昌江县地中海贫血的基因型分析

陈俊良，李 莉

(昌江县人民医院检验科，海南 昌江 572700)

昌江县地中海贫血的基因型分析

陈俊良，李 莉

(昌江县人民医院检验科，海南 昌江 572700)

目的 了解昌江县地中海贫血的基因型及分布特点。方法 收集2015年2月至2017年4月在昌江县人民医院进行地中海贫血基因检测的1 328人，采用Gap-PCR法检测3种常见的缺失型α地中海贫血基因和PCR反向点杂交(PCR-RDB)法检测17个常见突变位点的β地中海贫血基因，数据采用SPSS17.0统计软件进行分析。结果 昌江县地中海贫血检出率为33.43%，其中α地中海贫血占总地中海贫血的84.01%，前四位α地中海贫血的基因型及构成比分别是-α4.2/αα (36.46%)、-α3.7/αα (36.19%)、--SEA/αα (11.8%)，-α3.7/-α4.2(7.77%)；β地中海贫血占总地中海贫血的9.91%，检出四种突变类型，其基因型及构成比分别是CD41-42(63.64%)、IVSⅡ-654(15.91%)、-28(11.36%)、CD17(9.09%)；αβ复合型地中海贫血27例，占总地中海贫血的6.08%，主要以CD41-42合并α4.2/αα和-α3.7/αα为主。结论 昌江县地中海贫血基因的检出率较高，以α地中海贫血居多，分布具有区域性的特点。

地中海贫血；基因型；基因检测

地中海贫血(thalassemia)简称地贫，是一种常染色体隐性的遗传病，由于体内珠蛋白合成功能降低甚至丧失引起小红细胞、低色素的贫血[1]，在我国主要以α和β型的地贫最常见[2]，主要分布在我国的南方，特别是广东省、广西省及海南省发病率较高。由于重型α地贫患儿大多数在怀孕的中晚期宫内死亡，而重型β地贫患儿除了定期输血、除铁治疗和造血干细胞移植外，尚无有效的治愈方法，只能通过生育前进行胎儿的地贫基因检测，提早发现并终止妊娠，从而避免重型地贫患儿的出生[3]。本次通过跨跃断裂位点聚合酶反应(Gap-PCR)和聚合酶链反应反向斑点法(PCR-RDB)分子诊断技术对α、β地贫进行相应的基因检测，了解昌江县地贫的基因型及分布特点，为该地区地贫的防控提供比较准确可靠的信息。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2015年2月份至2017年4月份在昌江县人民医院参与过α、β地贫基因检查的1 328人，年龄8个月～53岁，男性432人，女性896人，所有检查对象或其家属均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 样本采集和处理 用柠檬酸钠抗凝管采集静脉血2 mL，及时送检，如不能及时送检暂放冰箱2℃～8℃冷藏。

1.2.2 基因型检测 所采集的标本送往广州金域医学检验中心，采用Gap-PCR法对3种常见的缺失型α地贫基因进行检测，采用PCR反向点杂交(PCR-RDB)法对17个常见突变位点的β地贫基因进行检测。

1.3 统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行数据分析，采用描述性方法，分析昌江县地贫基因型及构成比；计数资料比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 地贫基因检出率 本次地贫检出率为33.43%(444/1 328)，其中α地贫占总地贫的84.01%(373/444)，β地贫占总地贫的9.91%(44/444)，αβ 复合型地贫占总地贫的6.08%(27/444)。

2.2 α与β地贫的基因类型及其分布 本次检出373例α地贫和44例β地贫，其基因型和构成比见表1，前四位α地贫的基因型及构成比分别是-α4.2/αα(36.46%)、-α3.7/αα(36.19%)、--SEA/αα(11.8%)，-α3.7/-α4.2(7.77%)。根据临床特点区分，静止型271例，所占比例为72.65%；标准型92例，所占比例为24.67%；中间型10例，所占比例为2.68%；本次检测的α地贫三种基因型(静止型、标准型和中间型)的构成比与海口市[4]、琼海市[5]和三亚市[6]进行比较，差异具有显著统计学意义(χ2=262.253，P＜0.01)，这四个地区的α地贫基因型分布见表2。另外检出的β地贫主要以CD41-42突变为主，共28例，占β地贫的63.64%。只检出四种突变类型，其基因型以及构成比分别是：CD41-42(63.64%)、IVSⅡ-654(15.91%)、-28(11.36%)、CD17(9.09%)。昌江县、海口市[4]、琼海市[5]和三亚市[6]的前四位β地贫基因型分布比较见表3。

表1 昌江县α和β地贫基因型及构成比

表2 四个地区的α地贫基因型分布[例(%)]

2.3 αβ复合型地贫基因类型及其分布 本次检测出αβ复合型地贫27例，占总地贫的6.08%，以CD41-42合并α4.2/αα和-α3.7/αα为主，其基因类型及其分布如表4所示。

表4 昌江县αβ复合型地贫基因型

表3 四个地区主要的β地贫基因型分布(%)

3 讨论

本次研究发现昌江县地贫检出率为33.43%，检出373例α地贫基因，占总地贫基因的84.01%，排列前四位的α地贫基因型为静止型-α4.2/αα (36.46%)、静止型-α3.7/αα (36.19%)、标准型-SEA/αα (11.8%)以及标准型-α3.7/-α4.2(7.77%)。本次结果显示，昌江县地贫检出率明显高于海南省的平均水平(23.46%)[7]，主要α地贫基因型为-α4.2/αα (左缺失)和-α3.7/αα (右缺失)，也是昌江县和三亚市的主要α地贫类型，在海南省黎族人群中分布最广泛，但海口市和琼海市主要是-SEA/αα，也被称为东南亚缺失型，是我国南方最常见的地贫类型。而昌江县α地贫基因型的分布与海口市、琼海市和三亚市比较差异有显著统计学意义(P＜0.01)，可能由于各自的地理位置、气候变化以及不同的民族人群之间相互的融合、通婚等有一定的关系，导致海南省四个地区之间的α地贫基因型既有相同点又有各自的特点。由于α地贫静止型只缺失一个基因，也少有临床症状，血液学指标多数在正常参考范围内，用传统的血液学分析方法筛查难以区分，因此在静止型地贫的高发区，有必要做基因诊断来筛查地贫，从而避免出现漏检。

本次研究发现昌江县β地贫44例，占总地贫的9.91% ，只 检 出 CD41-42(63.64%)、IVSⅡ -654(15.91%)、-28(11.36%)和 CD17(9.09%)四种突变类型，说明昌江县β地贫的突变类型比较少，没有其他地区复杂，主要突变类型为CD41-42，与海口市、琼海市和三亚市是相同的，其他IVSⅡ-654、-28及CD17的检出率也都非常高，而且其检出率大小排列顺序也基本相同，这与张续业等[8]和徐卫华等[9]的报道结果相一致。由此可见，海南省各地区主要的β地贫突变类型基本相同，没有明显的差异。

除此之外，本次研究还检出七种类型的αβ复合型地贫27例，占总地贫基因的6.08%。主要以CD41-42合并-α4.2/αα和-α3.7/αα居多，占αβ复合型地贫的74.07%，可能是α地贫基因型-α4.2/αα和-α3.7/αα与β地贫中的CD41-42在昌江县地贫中分布广泛的原因。有关文献报道，αβ复合型地贫的患者，无论与α或β地贫的患者婚配，下一代均可能生出中或重型地贫的患儿，如果双方都是αβ复合型地贫患者，生出重型患儿的概率将会大大提升[10]。由于αβ复合型地贫只显示出HbA2和(或)HbF水平升高等β地贫所具有的血液学方面的特征，而掩盖了α地贫，仅仅通过血液学方面的特征很难鉴别出αβ复合型地贫和β地贫，因此对于β地贫的携带者，应该同时检测β和α地贫基因型，建议采用准确率高的PCR-RDB法进行β地贫的基因检测[11]，并采用Gap-PCR法进行α地贫的基因检测[12]，提高检出率，以免漏诊，从而降低重或中型地贫患儿的出生率。

本研究初步了解了昌江县地贫的基因类型和分布特点，对本地的地中海贫血防治具有重要的意义。近年来海南省各市县计划生育服务站免费对婚前夫妇及产前孕妇进行常规的地贫筛查及基因检测，在重型地贫患儿出生防范方面取得很大的进步。但偏远的贫困地区由于地贫防治宣传力度仍不足，部分育龄夫妇还没有意识到地贫的危害性，加上强制性婚前检查制度已取消，导致每年仍有少数的重型地贫患儿出生。根据重型地贫的规范性输血治疗原则[13]，每5周至少要输血一次，每次200 mL/10 kg，估算一名重型地贫患儿一年至少要输2 086 mL的红细胞悬液。目前在本院进行长期输血治疗的重型地贫患儿15人，一年至少需要3.129万mL的红细胞悬液，而海南省血液中心血库长期供血紧张，导致部分患儿不能及时输血治疗而影响生存质量。另外，长期反复输血的地贫患儿还需要去铁治疗，其治疗费用也非常昂贵，即使医疗保险也仅能报销部分的医疗费用，这对患儿的家庭和社会都是极大的经济负担。因此，有必要建立一个由政府主导的地贫基因防控网络数据库及更加完善的地贫筛查防范体系，从而实现重型地贫患儿零出生率的理想目标。

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Genotypes of thalassemia in Changjiang County.CHEN Jun-liang,LI Li.Department of Clinical Laboratory,

Changjiang People's Hospital,Changjiang 572700,Hainan,CHINA

Objective To understand the genotypes and distribution characteristics of thalassemia in Changjiang County.Methods From February 2015 to April 2017,1 328 people from Changjiang People's Hospital were examined for the genetic test of thalassaemia.Gap-PCR was utilized to detect three common genes in deletional α-thalassemia,and PCR-reverse dot blot(PCR-RDB)assay was applied to detect 17 common mutation sites in β-thalassemia.SPSS17.0 software was used in the statistical analysis.Results The positive rate of thalassemia in Changjiang County was 33.43%,and α-thalassemia took up 84.01%in all detected thalassemia.The ranking genotypes in α-thalassemia were-α4.2/αα(36.46%),α3.7/αα (36.19%),--SEA/αα (11.8%)and-α3.7/-α4.2(7.77%),respectively;β-thalassemia took up 9.91%in all detected thalassemia with four mutated types detected,namely,CD41-42(63.64%),IVSⅡ-654(15.91%),-28(11.36%)and CD17(9.09%);there were 27 cases of α-β compound type of thalassemia,with a proportion of 6.08%in all thalassemia cases.CD41-42 with α4.2/αα or-α3.7/αα was the main form in genotype.Conclusion The positive rate of thalassemia gene is relatively high in Changjiang County with a major form of α-thalassemia,and the distribution of thalassemia has regional characteristics.

Thalassemia;Genotype;Gene detection

R556

A

1003—6350（2017）19—3163—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.19.022

陈俊良。E-mail：chenjunliang1314@126.com

2017-04-17)