循环免疫复合物在类风湿关节炎中的应用价值研究

刘坦 ，赵星鹏 ，张忠新 ，孟晓峰

(1、郑州大学附属洛阳中心医院检验科，河南 洛阳471000；2、新乡医学院医学检验学院，河南 新乡 453003)

循环免疫复合物在类风湿关节炎中的应用价值研究

刘坦1，赵星鹏1，张忠新2，孟晓峰1

(1、郑州大学附属洛阳中心医院检验科，河南 洛阳471000；2、新乡医学院医学检验学院，河南 新乡 453003)

目的 检测RF、CCP与CIC-C1q在类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）、其他关节炎与正常志愿者血清中的水平，比较循环免疫复合物（Circulating immune complex，CIC）与RF、CCP在RA中的检测能力，进而评估CIC在RA中的诊断价值。方法 临床上收集RA患者、其他关节炎患者和正常志愿者各60人的血清，通过胶乳免疫增强法、间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和C1q固相ELISA法分别检测血清中三个指标（RF、CCP、CIC-C1q）的水平，并进行统计学分析。结果 RF在RA 患者组、其他关节炎患者组、正常志愿者三组中的浓度分别为：117.17±11.08IU/ml、21.42±4.66IU/ml、7.65±0.64IU/m l，CCP水平在三组中分别为：545.64±93.74AU/ml、13.21±3.32AU/m l、5.08±0.66AU/m l，CIC-C1q 水平在三组中分别为：136.47±15.25ng/m l、89.67±13.85ng/m l、27.64±2.27ng/ml。 CIC-C1q 水平在三组间两两比较均存在统计学差异（P＜0.0001），运用 ROC 曲线对三个指标进行分析得出在三个指标进行联合检测时特异度和灵敏度都最好。结论 CIC在RA的诊断中有一定的价值，将其与CCP、RF联合检测能提高RA诊断的灵敏度与特异度，并在RA与其他关节炎的鉴别诊断中也存在一定价值。

RF；CCP；循环免疫复合物；类风湿性关节炎

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的自身免疫性致畸性疾病，以关节病变为主，其患者血清内高浓度的类风湿因子，能与免疫球蛋白IgG结合形成过剩的免疫复合物（Immune complex，IC），随着血液循环，沉积于关节滑膜、皮下组织等处引起滑膜炎，这是RA患者关节病变的直接原因。RA实验室检查的常规项目主要是类风湿因子（Rheumatoid factor，RF）、抗环瓜氨酸肽抗体 （Anti cyclic citrullinated peptide antibody，CCP）等，而从RA的病理过程中发现的循环免疫复合物（Circulating immune complex，CIC）在 RA 的发生发展中起着直接的作用，并且近年来关于CIC在自身免疫性疾病中作用的研究也越来越多[1-3]，普遍认为CIC的形成不仅参与了机体T细胞与B细胞的免疫应答，也通过补体的经典激活途径，启动了炎症的级联反应，在自身免疫性疾病的炎症进展中起到重要作用，因此，本研究拟通过收集临床上确诊为RA的患者血清，检测血清中RF、CCP、CIC的水平，并评价CIC在诊断RA中的价值。

1 材料与方法

1.1 标本的收集收集2014年6月至2015年6月在洛阳市中心医院就诊并确诊为RA的患者，其中男性22例，女性38例，年龄16～88岁，平均年龄53.09±16.55岁。该组所有病例均符合2010美国风湿病学学会ARA修订的RA诊断分类标准[4]。其他关节炎组为同期我院就诊患者，其中包括风湿性关节炎16例，骨性关节炎26例，痛风性关节炎13例，其他关节炎5例，共计60例。该组男性15例，女性45例，年龄26～75岁，平均年龄54.00±11.12岁。正常志愿者为在同期我院健康体检人群中随机抽取。共60例，其中男性27例，女性33例，年龄25～68岁，平均年龄42.62±10.87岁。

1.2 主要试剂类风湿因子检测试剂盒、抗环瓜氨酸多肽抗体测定试剂盒与人免疫循环复合物C1q（CIC-C1q）ELISA检测试剂盒分别购买自浙江伊利康生物技术有限公司，深圳亚辉龙生物科技有限公司和美国RD公司。

1.3 方法

1.3.1 RF水平的检测 RF试剂盒的运用的是胶乳凝集试验的原理。采集患者清晨空腹血，离心，分离血清之后上机检测得出结果 （所用仪器：日立7600全自动生化分析仪；RF试剂批号：20150309）。 结果判断： 参考范围为 0～20IU/ml，＞20IU/ml判为阳性。

1.3.2 CCP与CIC-C1q水平的检测 CCP试剂盒与CIC-C1q试剂盒均采用的是间接酶联免疫法（ELISA）。采集患者清晨空腹血，离心，按照ELISA的方法，同时设置阴性对照孔、阳性对照孔和系列标准品浓度。CCP标准品浓度（AU/ml）：0，25，50，200，80，3200；CIC-C1q 标准品浓度（ng/m l）：0，15，30，60，120，240。 最终显色后，通过郑州安图生物有限公司生产的PHOMO酶标仪分别检测其吸光度值，再根据标准曲线计算出CCP和CIC-C1q的血清浓度。结果判断：CCP参考范围为0～25AU/ml，由于CIC-C1q本试剂盒为科研用试剂盒，不能用于临床诊断，故本试剂盒没有参考范围。其最低检测浓度小于1.0ng/ml。

1.3.3 统计方法应用SPSS 19.0统计软件进行分析统计，对三组间RF、CCP和CIC-C1q水平运用非参数检验进行统计分析，运用GraphPad Prism软件作图在三组间进行两两比较，对三个指标联合检测的价值运用ROC曲线进行统计分析。

2 结果

2.1 三个检测指标在三组间的结果比较 RA患者/其他关节炎患者与正常志愿者三组血清中RF、CCP和CIC-C1q的水平见表1。其中RF与CCP水平在RA患者血清中明显升高，与正常对照组比较具有显著统计学差异（P＜0.0001，图 1-A.B），但在其他关节炎患者血清中水平与正常志愿者之间不存在统计学意义（P=0.4268，图1-A和P=0.8666，图1-B）。血清中CIC-C1q水平在RA患者与其他关节炎患者血清中均明显升高，三组间两两比较均具有显著差异（P＜0.0001，图 1-C）。

表1 RF、CCP、CIC-C1q在三组血清中的浓度

2.2 运用ROC曲线分析三个指标在RA诊断中的价值分析结果显示，RF、CCP、CIC-C1q三个指标在RA患者诊断中均有很大的价值（表2，图2），两两联合检测时，其特异性与灵敏度均得到很大提高（特异性在RF与CCP联合时最高，可达0.966，灵敏度在CCP与CIC-C1q联合时最高，达0.869），三者联合时，弥补了CCP与RF联合检测的低灵敏度，RF与CIC-C1q联合检测低特异度的缺点。特异性和灵敏度都较好，分别为0.908和0.855（表 2，图 3）。

3 讨论

图1 RF、CCP、CIC-C1q三个指标在三组间的比较

表2 RF/CCP/CIC-C1q三种指标在RA诊断中的特异性与灵敏度

图2 RF、CCP、CIC-C1q三种指标在RA诊断中的价值

图3 RF、CCP、CIC-C1q三种指标在RA诊断中的联合检测

正常情况下，机体防御系统作为清除异物抗原的一种方式，清除体内的免疫复合物，但某些情况下体内形成的免疫复合物不能够被清除，沉积于于机体的某一部位，如皮肤/血管壁及脏器，形成局部免疫复合物；也有部分游离于体液中，称为可溶性免疫复合物；随血液循环的称为循环免疫复合物（CIC）。其形成后通过与血液中的补体成分，细胞上的Fc受体，补体受体进一步结合反应，可参与机体的病理性损伤，最终形成免疫复合物病。CIC的检测方法目前也比较多，如PEG沉淀法、C1qELISA法、Western blot法等。本研究选用C1q固相ELISA法来检测血清中CIC-C1q水平，因C1q固相法在敏感性、特异性、重复性等方面都体现出较好的优点[5]。

自身免疫性疾病就是一种免疫复合物病，例如系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）等都是比较典型的自身免疫性疾病，近期关于CIC在SLE和SS的发病过程以及诊断中的研究有很多[6-10]。普遍认为，CIC在SLE与SS等自身免疫性疾病的诊断中有着重要作用，也反映了疾病的进展与预后。RA也是一种自身免疫性疾病，在RA患者体内，当自身变性的IgG与类风湿因子结合后，形成免疫复合物，反复沉积于小关节滑膜时即可引起类风湿关节炎。最近，随着大量CIC在RA患者诊断中的研究的出现[11-14]，大家更加重视CIC在疾病诊断，治疗以及疾病进展与预后中的作用。因此进一步研究循环免疫复合物在RA的诊断/发病机制中的作用，在疾病的预后估计、病情活动性观察以及疗效判断中有着重要意义。

目前RA的诊断主要依靠临床表现、X线以及常规的血清学检测。但是RA患者早期的就诊症状多为小关节滑膜炎所致的关节肿痛，因此其与其他关节炎疾病的鉴别诊断就很重要。RF是目前诊断RA最常用的血清学指标，RF敏感性较高，特异性较差，在RA以外的其他自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）等患者，抑或其他非自身免疫性疾病如肿瘤等疾病血清中也存在一定的阳性率。因此单独用RF诊断存在一定的漏诊率，对于疾病早期诊断有一定困难。但RF水平在RA的严重程度以及预后中有很大价值。抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）是环状聚丝蛋白的多肽片段，抗CCP抗体在RA的早期诊断和进展标志有较好的应用前景[15-18]。抗CCP抗体主要是IgG类抗体，对RA的特异性约为96%，但其灵敏度较低，在RA的早期阶段即可出现阳性，具有较高的阳性预报道，但仍然存在漏诊的可能[19，20]。因此，抗 CCP抗体和RF水平的联合检测对RA的诊断及预后有很大的意义[21]。RA作为一种免疫复合物病，CIC在其发生发展中必然起到一定作用。近年来关于CIC与自身免疫性疾病的研究越来越多，越来越清晰。普遍认为CIC通过经典补体激活途径参与炎症的发生发展，其在RA的发展与预后中也具有很大价值。而本研究也进一步说明，CIC在RA的诊断中也有较好的诊断价值，较高的特异性与灵敏度，特别是CIC与RF、CCP的联合检测，提高了检测的灵敏度与特异度，这也将给RA的早期诊断、疾病监测、疾病预后以及RA的鉴别诊断提供更可靠的实验室支持。

本研究通过数据分析结果显示，CIC-C1q与RF都是RA检测的非特异性的指标，CIC的特异性更差一些，但其水平高低在三组之间均存在显著差异，并且将CIC-C1q、RF、CCP三个指标联合应用，在RA的诊断上具有良好的诊断价值，三者联合使得RA的检出率大大提高，相较于CCP与RF的联合检测增加了RA检出的灵敏度，且仍然保持较好的检测特异性。因此，RF、CCP、CIC-C1q三者联合检测不仅对RA的早期诊断有很大帮助，而且对RA与其他关节炎类疾病的区分有很好的提示作用。

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Study on the value of circulating immune com plexes in rheumatoid arthritis

LIU Tan1，ZHAO Xingpeng1，ZHANG Zhongxin2，MENG Xiaofeng1.
1.Department of Clinical Laboratory，Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University，Luoyang Henan 471000，China；2.College of Medical Laboratory，Xinxiang Medical University，Xinxiang Henan 453003，China.

Objective To detect the level of serum RF，CCP and CIC-C1q in rheumatoid arthritis(RA)patients，other arthritis patients and normal volunteers，the detection ability and diagnostic value of CIC in RA was compared and evaluated.M ethods The clinical data of 60 patients with RA，other arthritis patients and normal volunteers were collected，respectively.The level of three indexes(RF，CCP and CIC-C1q)in serum weremeasured by latex immunoassay，indirect enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)and C1q solid phase ELISA.All data was analyzed by statistical tools.Results The concentration of RF in three groups(RA，other arthritis patients and normal volunteers)were 117.17±11.08IU/ml，21.42±4.66IU/ml，7.65±0.64IU/ml，respectively.The level of CCPwere 545.64±93.74AU/ml，13.21±3.32AU/ml，5.08±0.66AU/ml，respectively.And the level of CIC-C1q were 136.47±15.25ng/ml，89.67±13.85ng/ml，27.64±2.27ng/ml，respectively.There was significantly difference in the level of CIC-C1q among three groups（P＜0.0001).The ROC curve showed that the specificity and sensitivity of these three indexeswere best.Conclusion CIC has a certain value in the diagnosis of RA，and combined with CCPand RF can improve the sensitivity and specificity of RA diagnosis，with a great value in the differential diagnosis between RA and other arthritis.

RF；CCP；Circulating immune complex；Rheumatoid arthritis

R593.22，R446.62

A

1674-1129(2017)05-0680-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.014

刘坦，女，1983年生，医学硕士，主管技师，从事自身免疫研究工作。

2017-04-07；

2017-08-05)