胶体金三线定量法，革新的霉菌毒素检测方法

卜庆婧

胶体金技术又称侧流向免疫层析技术，是以胶体金作为示踪标记物应用于样品中待测物检测的一种免疫检测技术，可用于样品中待测物质的快速定性或定量检测，是一种稳定、灵敏的检测方法。该方法操作简单，无需专业培训，几分钟即可完成检测，非常适用于现场快速检测。目前，胶体金免疫层析技术在霉菌毒素检测中的应用已经非常广泛，但由于只有一条检测线和一条质控线，通常只能进行定性检测，无法准确定量。针对这一情况，美国Charm公司的科学家对定性霉菌毒素检测条进行了改进，增加了一条检测线，首创三线定量检测条，即包括两条检测线和一条质控线，同时结合读数仪，可实现准确定量。Charm Rosa霉菌毒素定量检测系统采用的就是三线定量法。

Charm Rosa霉菌毒素定量检测系统能够在5分钟内快速定量测定粮食及其制品中的多种霉菌毒素，包括黄曲霉毒素、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、伏马菌素和T2/HT2毒素。

Charm Rosa霉菌毒素检测系统组成

Charm Rosa（Rapid One Step Assay）霉菌毒素检测系统由检测条、孵育器和读数仪三部分组成。其中检测条采用3线设计，包括2条检测线（T线）和1条质控线（C线），这样便于准确定量，并增加了动态检测范围，因此检测范围较其它胶体金检测条更宽。另外，检测条采用封闭包装，即可防潮，又可防止检测条因暴露在空气中而被污染，并且不同检测项目的检测条颜色不同，因此非常便于区分。孵育器为保温装置，能够促进样品流动并确保反应温度在合适范围内，该孵育器可自动倒计时，孵育结束后发出“哔哔”声。读数仪中有内置标准曲线，可读取定量检测结果。三线定量检测条及读数仪中内置的标准曲线矩阵是准确定量的保证。

Charm Rosa霉菌毒素检测系统的检测原理

试样提取液中的霉菌毒素与检测条中的胶体金微粒发生反应，霉菌毒素与胶体金微粒的结合物及胶体金微粒在侧流作用下移动，当到达检测线时，包被的抗原与胶体金微粒结合发生呈色反应，其颜色深浅与试样中霉菌毒素的含量相关。用读数仪测定检测条上检测线和质控线颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置的标准曲线即可计算出试样中霉菌毒素含量。

Charm Rosa霉菌毒素检测系统的优点

样品处理简单快速：以呕吐毒素为例，准确称取10.00g试样于提取容器中，加入20.0mL蒸馏水或去离子水，密闭，振荡提取1～2min，静置后用滤纸过滤，或取1～1.5mL混合液于离心管中，离心1min。取滤液或离心后上清液100μL于另一离心管中，加入1.0mL稀释缓冲液，充分混匀，待测。

检测步骤一步化：将检测条平放于45℃孵育器凹槽中，打开加样槽，移取300μL待测溶液至检测条加样孔中，关闭孵育器。孵育5min后，从孵育器中取出检测条，放入读数仪中进行测定，即可得出定量检测结果。

结果准确：2012年，国家粮食局标准质量中心组织多家省级粮食质量监测中心对4种Charm Rosa霉菌毒素（黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A）检测条进行了测试。测试过程中分别采用ROSA测试条与高效液相色谱标准方法对9组阳性样品进行检测，采用配对T检验法比较两种方法的检测结果是否存在显著性差异。经计算，4个项目的液相色谱参考值与ROSA测定值之间均无显著差异。

以高效液相色谱法的测定结果作为认定值，将ROSA快速测试条的测定结果与之比较，按正确度（%）=检测值/认定值×100%计算，黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A的平均准确度分别为99%、106%、117%和95%，均在粮油检测行业标准规定的范围内。

总结而言，Charm Rosa霉菌毒素检测系统具有以下特点。首先前处理简单，制备样品过程所需时间短，检测速度快，5分钟即可完成对真菌毒素的定量测定，这也是其他手段无可比拟的，此系统是业内最齐全、最完整的霉菌毒素检测项目之一。此外，本系统率先推出霉菌毒素水提取技术（WET），无需使用有机溶剂和霉菌毒素标准品，减少了实验对工作人员健康的伤害。最重要的一点是此系统检测结果与国标方法具有较高的一致性，为国家粮食局粮油检测行业标准LS/T 6111-2015《粮油检验 粮食中黄曲霉毒素B1测定 胶体金快速定量法》、LS/T 6112-2015《粮油检验 粮食中玉米赤霉烯酮测定 胶体金快速定量法》、LS/T 6113-2015《粮油检验：粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇测定：胶体金快速定量法》、LS/T 6114-2015《粮油检验 粮食中赭曲霉毒素A测定：胶体金快速定量法》中所采用的方法。该产品经过USDA-GIPSA（美国农业部-美国谷物检验、批发及畜牧场管理局）和FG IS（联邦谷物检测局）认证，可广泛用于实验室、粮仓、农产品收购站等各种场合真菌毒素的检测。

Charm Rosa霉菌毒素5分钟快速定量检测系统小巧便携。为了满足现场快速检测的需求，中检柏泰生物技术（北京）有限公司还可提供霉菌毒素检测整体箱，整体箱中包括从样品制备到完成检测所需的所有仪器设备，真正实现现场快速检测。该系统在全球应用非常广泛，被誉为全球四大粮仓的ADM、邦吉（Bunge）、嘉吉（Cargill）、路易达孚（Louis Dreyfus）均采用Charm Rosa霉菌毒素检测系统进行霉菌毒素的检测。在国内，该系统被广泛应用于粮油收储单位、检测机构及粮油饲料生产企业，如中储粮、粮油质量检测中心、中粮、大北农、新希望六和等都是Charm Rosa霉菌毒素检测系统的用户。

Charm公司简介

Charm公司成立于1978年，总部位于美国马萨诸塞州，其创始人Stanley E. Charm博士是牛奶中抗生素快速检测试剂的发明者，公司研发人员多毕业于麻省理工大學。公司自成立以来一直致力于食品安全、水质和环境快速检测产品的开发，其产品包括霉菌毒素、兽药残留、农药残留、微生物、碱性磷酸酶、商业无菌等快速检测产品，其中Charm Rosa/EZ抗生素残留检测系统、Charm Rosa霉菌毒素检测系统、EPIC商业无菌检测系统在国内外应用非常广泛。endprint