三种网状纤维染色法的比较

王晓燕 高俊岩

（北京卫生职业学院，北京 100053）

三种网状纤维染色法的比较

王晓燕 高俊岩

（北京卫生职业学院，北京 100053）

目的 对传统Gomori网状纤维染色法进行改良，对比改良染色方法与传统染色法的染色效果。方法 收集首都医科大学三博脑科医院经病理诊断为脑膜瘤的外科手术切除标本20例，进行常规切片，每个标本切片8张，随机分为4组，分别用传统Gomori染色法，改良Gomori染色法1、改良Gomori染色法2进行网状纤维染色，将网状纤维染色结果进行评分，对比染色效果。结果 传统Gomori染色法与改良Gomori染色法2相比，结果有显著性差异（p＜0.05）。改良Gomori染色法1与传统Gomori染色法与改良方法1相比，结果无显著性差异（p＞0.05）。结论 采用浸染的实验方法，缩短氨银作用时间，可以提高网状纤维染色作用效果。

网状纤维；染色；比较

网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维，较为纤细同时分支非常明显，可以在网状细胞与不同位置的细胞突之间完成自主穿行，由此可以连通成为一个固定的网状支架[1]。网状蛋白已经被公认为网状纤维的最主要功能性成分，同时也属于类型较为特殊的胶原蛋白，表层有特殊的胶糖蛋白，可以更加突出是嗜银性特点。因此还可以将网状纤维视为一种特殊的嗜银纤维。通过该种特殊特点的应用，可以实现氨液浸染产生网状纤维的还原反应，产生黑色素[2-3]。传统G o m o r i染色法与改良G o m o r i染色法2相比，结果有显著性差异（p＜0.05）。改良G o m o r i染色法1与传统G o m o r i染色法与改良方法1相比，结果无显著性差异。通过对网状纤维染色过程中所用试剂和实验时间的控制，寻求更好的网状纤维染色方法，用于网状纤维实验教学和临床病理诊断，提高网状纤维染色质量[4]。因此，网状纤维染色在病理诊断中的应用非常广泛，组织中网状纤维的多少和分布特点能给病理诊断提供重要的参考，纤维的粗细、疏密或有无断裂对于判断病变的性质程度及其发展与转归具有重要意义[5]。网状纤维染色较浅可能与作用时间有关，可在今后的实际工作中加以实践摸索。改良G o m o r i染色法2缩短了氨银的作用时间，从传统的3 min缩短到40 s，作用方式为浸染而非滴染，染液可以反复回收使用。染色结果显示网状纤维为黑色，肿瘤内部结构清晰，对比鲜明，无背景着色。传统G o m o r i染色法与改良方法2相比，结果有显著性差异（p＜0.05）。通过对网状纤维染色过程中所用试剂和实验时间的控制，寻求更好的网状纤维染色方法，用于网状纤维实验教学和临床病理诊断，提高网状纤维染色质量。该文将利用临床收集的脑膜瘤标本，对比传统G o m o r i染色法，改良G o m o r i染色法1、改良G o m o r i染色法2，确定脑膜瘤最佳的网状纤维染色方法。

1 材料和方法

1.1 材料

标本取自于首都医科大学病理诊断为脑膜瘤的外科手术切除标本20例，常规切片，每个标本切片8张。

1.2 试剂配制

①0.5% 酸化高锰酸钾溶液：0.5% 高锰酸钾95 m L，3%硫酸5 m L。②2%草酸溶液：草酸2 g，蒸馏水100 m L。

1.3 染色方法

（1）传统 G o m o r i染色：1）切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；2）0.5%高锰酸钾5 min，水洗1 min；3）2%草酸漂白2 min，以切片呈白色为度，水洗2 min；4）2.5%硫酸铁铵媒染2 min；5）蒸馏水充分水洗。6）网状纤维评分标准：＞75%区域着色清晰为4分，50%～70%为3分，25%～50%为2分，＜25%为1分，不着色0分；背景着色评分：无色为4分，＜25%区域有背景着色为3分，25%～50%为2分，50%～75%为1分，＞75%为0分，蒸馏水洗2次；13）苏木素复染；14）常规脱水，透明，封固。（2）改良G o m o r i染色法1：1）切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；2）1%过碘酸5 min；3）水洗 2 min；4）2.5%硫酸铁铵媒染 2 min；5）蒸馏水充分水洗；6）G o m o r i氨银溶液染色3 min，蒸馏水洗3次；7）10%甲醛还原5 min；8）蒸馏水洗2次；9）0.2%氯化金调色2 min；10）蒸馏水洗2次；11）5%硫代硫酸钠中固定2 min；12）自来水洗数分钟，蒸馏水洗2次；13）苏木素复染；14）常规脱水，透明，封固。（3）改良 G o m o r i染色法 2：1）切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；2）0.5%高锰酸钾5 min，水洗1 min；3）2%草酸漂白2 min，以切片呈白色为度，水洗2 min；4）2.5%硫酸铁铵媒染 2 min；5）蒸馏水充分水洗；6）G o m o r i氨银溶液染色40 s，蒸馏水洗3次；7）10%甲醛还原5 min；8）蒸馏水洗 2次；9）0.2%氯化金调色 2 min；10）蒸馏水洗2次；11）5%硫代硫酸钠中固定2 min；12）自来水洗数分钟，蒸馏水洗2次；13）苏木素复染；14）常规脱水，透明，封固。

1.4 观察方法

光学显微镜下观察染色效果，根据网状纤维着色、背景着色、染色背景进行评分。网状纤维评分标准：＞75%区域着色清晰为4分，50%～70%为3分，25%～50%为2分，＜25%为1分，不着色0分；背景着色评分：无色为4分，＜25%区域有背景着色为3分，25%～50%为2分，50%～75%为1分，＞75%为0分；背景污染评分：无色为4分，有1处为3分，2处为2分，3处为1分，≥3处为0分。3项分值相加为该例染色片评分（最高12分），各组总积分/例数=染色质量平均分[6]。

1.5 统计学分析

应用S P S S统计软件包对结果进行统计学分析，采用单因数方差分析对各组间评分进行比较。

2 结果

传统G o m o r i染色法（图1）染色结果显示结构对比清晰，网状纤维呈现黑色，但有明显背景着色，而改良方法2（图2）网状纤维为黑色，结构清晰，对比鲜明，无背景着色[7]。传统G o m o r i染色法与改良方法2相比，结果有显著性差异（p＜0.05）。改良方法1（图1）背景干净，结构对比清晰网状纤维染色为黑色，但是颜色略浅，传统G o m o r i染色法与改良方法1相比，结果无显著性差异（见表1）

表1 脑膜瘤组织三种网状纤维Gomori染色质量对比

3 结论与讨论

图1 脑膜瘤组织传统Gomori染色法

图2 改良Gomori染色法1

图3 改良Gomori染色法2

我院病理检验技术教学和临床病理实验室网状纤维染色常用G o m o r i法，传统的G o m o r i染色法一般需经过氧化、漂白、媒染、浸银、还原、调色、固定几个步骤完成。传统G o m o r i染色法进行改良，采集首都医科大学病理诊断为脑膜瘤的外科手术切除标本，常规切片，进行网状纤维染色。改良G o m o r i染色法1用过碘酸取代了高锰酸钾氧化作用和草酸的漂白作用，实验时间为5 min，此法可缩短3～5 min实验时间，简化了实验步骤，染色结果显示瘤体内部结构对比清晰，漂白一般使用草酸，利用草酸的还原作用，使切片成为白色。媒染一般使用硫酸铁铵，硫酸铁铵可以提高网状纤维对银盐的亲和力，提高网状纤维和背景的对比度。浸银一般使用氨银溶液，此步骤为关键环节，氨银溶液的配置以及氨银液染色时间是关键。配制氨银溶液时，玻璃器皿必须十分清洁，而且需双蒸水，禁用自来水。甲醛是还原剂，能把结合在网状纤维上的氨银络合物还原成棕黑色的金属银镀在网状纤维表面。甲醛的还原时间要严格控制不能过短也不能过长否则染色效果不佳。氯化金起到调色作用，调色时间一般为1～2 min。最后用硫代硫酸钠进行固定，硫代硫酸钠能清除未被甲醛还原和未与氯化金作用的银，使切片着色固定清晰持久[8，9]。该文对传统G o m o r i染色法进行改良，采集首都医科大学病理诊断为脑膜瘤的外科手术切除标本，常规切片，进行网状纤维染色。改良G o m o r i染色法1用过碘酸取代了高锰酸钾氧化作用和草酸的漂白作用，实验时间为5 min，此法可缩短3～5 min实验时间，简化了实验步骤，染色结果显示瘤体内部结构对比清晰，背景干净，网状纤维染色为黑色，但是相对于传统G o m o r i染色法颜色较浅，通过网状纤维着色、背景着色、背景污染物进行评分，与传统G o m o r i染色法比较，无显著差异。网状纤维染色较浅可能与作用时间有关，可在今后的实际工作中加以实践摸索。改良G o m o r i染色法2缩短了氨银的作用时间，从传统的3 min缩短到40 s，作用方式为浸染而非滴染，染液可以反复回收使用。染色结果显示网状纤维为黑色，肿瘤内部结构清晰，对比鲜明，无背景着色。传统G o m o r i染色法与改良方法2相比，结果有显著性差异（p＜0.05）。综上所述，通过对网状纤维染色过程中所用试剂和实验时间的控制，寻求更好的网状纤维染色方法，用于网状纤维实验教学和临床病理诊断，提高网状纤维染色质量。

[1] 染英杰，凌启波，张威.临床病理学技术[M].第1版.北京：人民卫生出版社，2011：97-102.

[2] 韩庆伟，张云.特殊染色网状纤维在病理诊断中的应用[J].实用医技杂志，2007，14（11）：1420.

[3] 李淑莲，李丽娟，董祥梅.网状纤维染色改良新方法[J].牡丹江医学院学报，2011，32（3）：61-62.

[4] 金玉兰，田澄，石少辉，等.网状纤维和α- 平滑肌肌动蛋白/ED-1免疫组织化学双重染色方法[J].中华病理学杂志，2007，36（3）：210-211.

[5] 田玉旺，李琳，朱红艳，等.提高网状纤维染色质量的技术探讨[J].中国组织化学与细胞化学杂志，2012，21（3）：316-318.

[6] 朱育连，黄海建，熊喜生，等.改良Gomori网状纤维染色减少背景染色的体会[J].临床与实验病理学杂志，2011，27（11）：1254-1255.

[7] 杨世峰，程国平.介绍一种网状纤维染色改良法[J].解剖学杂志，2010，33（1）：132-133.

[8] Kuter DJ，Bain B，Mufti G，Bagg A，Hasserjian RP. Bone marrow fibrosis：pathophysiology and clinical significance of increased bone marrow stromal fibres[J].Br J Haematol，2007，139（3）：351-362.

[9] 王炳海，方庆全，叶关华.提高网状纤维染色病理实验教学质量的探讨[J].齐齐哈尔医学院学报，2013，34（7）：1029-1030.

The Comparation of Three Reticular Fiber Staining

Wang Xiaoyan Gao Junyan
（Beijing Health Vocational College，Beijing 100053，China）

Objective To compare the effect of three reticular fiber staining through improving the methods of reticular fiber staining. Methods The specimens of 20 meningeal tumour were collected from Sanbo Brain Hospital Capital Medical University. The specimens then were made into 160 regular histological section (20*8) which were divided into three groups: traditional Gomori reticular fiber staining group, improved Gomori reticular fiber staining 1 group, Gomori reticular fiber staining 2 group. The effect of reticular fiber staining was observed and graded then all the data were analyzed by the software SPSS statistically. Results Compared with traditional Gomori reticular fiber staining group, improved Gomori reticular fiber staining 2 group has better effect（p＜0.05）.There was no significant difference between Gomori reticular fiber staining 1 group and traditional Gomori fiber reticular staining group（p＞0.05）. Conclusion The effect of fiber was improved by dipping and shortening the time in silver nitrate.

reticular fiber；staining；comparation

北京卫生职业学院院级课题基金资助项目（编号ZY2015—03）

王晓燕，硕士，讲师，研究方向：心血管病理生理、网状纤维染色。