三黄胶囊对急性痛风性关节炎的抗炎作用

李梅珍，唐秋月，梁国强

（1.苏州市中医医院药剂科，江苏 苏州 215003；2.苏州市吴门医派研究院，江苏 苏州 215003）

·实验研究·

三黄胶囊对急性痛风性关节炎的抗炎作用

李梅珍1，唐秋月1，梁国强2*

（1.苏州市中医医院药剂科，江苏 苏州 215003；2.苏州市吴门医派研究院，江苏 苏州 215003）

目的 通过观察三黄胶囊对尿酸钠（MSU）致急性痛风性关节炎大鼠血清及膝关节液中白介素-β（IL-β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）或环氧酶2( COX-2)水平的影响，探讨三黄胶囊治疗急性痛风性关节炎的机制。方法 将大鼠分为正常组，模型组，三黄胶囊组（6.45 g 生药/kg），秋水仙碱组(0.325 mg/kg)。正常组和模型组灌胃生理盐水；各给药组按剂量灌胃给药，连续14 d。末次给药1 h后，正常组右侧踝关节腔注射100 mL无菌1%磷酸盐缓冲液（PBS），其余各组注射100 mL MSU溶液，于造模后24 h用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和关节滑液中IL-β、TNF-α或COX-2水平；光镜下观察其对大鼠踝关节滑膜组织病理变化的影响。结果 与正常组比较，模型组MSU注射进大鼠踝关节腔24 h后，在大鼠血清中IL-β、TNF-α和关节滑液中IL-β、TNF-α及COX-2的含量均明显增加（P＜0.05）；与模型组比较，三黄胶囊组及秋水仙碱组均显著降低MSU致大鼠痛风性关节炎血清IL-β、TNF-α及关节滑液中IL-β、TNF-α和COX-2水平（P＜0.05）；造模组滑膜组织的炎性细胞浸润、纤维组织增生、滑膜细胞增生、水肿、充血的病理改变较中药组和西药组严重。结论 MSU可以增加血清IL-β、TNF-α及关节滑液中IL-β、TNF-α和COX-2的水平；三黄胶囊可能通过降低IL-β、TNF-α和COX-2的水平产生抗MSU痛风性关节炎的作用。

三黄胶囊；尿酸钠；急性痛风性关节炎

Abstract: Objective To observe the effects of Sanhuang capsule oninter IL-β, TNF-α and COX-2 levels in the serum and the ankle joint fluid, and explore the therapeutic mechanism of Sanhuang capsule on gouty arthritis induced by MSU crystal in rats.Methods The rats were divided into normal group, model group, Sanhuang capsule group(6.45g/kg), colchicine group (0.325 mg/kg).The normal group and model group were ig (intragastric administration)administered with normal saline, various treatment groups were ig administered with corresponding doses for continuous 14 days.One hour after the last administering, 100 l sterile 1% PBS was injected in on the right side ankle joint cavity in normal group, and 100l MSU was injected in other groups.Twenty-four hour after modeling,ELISA method were used to detect IL-, TNF-α or COX-2 levels in the serum and ankle joint fluid.and the pathologic changes of synovial tissues were observed by microscope.Results Compared with the normal group, the levels of IL-and TNF-α in serum and IL-β,TNF-α,COX-2 in ankle joint fluid were significantly increased after injection of MSU into the ankle joint of rats (P＜0.05) after 24h.Compared with the model group, the levels of IL-β and TNF-α in the rat and IL-β, TNF-α, COX-2 in ankle joint fluid induced by MSU were significantly decreased in Sanhuang Capsule and colchicine group (P＜0.05).the total index of synovial tissue of model of inflammatory cell infiltration, fiber optic proliferation, synovail cell proliferation, edema, congestion were more severe than those in the Chinese herbs group and western Medicine group.Conclusion MSU can increase the levels of IL-β,TNF-α in serum and IL-β, TNF-α and COX-2 in ankle joint fluid.Sanhuang capsule may have the effect on MSU induced gouty arthritis by decreasing IL-β,TNF-α and COX-2 level.

Keywords: Sanhuang capsule; monosodium urate; acute gouty arthritis

研究[1-3]显示，高尿酸血症是发生痛风性关节炎（GA）的基础，也可能存在其他诱发因素。急性痛风性关节炎属中医“痹证”“历节病”“白虎历节”范畴。《格致余论·痛风论》载：“热血得寒，污浊凝涩，所以作痛”。中医认为，本病的发生多由先天正气不足或劳倦过度，风、寒、湿、热之邪侵袭人体，痹阻关节经络，以致经络阻滞，气血运行不畅而致。初起属实证，多为湿热痹阻、气滞血瘀[4-7]。三黄胶囊为苏州市中医医院医院制剂，由大黄、黄芩、黄柏3味中药组成，具有清热解毒、除湿、活血消肿之功效，本研究用于治疗急性痛风性关节炎，疗效确切稳定[8-10]。本研究笔者采用大鼠右侧踝关节注射尿酸钠制作急性痛风性关节炎模型，探讨三黄胶囊防治急性痛风性关节炎的抗炎机制。

1 材料

1.1 实验动物 清洁级SD雄性大鼠180～220 g，购自昭衍（苏州）新药研究中心有限公司，许可证号：scxk（苏）2013-0003。饲养条件一致，室温（24±2）℃，标准饲料（由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司中心提供），自由摄食、饮水。

1.2 药品与试剂 三黄胶囊（苏州市中医医院医院制剂，药剂科提供）；秋水仙碱（广东彼迪药业有限公司）；尿酸钠晶体（美国sigma-aidrich公司生产，苏州大学惠赠）；苏木素-伊红（HE）染色试剂盒（武汉百浩天生物科技有限公司）； IL-β、TNF-α、COX-2酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定试剂盒（上海邦奕生物科技有限公司）；戊巴比妥钠（Sigma 公司生产）；乙醚、甲醛等其他试剂均为市售分析醇。

1.3 主要仪器 蔡司倒置荧光显微镜（德国Zeiss，型号：Discovery.V20）；紫外-可见酶标仪（美国MD，型号：SPECTRA MAX 190）；AX-26DR万分之一分析天平：瑞士梅特勒-托利多公司；TG16W离心机：微量高速离心机（国产）等。

2 方法

2.1 药物配制 成人（60 kg）每日三黄胶囊、秋水仙碱常用量分别为27 g生药、3 mg，由此换算[11]得出2种干预药物的用量分别为6.45 g生药/（kg·d）、0.325 mg/(kg·d)。依据上述用药量计算出每只大鼠的用药量，分别配置成相当于0.645 g生药/mL的三黄胶囊药液和0.325 mg/mL的秋水仙碱片混悬液，4 ℃保存，用前摇匀，以10 mL/kg体积灌胃给药。

2.2 分组与给药 取32只SD雄性大鼠，随机法分为4组（n=8）：空白对照组（同体积生理盐水），模型对照组（同体积生理盐水），西药对照组（秋水仙碱）0.325 mg/(kg·d)；中药实验组（三黄胶囊药液）6.45 g生药/(kg·d)。连续灌胃14 d，灌胃至13 d后造模。取500 mg MSU加入25 mL 0.9%氯化钠注射液，搅拌制成浓度为20 mg/mL的MSU溶液。选受试大鼠右侧踝关节背侧，常规碘伏消毒后，用6号注射针与胫骨成45°插入踝关节，将100 μL MSU溶液注入到右侧踝关节腔，以关节囊对侧鼓起为注入标准，3 h后观察受试大鼠关节肿胀明显，即证明复制大鼠急性痛风性关节炎模型成功[12-14]。第14天末次灌胃后1 h，将大鼠乙醚麻醉，股动脉取血后颈椎脱臼处死。取血后先于室温下自然放置20 min，3 000 r/min，离心10 min，分离血清，分装置于EP管内后置-80 ℃冰箱中冰冻保存。大鼠处死后立即收集右侧踝关节内关节滑液置于EP管内-80 ℃冰箱中冰冻保存，同时取出右侧踝关节软组织，一部分置于EP管内，-80℃冰箱中冰冻保存，另一部分置于10%福尔马林中保存。

2.3 检测指标及方法 大体观察及苏木素-伊红（HE）染色观察软组织病理学变化；ELISA法检测血清中IL-β、TNF-α 水平以及目标关节关节滑液中 IL-β、TNF-α和COX-2水平，操作均按试剂盒说明书严格进行。

2.4 统计学处理 实验数据使用SPSS 15.0 软件进行统计处理。实验结果为正态分布，满足方差齐性，以均数±标准差（x± s ）表示，t 检验采用配对t 检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 大体观察 造模3 h后，3组建模后与建模前比较，膝关节红肿、皮肤温度升高，尤以模型对照组明显，西药对照组和中药实验组情况相近，空白对照组则无此反映。末次给药后1 h（造模后24 h左右）踝关节关节滑液观察：空白对照组无色、质清、量少，其他3组均呈浅黄色、质浊、量较多，尤以模型对照组明显。3.2 目标关节软组织病理学变化 通过HE染色观察目标踝关节软组织病理学变化，可见空白对照组滑膜组织无炎性细胞浸润、纤维组织增生、滑膜细胞增生和毛细血管充血、水肿；其他3组炎性细胞浸润、纤维组织增生、滑膜细胞增生和毛细血管充血、水肿明显，尤以模型对照组最为明显；说明以MSU诱导的急性痛风性关节炎建模成功，有明显的病理反映；西药对照组和中药实验组2组与模型对照组比较，炎性细胞浸润、纤维组织增生、滑膜细胞增生和毛细血管充血、水肿程度均有所降低，而西药对照组整体上优于中药实验组。

3.3 血清中IL-β和TNF-α水平 见表1。

表1 各组大鼠血清中IL-β、TNF-α水平变化比较（x± s n=8） pg/mL

3.4 关节滑液中IL-β、TNF-α和COX-2水平 见表2。

表2 各组大鼠踝关节关节滑液中IL-β、TNF-α和COX-2水平比较（x ± s ）

4 讨论

随着人民生活水平的提高，嘌呤类食物摄入增多，近年来痛风的发病率逐年升高，急性复发性关节炎、痛风性慢性关节炎等成为严重危害人们生活的疾病[15-16]。目前，西药治疗痛风性关节炎急性发作虽然有效，但严重的不良反应限制了多数患者长期使用[17]。急性痛风性关节炎的致炎因子是MSU结晶体，这种结晶体能刺激局部组织释放出大量IL-β、TNF-α等多种炎症介质与致炎因子，引起关节周围广泛的炎症。IL-β在中性粒细胞趋化、激活过程中起重要作用，是调节炎症的始动因素和炎症反应的重要介质，主要存在于关节内；TNF-α仅由巨噬细胞、单核细胞经致炎因子刺激后释放，可引起细胞死亡和组织损伤；COX-2是炎症细胞合成炎症介质前列腺素的关键酶，与其他炎症介质一起参与了复杂的炎症反应过程，COX-2作为诱导酶还能被IL-β、TNF-α等诱导因素大量诱导和表达，引起炎症反应的扩大和加重。因此，急性痛风性关节炎的发病与细胞因子IL-β、TNF-α的升高及中性粒细胞的聚集等因素密切相关。

本实验结果观察到MSU注射的大鼠模型的血清及关节腔液中细胞炎性因子IL-β、TNF-α与正常对照组大

鼠比较显著性升高（P＜0.05），证明了模型复制的成功。相对于模型组，三黄胶囊显著降低了血清和关节腔液中IL-β、TNF-α的水平及关节液中COX-2的水平，结合病理学观察结果，表明与临床抗炎效果一致，本研究还显示，阳性对照药秋水仙碱作为急性痛风的特效药，也证明了其疗效机制，整体疗效优于三黄胶囊，其作用机制是抑制粒细胞浸润和乳酸的形成，并不影响尿酸的生成与排泄。本研究提示，三黄胶囊是否可调节尿酸的生成与排泄而发挥、拓展中医药防治痛风性关节炎的作用，比如防治高尿酸血症的转归方向研究等。由此可见这项研究不但验证了三黄胶囊的实验疗效，而且有助于更好的提高和推广三黄胶囊治疗急性痛风性关节炎的应用和作用机理的深入研究。

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Experimental research of Sanhuang capsule on acute gouty arthritis

LI Meizhen1, TANG Qiuyue1, LIANG Guoqiang2*
（1.Department of Osteopathia, Suzhou hospital of Traditional Chinese Medicine, Suzhou 215003, China;2Academy of Wumen Chinese Medicine, Suzhou 215003, China)

R285.5

A

2095-6258(2017)05-0696-04

2017-01-13)

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.003基金项目：江苏省青年医学人才培养计划项目（QNRC2016252）；江苏省苏州市科技局计划项目（SYS201420）。

李梅珍(1971-)，女，副主任中药师，主要从事中药学相关饮片调剂、煎煮及膏方制备等研究。

*通信作者：梁国强，男，主管中药师，电话-13584809803，电子信箱- 616250366@qq.com