗的免疫程序，尤其是首免和二免的时间尚未见有报道。本研究以母猪及所产仔猪为试验对象，分析母猪分娩前后的O型口蹄疫免疫抗体效价和仔猪不同日龄的母源抗体效价动态变化情况；同时结合仔猪不同日龄首免和二免的免疫抗体保护性，通过对该毒株疫苗的母猪和仔猪相关保护性抗体的效价、保护率以及维持时间等指标进行评估，为全面优化该疫苗免疫程序提供借鉴。

1 材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验动物 选用哺过初乳的同窝健康仔猪10头，检测母源抗体消长情况；选用30-70日龄哺过初乳的健康仔猪50头，每组10头，分别首免和二免后进行抗体效价检测。试验期间，除O型口蹄疫疫苗免疫接种外，不接种其他疫苗，由专人负责隔离饲养，常规配合饲料饲喂。

1.1.2供试疫苗 猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+ O/GX/09-7株)由内蒙古某生物科技有限公司生产(批号：2015015)。

1.1.3检测试剂 口蹄疫O型间接血凝抗体检测试剂盒(批号：20160303201)购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.2试验方法

1.2.1免疫接种 注射部位为耳根后颈部肌肉，首次免疫剂量为1.5头份(3 mL)，二免剂量为2头份(4 mL)。

1.2.2分组采血 母源抗体消长规律：分别于20、30、40、50、60和70日龄连续采血检测；最佳首免和二免日龄试验：设A、B、C、D、E五个试验组，分别于30、40、50、60和70日龄首免，50、60、70、80和90日龄二免，各组分别于首免后至130日龄检测抗体效价。

1.2.3抗体效价检测 按照口蹄疫诊断技术规程(NY/SY 150-2000)操作，抗体效价以nlog2表示。

1.2.4判定标准 以100%凝集血清最大稀释孔为该血清样品的抗体效价。IHA效价≥5log2判定为合格，IHA效价<5log2判定为不合格，以合格数计算保护性抗体比率。

2 结果与分析

2.1母源抗体消长规律 详见表1。

表1 不同日龄仔猪母源抗体IHA效价检测结果

注：母猪分娩前后血清抗体效价为8log2。

由表1可见，仔猪母源抗体水平呈逐渐下降趋势，40日龄前抗体效价维持在≥6log2区间，40日龄后保护性抗体效价快速下降，至50日龄时保护性抗体合格率已低于70%。按照农业部规定70%合格率标准，50日龄后已无法起到有效保护。

2.2最佳首免和二免日龄 口蹄疫疫苗经首免和二免后各组抗体效价平均值、保护率及维持时间详见表2。B、C、D三组免疫效果的三个指标整体优于A组和E组，B组保护性抗体高效价免疫后维持时间与C组和D组接近。

表2 分组免疫后小猪各日龄IHA效价

注：各组(A、B、C、D和E)母猪分娩前后血清抗体效价分布在7log2-10log2区间内；每组供试仔猪10头。

结合表1和表2结果，分析获得各组仔猪在20-130日龄期间保护性抗体效价和保护率变化趋势(分别详见图1和图2)。仔猪50-70日龄的母源抗体保护率低于70%，需通过免疫刺激仔猪免疫系统在40日龄后产生高效价的保护性抗体。B组在110日龄前抗体效价平均值和保护率均能维持在5.4log2和70%以上，符合农业部规定的5log2效价下限和70%合格率标准。A组和B组虽都符合该要求，但A组抗体效价和保护率整体水平不高，且在80日龄后显著下降，均不如B组理想。C、D和E组虽然在40日龄前能依赖母源抗体保护，但分别于50、60和70日龄前均未能产生足够有效由免疫应答产生的保护性抗体。

综上所述，在母猪经O型口蹄疫免疫情况下，猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+ O/GX/09-7株)于40日龄首免、60日龄二免的情况下，其免疫抗体效价相对最佳，因母源抗体干扰引起的免疫失败或低效价水平发生的可能性相对较低。

图1 保护性抗体效价变化趋势

图2 保护性抗体的保护率变化趋势

3 小结与讨论

3.1仔猪母源抗体对疫苗免疫的影响 根据本次试验结果可以看出，在母猪具有较高口蹄疫免疫抗体效价的情况下，仔猪能够通过哺喂初乳方式获得有效的母源抗体，且维持时间至40日龄左右均能得到有效保护。母源抗体不仅能够保护低龄仔猪抵抗疫病感染，同时也可有效发挥疫苗免疫干扰的副作用[2]。A组在母源抗体滴度较高时经疫苗免疫，其免疫效果均低于其它试验组。反之，若首免日龄过晚则可能导致仔猪某一时间段暴露在低抗体效价高感染风险的环境之中。

3.2非同窝仔猪之间抗体水平检测的局限性 本次试验母源抗体(对照组)采用同窝仔猪跟踪检测，在仔猪哺喂初乳、奶头固定及前期护理工作到位情况下，同窝仔猪之间的横向抗体水平差异不大。然而，免疫试验组与对照组试验动物均属非同窝仔猪，保护性抗体效价和保护率变化趋势是对照组与试验组结合的结果。本试验场点母猪每胎产仔11-13头，且试验过程中出现个别仔猪因采血等应激因素造成的非正常状态，难以实现从出生到130日龄的全程采样，存在一定的局限性。

3.3非经免母猪与经免母猪所产仔猪免疫程序的差异 据张华才等(2005)[3]报道，非经免母猪初乳中无保护性母源抗体，仔猪在没有母源抗体干扰下，对疫苗免疫效果无影响。在存在母源抗体时，仔猪于30日龄首免、60日龄加强免疫后抗体随时间延长而逐渐降至转阴，母源抗体对疫苗免疫效果干扰严重。这就合理地解释了部分猪场为何在育肥阶段猪体血清中检测不到抗体。母猪分娩前加强免疫对仔猪获得保护性母源抗体至关重要，仔猪母源抗体具有两面性[4-5]，关键在于首免时间的控制。

3.4育肥猪110日龄前三免的必要性 目前，温州地区大部分猪场商品猪免疫2-3次，即45-50日龄首免，90日龄二免，三免无固定日龄，往往在每年4月份春防或9月份秋防时补免一次。结合图1和图2，经两次免疫的商品猪110日龄后基本丧失对口蹄疫病毒的抵抗力。据笔者观察，大部分猪场发病都是从育肥猪开始，肥猪发病后产生大量病毒，使部分具备不完全保护力的猪群，尤其是仔猪随其感染发病，出现仔猪继发感染死亡或转为“僵猪”和育肥猪耐过情况。故建议在前2次基础免疫的基础上，于90-110日龄左右加强免疫一次。

3.5其他免疫因素的影响 温州地区仔猪断奶日龄普遍为28日龄，易发生仔猪断奶应激综合征；若30日龄首免仔猪可能引起较为明显的疫苗应激副作用，对刺激机体免疫系统产生免疫应答可能带来不利影响。在免疫注射部位方面，何家惠(1999)[6]等报道，通过后海穴注射，无任何副作用，疫苗用量小，抗体滴度高于颈后肌内注射；但在临床应用上操作较为不便，尤其是大猪保定不稳，且深度难以控制，容易刺伤甚至刺穿直肠。两者各有利弊，需根据操作人员的技术水平适当选用。免疫剂量方面，黄卫平等(2012)[7]报道，大剂量使用疫苗短期内会提高仔猪的免疫保护力，但可能造成抗体水平不均衡，离散度较大，部分仔猪呈高免状态，会对二免造成很大干扰，使猪群极易在受疫病威胁地区或季节暴发口蹄疫。

[1] 吴云飞等.猪瘟、蓝耳病及猪O型口蹄疫母源抗体消长规律[J].畜牧兽医杂志, 2016,1:29-32.

[2] Wesley R D,Lager K M.Overcoming maternal anti-body interference by with vaccination human adenovirus 5 recombinant viruses expressing the hemagglutinin and the nucleoprotein of swine influenza virus[J].Vet Microbiol,2006,118:67-75.

[3] 张华才,高佃平.母源抗体干扰对猪口蹄疫疫苗免疫的影响分析[J].江西畜牧兽医,2005,5:50-51.

[4] 王峰.猪O型口蹄疫疫苗不同猪龄免疫抗体分析试验[J].广东农业科学,2011,21:118-119.

[5] 邱伯根等.母源抗体对口蹄疫疫苗主动免疫应答的影响[J].中国兽医科学,2006,36:1-4.

[6] 何家惠等.猪口蹄疫免疫程序的研究[J].畜牧与兽医,1999,2:27-28.

[7] 黄卫平,程晓等.规模化猪场仔猪口蹄疫免疫程序的制定[J].四川畜牧兽医, 2012,10:18-20.

2017-06-20

吴波(1981-)，男，浙江温州人，高级兽医师，硕士，主要从事动物疫病综合防控工作。E-mail：cris414727@126.com

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1005-7307(2017)05-0001-003