PCR技术应用在乙型肝炎检验中的价值探析

卢天龙

【摘要】 目的 分析在乙型肝炎检验中应用聚合酶链反应（PCR）技术的效果。方法 200例乙型肝炎患者， 根据随机抽签法分为观察和对照组， 各100例。对照组通过化学发光法进行检验， 观察组选择PCR技术进行检验， 比较两种方法的诊断准确率。结果 观察组诊断准确率为96%， 对照组诊断准确率为81%， 两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 PCR技术对于乙型肝炎具有较高的诊断准确率， 能够准确检出乙型肝炎病毒， 值得广泛应用。

【关键词】 乙型肝炎；聚合酶链反应技术；检验

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.28.012

【Abstract】 Objective To analyze the effect of polymerase chain reaction （PCR） technology applied in hepatitis B test. Methods A total of 200 hepatitis B test patients were divided by random lottery method into observation group and control group， with 100 cases in each group. The control group was tested by chemiluminescence method， and the observation group was tested by PCR technology. The diagnostic accuracy rates of the two methods were compared. Results The observation group had diagnostic accuracy rate as 96%， which was 81% in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion PCR technology provides higher diagnostic accuracy for hepatitis B， and can accurately detect hepatitis B virus. So it is worthy of wide application.

【Key words】 Hepatitis B； Polymerase chain reaction technology； Test

乙型肝炎是一类传染病， 具有非常强的传染性， 在全世界范围内都属于影响健康的严重传染病， 一些患者还因为慢性感染进展为肝硬化和肝癌[1， 2]。准确的诊断、及时的干预是减少传染的重要方法， 本研究具体分析在乙型肝炎检验中选择PCR技术的诊断效果， 总结如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2015年1月～2016年12月本院200例乙型肝炎患者进行研究， 根据随机抽签法分为观察和对照组， 各100例。观察组患者男62例， 女38例， 平均年龄（36.2±6.3）岁；

对照组患者男64例， 女36例， 平均年龄（37.5±6.1）岁。两组患者一般資料比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在清晨空腹状态下抽取两组患者3 ml静脉血液作为检验标本， 通过进行离心处理， 获取血清， 置于冰箱中保存以备使用， 冰箱温度设置为零下20℃。观察组通过PCR技术检验， 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）采购于中山大学达安基因股份有限公司， 按照试剂说明书完成全部操作。荧光定量PCR扩增和分析结果选择ABI 7500 PCR仪完成（美国应用生物公司）。对照组通过化学发光法检验， 选择科美试剂和科美化学发光仪完成检验， 按照试剂说明书完成全部操作。

1. 3 观察指标 以临床病理诊断结果为标准， 比较两组对于乙型肝炎的诊断准确率。

1. 4 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

观察组患者诊断为乙型肝炎的患者96例， 诊断准确率为96%；对照组患者诊断为乙型肝炎的患者81例， 诊断准确率为81%；两组诊断准确率比较差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

以往临床诊断乙型肝炎使用化学发光法的更多， 该方法具体是在电极表面经电化学出现的一种特异性化学发光反应， 通过化学发光剂对抗体进行标记， 经抗原-抗体反应以及磁珠分离技术， 按照发光剂在电极上发出的光强度定量或定性检测待测抗原或抗体[3]。但是大量实践发现， 该方法进行乙型肝炎检测有假阴性出现的可能， 确诊率受到影响[4]。PCR技术也叫体外基因扩增技术， 属于分子生物学领域的产物， 当前在分子生物学、医学等多个学科都有广泛应用[5]。其能够直接检测DNA复制水平， 从而可以使假阴性出现的可能得到最大程度避免[6]。PCR技术的作用原理基本相当于天然复制DNA的过程， 构成部分包括变性-复性（退火）-延伸， 模版DNA通过加热温度达到大约93℃， 保持一段时间， 之后使经PCR扩增形成的双链或模板DNA双链DNA完成解离形为单链， 便于结合其引物。等到温度下降到55℃， 模板DNA单链的互补序列会和引物完成配对结合；在TapDNA聚合酶的作用下， DNA模板-引物复合物将dNTP当成反应原料， 将靶序列当成模版， 依据碱基配对以及半保留复制原理， 合成新的一条互补于模板DNA链的半保留复制链。将变性-退火-延伸三个过程进行多次重复、循环， 能够获取大量半保留复制链。endprint

本研究通过分别利用化学发光法检验以及PCR技术检验， 结果显示， 观察组患者诊断为乙型肝炎的患者96例， 诊断准确率为96%；对照组患者诊断为乙型肝炎的患者81例， 诊断准确率为81%；两组诊断准确率比较差异有统计学意义（P<0.05）。

乙型肝炎患者在康复期间， 当乙型肝炎病毒转录翻译能力逐渐降低， 相应血清中乙肝表面抗原 （HBsAg）水平也会下降， 出现假阴性情况， 从而容易出现漏诊或者误诊[7]。但是PCR通过荧光标记乙型肝炎病毒， 对乙型肝炎病毒DNA的转录、翻译进行检测， 能够完全避免由于DNA复制水平而导致血清中抗体出现假阴性， 从而有效降低误诊以及漏诊情况， 保证检验准确率[8-10]。

综上所述， 对乙型肝炎患者选择PCR技术进行检验， 能够获取较高诊断准确率， 可用于推广。

参考文献

[1] 钟政荣， 徐云侠， 丁淑琴， 等. 乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒-DNA与常用血清标志物的相关性分析. 蚌埠医学院学报， 2015， 40（10）：1387-1389.

[2] 王红建， 封伟， 张健， 等. 巢式聚合酶链反应检测血清HBV-DNA对乙肝治疗的临床意义. 西部医学， 2017， 29（1）：117-119， 122.

[3] 林树波， 肖泽斌， 温国强， 等. 汕头献血人群HBV DNA定量检测结果与乙肝两对半模式分析. 临床输血与检验， 2016， 18（1）：

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[7] 胡大山， 李红林. 乙肝五项与乙肝 HBV-DNA 熒光定量检测及肝脏纤维化指标的相关性分析. 医学理论与实践， 2016， 29（24）：3319-3320， 3323.

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[9] 朱明岩， 叶英. 不同荧光定量PCR技术在乙型肝炎病毒检测中的应用评价. 安徽医药， 2016， 20（9）：1723-1726.

[10] 马倩茹， 温江涛， 耿春松， 等. PCR技术在医学检验乙型肝炎中的应用. 现代诊断与治疗， 2016， 27（19）：3736-3737.

[收稿日期：2017-06-21]endprint