栀子苷鼻用温敏凝胶制剂的制备及药代动力学研究

陈晓燕+姜雯雯

【中图分类号】R944 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2017）10--01

栀子苷（Geniposide）为中药栀子果实的主要指标成分之一，近期研究表明[1]，栀子苷对脑缺血级联反应过程具有多个药物靶点作用，能较好的改善脑缺血损伤。鼻腔给药能有效使得鼻-脑传递药物得以实现，故治疗改善脑缺血损伤是一种优选的给药方式。但一般的药物溶液鼻腔给药具有流失率大，滞留时间短，且容易刺激到气管等缺点，一般临床上很难接受。温敏凝胶制剂具有鼻腔黏附性能延长其在鼻豁膜的滞留时间，大大减少药液流失，故能提高生物利用率，减少药液对咽部的刺激，提高患者的依从性。故本文将栀子苷为模型药物制备成温敏凝胶制剂，鼻腔给药后对其体内的血药浓度进行监测，考察其生物利用度。

1 仪器与材料

1.1 药品、试剂栀子苷（四川双子叶生物科技有限公司，含量≧95%）；栀子苷对照品：中国药品生物制品检定所（批号110749-201512）；乙腈（色谱纯，德国默克集团公司）；泊洛沙姆407（BASF公司，NO.00860）；P188（德国BASF公司）；尼泊金酯（纯度99%）；其余试剂（分析纯，市售）；双蒸水（自制）

1.2 仪器PHYSICAMCR101流变仪（奥地利安东帕有限公司）；Agilent1200高效液相色谱仪（包括G1322A脱气器、G1310A四元泵、G1316A柱温箱、G1321AFLD检测器、Agilent–Chemistry工作站，安捷伦科技有限公司）；TSK-GEL，ODS-100S色谱柱（4.6mm×150mm，日本-株式会社）；SIGMA3-18K型高速冷冻离心机（厦门精艺兴业科技有限公司）；BT–2000氮气吹干仪（北京八方世纪科技有限公司）；XW-80A微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）；生物利用度研究数据处理通用程序DAS2.0。

1.3 动物 雌性SD大鼠10只，体重（200±10）g，由江西中医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK（赣）2005-0001，实验期间饲以固体饲料，自由饮水。实验前禁食不禁水。

2 方法与结果

2.1 栀子苷温敏凝胶的制备

将处方量的栀子苷、Nacl溶于蒸馏水中，用磁力搅拌器搅拌并加入适量的P407及P188，使其均匀分散，放置24小时，使凝胶充分溶胀，即得。

2.2 胶凝温度的测定

鼻用热敏凝胶是一种在室温下液体，而接触鼻腔膜后能产生胶凝变化的制剂。鼻腔内温度为32-33℃，故制剂的胶凝温度应选择在33℃以下。

测定方法：取凝胶样品溶液1mL置流变仪样品台上，平台起始温度设置为10℃，再以1℃·min-1的速率缓慢升温至40℃，每半分钟测量一次粘度。以粘度的改变来监测其胶凝及胶融温度。

2.3 处方设计

2.3.1 处方中P407浓度对胶凝相变温度的影响

有研究表明[2]当泊洛沙姆407的浓度高于16%时能可逆地形成形成澄明的水晶状凝胶，其胶凝温度随P407浓度增大而降低。故实验中设定14%、16%、18%、20%的P407，以相变温度为指标，考察其对胶凝温度影响。其结果见图1：

由图1可知P407为14%时基本成不了凝胶，16%时其胶凝温度为（28.5±0.1）℃，16%以上时随着P407浓度的增大其胶凝温度依次减小，故选用P407浓度为16%时最优。

2.3.2 不同浓度栀子苷与胶凝温度的关系

药物的含量有可能会影响其胶凝温度，故设定浓度为0%、1.6%、3.2%的栀子苷，以胶凝温度为指标，考察其不同浓度对16%P407胶凝温度影响。结果栀子苷的加入对制剂的胶凝温度并无影响，见图2。

2.3.2 P188对制剂胶凝温度的影响

一定浓度的P188加入到P407温敏凝胶中对胶凝温度具有一定的调节作用，本研究考察了P188浓度对16%P407的影响，结果P188浓度为0%，2.5%，5%时，膠凝温度分别为（25.3±0.2）℃ ，（30.7±0.1）℃，（35.5±0.3）℃ 。结果表明，P188可以使胶凝温度升高，随着P188浓度的增加同一浓度P407下胶凝温度升高，最佳用量为2.5%。见图3。

2.4 温敏凝胶的流变学评价

2.4.1 P407浓度的影响

P407浓度低于10%的稀溶液不能表现出豁度的明显变化，呈现牛顿流体状态，15%P407溶液在20℃以上黏度会发生轻微的增加[3]。本研究中发现P407浓度大于16%（w/w）时，在某温度黏度会有明显的增加，也就存在一个黏度突变的温度，本文中定义为凝胶溶液的黏度突变点，加有0.9%的NaCl的P407浓度分别为16%、18%、20%黏度突变点分别为28℃、24℃、22℃。14%时，凝胶基本没形成，故黏度也没太大改变，见图4。

2.4.2 药物的影响

取0%、1.6%、3.2%的栀子苷，观察其对0.9NaCl+16%P407凝胶突变温度的影响，结果显示，随着栀子苷药物浓度的增加，其对凝胶溶液的黏度突变点无影响，见图5。

3 初步药动学实验

3.1 色谱条件的选择

按2015年版《中国药典》中栀子药材的栀子苷含量测定方法[4]， 色谱柱：TSK-GEL，ODS-100S（4.6 mm×150mm，5μm），流动相：乙腈-水（15∶85），流速：1.0 mL·min-1，检测波长：238 nm，柱温：25℃，进样量：20μL。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取栀子苷对照品1.29mg，用甲醇溶解并定容至50mL，制成25.8μg·mL-1的对照品贮备溶液，备用。endprint

3.3 血浆样品的预处理

经眼眶取血0.5mL于肝素化的试管中，轻轻混匀，4000 r·min-1离心15min，分离血浆200?L，加入800?L的乙腈（溶液）沉淀蛋白，漩涡混匀，4000 r·min-1离心15min，吸取上清液，40℃水浴通氮气吹干，残渣用200μL甲醇溶解，18000r·min-1离心15min，吸取上清液进样检测。

3.4 给药及采血方法

选择200±10g♀大鼠10只，分两组，禁食12h，分别鼻腔给予栀子苷溶液（8mg·kg-1）及温敏凝胶制剂（2 mg·kg-1）。栀子苷溶液组给药后于5，15，30，45，60，90，120，180，240，360，480，600min后取血；制剂组给药后于5，15，30，45，60，90，120，180，240，360，480，600min后取血。余按上述血浆样品预处理方法处理。检测其药物浓度。

3.5 药物动力学数据分析

不同时间点的血药浓度，经DAS统计拟合后，以AIC和R判断房室模型和选择参数，两者都为二室模型，药代动力学参数见下表1：

根据F制剂相对溶液=AUC制剂*8/AUC溶液*2= 5.231

由结果可得温敏凝胶制剂具有明显的缓释作用，t1/2延长了186.45min，其相对生物利用度为5.231。

4 讨论

对于鼻腔给药方式预防或治疗脑部疾病的研究越来越多，经鼻给药后药物吸收快，同时可以避免肝脏首过效应，故是一个新型的给药方式。但由于鼻腔内部的结构，具体异物清除作用，一般药液滴入鼻腔后滞留时间会很短，且药物容易流失，从而药物的吸收及疗效会有很大的影响。温敏凝胶是一种高度的三维网络亲水性结构，其组织相容性良好，与鼻粘膜亲和力强、能吸附于鼻腔膜上，延长滞留时间，且在一定温度下能实现溶液—凝胶的转变，故在鼻腔给药制剂上应用非常广泛。

本文以泊洛沙姆407（P407）为基质，加入适量的防腐剂及P188，以凝胶温度及凝胶的流变学评价为考察指标，筛选出最优处方为：栀子苷（主药）2g；泊洛沙姆407（凝胶基质）16g；泊洛沙姆188（胶凝温度调节）2.5g；尼泊金酯（抑菌剂）2g；氯化钠（调等渗并促释放）0.9g；加水至全量使成100g。同时对其药代动力学进行评价，在药代动力学剂量的选择上，根据前期实验摸索，药液滴鼻给药8mg·kg-1能够达到药效浓度而温敏凝胶制剂滴鼻给药2 mg·kg-1就也能够达到药效浓度，考虑到温敏凝胶制剂可能有提高生物利用度，故先采取小劑量浓度进行制剂的制备，并对其药代学与溶液的进行初步对比。从药代动力学实验证明，栀子苷温敏凝胶剂型在体内具有明显的缓释作用，与栀子苷溶液体内吸收代谢相比其t1/2明显延长，AUC值明显升高，延长了体循环时间，说明凝胶制剂具有一定的缓释作用，能够延长其药效。

参考文献

孙媛，刘波，赵媛.妇黄宁温敏凝胶的制备及体外释放研究[J].《时珍国医国药》，2016 （2）：363-366.

王超君，卓阳，卢芳芳，等. 温敏凝胶材料成胶机制的研究进展[J].中国药房，2013（37）：3545-3547.

Smabhaji SP，Annat RP，Kaashaeb RM，et al. Pluronic gels for nasal delivery of Vitmain B12[J]. Int J Pharm.，2010，270（1）：37-45.

国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S]. 北京：化学工业出版社， 2015：173.endprint