不同分离时间和保存方法对胃泌素-17测定的影响

刘志敏，周海青，李静

(衡阳市中心医院检验科，湖南 衡阳 421001)

不同分离时间和保存方法对胃泌素-17测定的影响

刘志敏，周海青，李静

(衡阳市中心医院检验科，湖南 衡阳 421001)

目的 探讨血液采集后在不同的分离时间和不同的保存方法下对检测胃泌素-17测定的影响。方法 收集30例健康体检人员的血液，分别于即刻、2h、4h、8h、24h分离血清，采用ELISA双抗体夹心法定量检测胃泌素-17的含量。即刻分离的血清和添加稳定剂的血清用Ep管分装后存放于室温、4℃、-20℃、-70℃环境下，分别连续7d进行胃泌素-17的检测，各组数据均与即刻分离血清组的结果进行比较，P＞0.05为胃泌素-17稳定的时间。结果 与即刻检测结果比较，2h、4h、8h、24h分离血清检测的结果有明显的下降趋势，下降百分率分别为：17.03%、32.53%、52.06%、64.52%。分离血清组在室温和4℃保存条件下有下降的趋势，-20℃、-70℃保存和添加稳定剂组4d内的结果未见明显的变化（P＞0.05）。结论 临床采集的标本应尽早分离血清，分离后的标本适宜低温保存，添加稳定剂、-20℃和-70℃环境下保存是维持胃泌素-17稳定的重要措施。

胃泌素-17；血液标本；分离时间；保存方法；稳定剂

胃泌素-17是由胃窦、胃体、十二指肠G细胞分泌的多肽类激素，具有促进胃酸分泌、胃窦收缩和胃肠道黏膜再生等生物学作用[1]。高胃泌素血症是胃癌的高危因素，参与癌细胞的恶性转化过程，促进胃癌细胞的增殖复制和浸润转移[2]。2015年1月上海国际研讨会 “中国早期胃癌筛查方案”’中把胃泌素-17作为重要的筛查指标之一，联合胃蛋白酶原Ⅰ(Pepsinogen Ⅰ，PGⅠ)、PGⅡ、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)-IgG检测对胃肠道疾病诊断具有很重要的意义[3-6]。目前，临床上胃泌素-17的检测方法比较成熟，检测中的质量能够得到保障。然而笔者发现，分析前标本分离时间对结果影响较大，但有关标本分离时间和保存方法对胃泌素-17结果影响的报道极少，为了探讨这一问题，我们实验室收集血液标本在不同的分离时间、分离后血清标本保存温度和时间对胃泌素-17检测结果的影响进行了综合分析并得出了标本最佳分离时间和保存条件，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象选择2016年8月在衡阳市中心医院参加体检的30例志愿者为检测对象，其中男、女各15例，年龄25～50岁，平均37岁，无腹痛、胃部不适病史，近期未服用质子泵抑制剂等胃肠道类药物。

1.2 仪器和试剂Tecan Infinite 200 Pro多功能酶标仪，胃泌素-17 ELISA检测试剂盒（芬兰BIOHIT OYJ公司，批号：20160212），二甲亚砜稳定剂（芬兰BIOHITOYJ公司，批号：23GB1602）。

1.3 研究方法受试对象禁食过夜后一次性真空管采集静脉血每人2管，每管不低于5ml，其中1管抽血后立刻用EP管平均分装为4支，分别在2h、4h、8h、24h再分离血清。 另 1管在30min内分离血清，取50μl血清采用ELISA双抗体夹心法定量检测胃泌素-17的含量作为对照，剩余血清分为2组，每组用EP管分装为18支，其中稳定剂组按照1：10添加二甲亚砜。所有分装的标本分别放置在室温、4℃、-20℃和-70℃环境中，严格按照试剂说明书分批进行检测。检测完成后，统计不同分离时间、分离后保存温度和时间下的检测结果。

1.4 统计分析数据采用SPSS 18.0统计学软件进行处理，计量资料采用均值±标准差（x±s）表示，即刻与2～24h和7d之间的浓度比较采用t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 标本不同分离时间胃泌素-17结果比较2h后开始分离的血液标本与即刻分离的血清标本胃泌素-17结果比较有明显的差异（P＜0.05）。见表1。

2.2 30份标本不同保存方法胃泌素-17结果比较见表2。

3 讨论

1977年，胃泌素检测技术获诺贝尔奖，芬兰学者Sipponen首创胃泌素-17检测方法。该方法具有无创、无痛、安全、经济等优点。胃泌素-17是胃黏膜“血清学活检”内容之一，在胃肠道肿瘤的发生发展中具有重要作用[7]。但临床上影响血清胃泌素-17的因素较多，除性别、年龄、病变部位、质子泵药物等因素外，实验室检测方法对结果影响不容忽视[8]。70%以上的错误结果来源于分析前[9，10]，血液样本的采集、运送、标本处置方法、保存条件以及集中批量检测都可能对胃泌素-17检测结果的准确性造成很大的影响[9，10]。

表1 标本不同分离时间胃泌素-17结果比较

表2 30例标本不同保存方法胃泌素-17结果比较

血清胃泌素-17可以用于评估胃粘膜的功能状态，在胃肠道癌症的发生和发展中起到重要的作用，目前已成为胃窦萎缩和胃癌重要的血清学标志物[11，12]。 有关报道证实[13]，胃泌素-17 在体外性质极不稳定、非常容易降解。ELISA定量检测试剂盒检测胃泌素-17的敏感性和特异性虽较好，但操作时间较长，日常工作中一般采用分批检验[14]。本研究发现，血液样本未分离条件下几乎不能进行样本保存，即使低温条件下胃泌素-17也会有不同程度的降解。本次研究观察到，即刻、2h、4h、8h、24h离心血液标本检测的结果有明显的下降趋势，降解幅度约为15%，8h后的血液标本胃泌素-17几乎检测不到。临床采集标本应立即送检，有条件的考虑冷链环境下运送标本，实验室收到标本后应该立即分离血清标本，确保胃泌素-17不被降解[15]。即刻分离的血清分2组，未加稳定剂的血清组胃泌素-17在室温、4℃保存连续7d检测的结果有下降的趋势，-70℃保存7d的检测结果未见明显的变化。添加稳定剂组胃泌素-17在室温、4℃、-20℃和-70℃至少可以保存4d，-20℃和-70℃保存的检测结果未见明显的变化。公司推荐使用二甲亚砜为最佳的稳定剂，在1ml血清中加入2滴，当5%的溶液使用，处理过的样品可在20～25℃环境中可以储存4d。

在本研究设计之初，曾考虑将稳定剂直接加入到全血标本中观察其是否能更便捷地保存样本，结果发现甚至检测不出数据，针对全血样品稳定剂效果并不理想。总之，在临床标本采集后应该尽快送检，不超过30min为宜，实验室收到血液样本后也需要尽早分离血清并-20℃低温保存。每周检测2次以上时，添加稳定剂的血清标本-4℃保存最方便可靠，保存时间较长时，最佳保存温度为-70℃，也可以置于-20℃。这样对结果的准确性有重要的意义。医务人员应重视血液标本运送时间、分离方法、保存条件等对结果造成干扰，避免这些因素造成结果异常而影响临床诊断。

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R735.2，R446.62

A

1674-1129(2017)05-0717-02

2016-10-21；

2017-07-03)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.029