巴州部分地区牦牛黄牛新孢子虫病循环抗体检测

吉尔格力 ， 许正茂 ， 刘梦丽 ， 乔格拉森 ， 巴音查汗

(1. 新疆巴音郭楞职业技术学院 ， 新疆 库尔勒 841000 ； 2. 新疆农业大学动物医学学院 ， 新疆 乌鲁木齐 830052)

巴州部分地区牦牛黄牛新孢子虫病循环抗体检测

吉尔格力1， 许正茂2， 刘梦丽2， 乔格拉森1， 巴音查汗2

(1. 新疆巴音郭楞职业技术学院 ， 新疆 库尔勒 841000 ； 2. 新疆农业大学动物医学学院 ， 新疆 乌鲁木齐 830052)

新孢子虫病(Neosporiasis)是由犬新孢子虫(Neosporacaninum)寄生在牛、羊、马、犬、鹿等多种宿主动物细胞内的一种原虫病。已知犬、郊狼、狐狸等是犬新孢子虫的终末宿主兼中间宿主；奶牛、黄牛、牦牛、马、羊、鹿等多种哺乳动物均是其中间宿主[1]。新孢子虫病对牛的危害尤为严重，主要引起母畜流产、死胎和产弱胎、新生胎儿运动神经障碍等疾病，该病可通过垂直传播和水平传播。新孢子虫病已经在世界范围内广泛传播，美国、澳大利亚、新西兰、比利时、日本、韩国等70多个国家和地区均有发生，我国内蒙古、新疆、青海、河南、河北、吉林、北京等地区都有报道[1～5]。本病一年四季均可发生，引起的流产呈散发性或地方性流行，患病母畜可反复发生流产[6]。目前，尚无有效药物和疫苗来防治本病，所以，对该病的快速检测、监控是防控该病的重要手段。近来地方上发现牦牛、黄牛有流产，故本试验应用由新疆农业大学寄生虫实验室已研制的 “新孢子虫rELISA抗体检测试剂盒”，对巴州和静县巴音布鲁克高山牧场的牦牛血清样品和库尔勒舍饲黄牛血清样品进行新孢子虫抗体rELISA检测，以便分析其流产病因，为当地养殖牛业的健康发展提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 抗原与标准血清 新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒由新疆农业大学寄生虫实验室研发；新孢子虫标准阴、阳性血清由新孢子虫病IDEXX试剂盒筛选后保存于寄生虫实验室。

1.2 样品来源 采自新疆巴州库尔勒舍饲黄牛血清样品200份，和静县巴音布鲁克高山牧场的牦牛血清440份，共计640份。

采血时均颈静脉采血(尾静脉采血)，置于低温保存箱送回实验室，普通管摆成斜面，室温下自然析出血清后，收集血清，-20 ℃保存待检。

1.3 主要试剂与仪器 严格按照试剂盒说明书保存和使用试剂、新孢子虫病IDEXX试剂盒，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；KHB ST-36型全自动酶标仪，购自上海三科仪器有限公司；SPX-70 L生化培养箱，购自北京宏信恒测科技有限公司。

1.4 检测方法 参考陈亮等[7]建立的新孢子虫病rELISA检测方法，严格按照试剂盒说明书操作，对440份牦牛血清和200份黄牛血清进行检测。从4 ℃冰箱中取出新孢子虫试剂盒，置于室温下恢复至室温，设置2个阳性孔、2个阴性孔和2个空白对照。最后放入酶标仪读数，在OD450/630 nm波长处测定光吸收值。

1.5 判定方法 以阳性血清孔OD450/630nm平均值和阴性血清孔OD450/630nm平均值为判断标准。若待检血清OD值大于阳性血清平均值则可判定为阳性，若待检血清OD值小于阴性血清平均值则可判定为阴性，介于两平均值之间则为疑似阳性，需重新检测，倘若重新检测仍为疑似阳性则判定为阳性。

2 试验结果

2.1 天然牧场牦牛新孢子虫感染情况 天然牧场牦牛新孢子虫血清抗体阳性率为4.09%(18/440)，0～2岁牦牛抗体阳性率为3.47%；3～6岁牦牛抗体阳性率为4.69%；大于6岁牦牛抗体阳性率为3.61%。各个年龄段新孢子虫抗体阳性率无显著差异(P>0.05)。

表1 天然牧场牦牛血清新孢子虫抗体阳性情况

2.2 舍饲黄牛新孢子虫感染情况 舍饲黄牛新孢子虫血清抗体阳性率为13.50%(27/200)，0～2岁黄牛抗体阳性率为14.29%；3～6岁黄牛抗体阳性率为12.32%；大于6岁黄牛抗体阳性率为13.50%。各个年龄段新孢子虫抗体阳性率无显著差异(P>0.05)。

表2 地方舍饲黄牛血清新孢子虫抗体阳性情况

3 讨论

巴音布鲁克草原海拔约2 500m，典型的高山草原，这里所养殖的草食家畜主要以放牧为主；库尔勒属暖温带大陆性干旱气候，海拔约950 m，是周围圈养了高产奶牛、土种黄牛等。由表1和表2可知，库尔勒舍饲黄牛新孢子虫血清抗体阳性率(13.50%)高于和静县巴音布鲁克镇牦牛(4.09%)，原因可能是天然牧场放牧牦牛密度低、较分散，不易于本病的传播；而舍饲黄牛密度高，接触犬(城里养犬越来越多)等宿主动物的几率大，犬排出的粪便污染饲草和水源，造成感染率较高。此次感染率明显高于闫双等[8]检测的292份牦牛血清新孢子虫抗体7.00%(19/292)的阳性率。世界上已有30多个国家报道了新孢子虫病的流行，但在不同国家和地区以及同一国家和地区的不同牛场新孢子虫抗体阳性率存在很大差异，同一牛场在不同时间的检测结果也不同[9]。因此，为了减少母畜流产所导致的损失，要加强该病的检测、监控，还需进行综合防治。

[1] 刘群，李博，齐长明，等． 奶牛新孢子虫病血清学检测初报[J]. 中国兽医杂志，2003，39(2)：8-9．

[2] 沈莉萍，刘佩红，徐锋，等．上海地区奶牛犬新孢子虫病血清学抗体检测[J]．中国兽医寄生虫病，2006，14(2)：14-16．

[3] 晁万鼎，马利青，李文昌，等．青海省格尔木市乳牛新孢子虫病的血清学调查[J]．中国兽医科技，2005，35(12)：1 012-1 014．

[4] 邹世颖，何倩妮，王小蕾，等．我国北方六省市牛新孢子虫病血清学调查[J]．中国兽医杂志，2012，47(2)：54-55．

[5] 李男礼，张守发，李积旭，等．吉林省白山地区牛新孢子虫病流行病学调查[J．畜牧与兽医，2015，47(5)：117-118．

[6] 皮泉，陈善忠，洪尼宁．贵州省牛传染性鼻气管炎、副结核病和新孢子虫病血清学调查[J]．动物医学进展，2014，35(10)：129-132．

[7] 陈亮，闫双，刘启生，等．新孢子虫和弓形虫ELISA及western blot检测方法的建立及应用[J]．中国预防兽医学报，2012，34(7)：558-562．

[8] 闫双，陈千林，郭庆勇，等．用重组抗原与商品化试剂盒对比检测牦牛的新孢子虫与弓形虫感染[J]．中国动物传染病学报，2013，21(1)：71-74．

[9] 于晋海，刘群，夏兆飞. 牛新孢子虫病和弓形虫病的流行病学调查[J]．中国兽医科学，2006，36(3)：247-251．

S852.7

B

0529-6005(2017)08-0040-02

2016-09-14

自治区科技成果转化专项资金项目(201454129)；巴州科学技术研究(星火)计划项目(201403)

吉尔格力(1967-)，男(蒙古族)，副教授，本科，从事兽医临床教学工作，E-mail：448418620@qq.com

巴音查汗，E-mail：bynch@hotmail.com