ER、HNF-1β及COX-2在子宫内膜异位相关性卵巢癌中的表达及临床意义*

陈 颖,龙启芳

(苏州大学附属第二医院妇产科 215004)

ER、HNF-1β及COX-2在子宫内膜异位相关性卵巢癌中的表达及临床意义*

陈 颖,龙启芳

(苏州大学附属第二医院妇产科 215004)

目的探究雌激素受体(ER)、肝细胞核因子-1β(HNF-1β)以及环氧化酶-2(COX-2)在不同类型子宫内膜异位相关性卵巢癌(EAOC)中的表达差异。方法选取2011年7月至2016年4月苏州大学附属第二医院收治的EAOC患者44例，其中子宫内膜样癌17例，透明细胞癌21例，卵巢浆液性癌6例。采用免疫组织化学法检测ER、HNF-1β及COX-2在不同类型EAOC中的表达差异，并采用Spearman秩相关分析探讨三者表达水平的相关性。结果ER在子宫内膜样癌患者中的阳性率为100.0%，显著高于透明细胞癌患者的9.5%和卵巢浆液性癌患者的0%(χ2=4.305，P<0.01)，而HNF-1β在透明细胞癌和卵巢浆液性癌患者中的阳性率分别为85.7%和100.0%，显著高于子宫内膜样癌患者的11.8%(χ2=3.585，P<0.01)，COX-2在子宫内膜样癌、透明细胞癌和卵巢浆液性癌患者中的阳性率分别76.5%、81.0%、83.3%，差异无统计学意义(χ2=0.744，P=0.104)。ER和HNF-1β的表达水平呈负相关(r=-0.428，P<0.01)，与COX-2的表达水平呈正相关(r=0.204，P=0.013)。结论ER主要在子宫内膜样癌中表达，HNF-1β主要在透明细胞癌和卵巢浆液性癌中表达，ER的表达水平与HNF-1β及COX-2的表达水平具有一定的相关性。

卵巢肿瘤；雌激素受体；肝细胞核因子-1β；环氧化酶-2

子宫内膜异位症(endometriosis，EM)是以月经异常、痛经、不孕等为主要症状的妇科疾病，在临床上较为常见。有研究显示EM在妇女中的发病率为5%～20%[1]。虽然EM为良性疾病，但也具有一些与肿瘤类似的生物学特性，如侵袭性和对正常组织的损伤性，且已有研究表明，EM与卵巢癌发生、发展具有密切的关系[2-3]。肿瘤的发生、发展中伴随着多种生物学标志的变化，近年的研究表明EM作为卵巢癌发生的诱因，通过影响并改变肿瘤微环境如雌激素受体(ER)的上调、P53的突变、肝细胞核因子-1β(HNF-1β)的激活以及环氧化酶-2(COX-2)的过表达等来促进卵巢癌的发展。但是目前国内外鲜有研究报道这些因子在不同类型EAOC的表达，本研究旨在分析ER、HNF-1β及COX-2在不同类型子宫内膜异位相关性卵巢癌(EAOC)中的表达差异，以及三者的表达水平是否存在相关性，为EAOC的发病机制提供新的见解。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2011年7月至2016年4月苏州大学附属第二医院妇产科收治的EAOC患者共44例，其中子宫内膜样癌17例，患者年龄(46.3±6.7)岁；卵巢透明细胞癌21例，患者年龄(44.7±7.2)岁；卵巢浆液性癌6例，患者年龄(45.2±6.1)岁，3组患者年龄、子宫内膜病理分期等一般临床资料的差异无统计学意义(P>0.05)。本研究排除了有严重并发症如心脏病、糖尿病、精神病等患者以及对本研究所用药物或试剂过敏的患者，且本研究通过了苏州大学附属第二医院伦理委员会的批准，所有入选患者均签署了知情同意书。

1.2免疫组织化学检测 将手术切除的新鲜肿瘤组织以10%甲醛固定，石蜡包埋后进行连续切片，再进行脱蜡，微波炉热抗原修复，经漂洗、封闭、孵育后分别滴加1∶100比例稀释的ER、HNF-1β、COX-2单克隆抗体(购自上海翊圣生物科技有限公司)，4 ℃孵育过夜;加二抗(购自上海翊圣生物科技有限公司)37 ℃孵育30 min;滴加辣根酶标记工作液，37 ℃孵育30 min后DAB显色，苏木素复染、脱水、封片。免疫组织化学染色采用S-P法，具体操作步骤严格按试剂盒说明书进行。

1.3结果判定 在显微镜下观察免疫组织化学染色切片并采集图像，采用Image-Pro Plus 6.0对ER、HNF-1β及COX-2的免疫组织化学切片进行图像分析。在高倍镜(×400)下选择5个视野，记录阳性染色细胞百分比，根据染色范围和染色强度记分并判断免疫组织化学结果。染色范围：<5%计0分，5%～20%计1分，20%～50%计2分，>50%计3分；染色强度：无色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；累计0～1分为阴性，2～3分为弱阳性，4～5分为阳性，6分为强阳性。

2 结 果

2.1ER、HNF-1β及COX-2在不同类型EAOC中的表达差异 子宫内膜样癌患者中ER阳性17例，阳性率为100.0%，透明细胞癌患者中ER阳性3例，阳性率为9.5%，卵巢浆液性癌患者中无ER阳性，差异具有统计学意义(χ2=4.305，P<0.01)；子宫内膜样癌患者中HNF-1β阳性2例，阳性率为11.8%，透明细胞癌患者中HNF-1β阳性18例，阳性率为85.7%，卵巢浆液性癌患者中HNF-1β阳性6例，阳性率为100.0%，差异具有统计学意义(χ2=3.585，P<0.01)；COX-2在子宫内膜样癌患者、透明细胞癌患者和卵巢浆液性癌患者中的阳性率分别76.5%(13例)、81.0%(17例)、83.3%(5例)，差异无统计学意义(χ2=0.744，P=0.104)，具体见图1～3及表1。

A：子宫内膜样癌；B：透明细胞癌；C：卵巢浆液性癌。

图1 ER在不同类型EAOC中的表达(×400)

A：子宫内膜样癌；B：透明细胞癌；C：卵巢浆液性癌

图2 HNF-1β在不同类型EAOC中的表达(×400)

A:子宫内膜样癌；B:透明细胞癌;C:卵巢浆液性癌

图3 COX-2在不同类型EAOC中的表达(×400)

表1 ER、HNF-1β及COX-2在不同类型EAOC中阳性率比较

2.2ER、HNF-1β及COX-2表达水平的相关性分析 Spearman秩相关分析表明，ER和HNF-1β的表达水平呈负相关(r=-0.428，P<0.01)，ER与COX-2的表达水平呈正相关(r=0.204，P=0.013)。HNF-1β与COX-2的表达水平无明显相关性。

3 讨 论

EM最常异位于卵巢,为育龄期妇女的常见良性疾病,但具有类似恶性肿瘤的生物学特性，并且可以发生恶变，其恶变的种类包括子宫内膜样癌、透明细胞癌、卵巢浆液性癌、鳞状腺癌、卵巢腺肉瘤等,其中以子宫内膜样癌和透明细胞癌最为常见。有研究表明EM通过影响并改变肿瘤微环境中的一系列生物标志物如PTCH2、真核翻译延长因子1A2(eEF1A2)、ER、HNF-1β、p53、PTEN、COX-2等来诱导EAOC的发生[4-5]，并且近来Worley等[6]的研究显示大量生物标志物不仅与EAOC相关，并且在EAOC发生、发展的过程中不断变化，对EAOC发生发展起到重要的影响，但是目前国内外很少有研究分析不同类型EAOC中这些生物标志物的表达差异，本研究旨在探究ER、HNF-1β、COX-2 3种经典的生物标志物在子宫内膜样癌、透明细胞癌及卵巢浆液性癌中的表达差异及表达水平的相关性，为EAOC的致癌机制提供新的依据。

ER激素受体是固醇类激素受体蛋白超家族成员之一,于1977年首次在子宫内膜细胞中被发现，其分布广泛，可与激素发生特异性结合而形成激素-受体复合物，使激素发挥其生物学效应。最近研究表明ER在启动恶性卵巢癌的发生以及促进其发展的过程中具有重要的作用[7]。本研究结果显示ER在子宫内膜样癌中呈高表达，阳性率为100%，且表达水平较高，在透明细胞癌中表达较少，仅占9.5%，在卵巢浆液性癌中不表达，均为阴性，差异具有统计学意义(χ2=4.305，P<0.01)。Lai等[8]的研究也表明ER主要表达于子宫内膜样癌患者，与本研究具有一定的相似性。这一研究结果表明雌激素对子宫内膜样癌具有非常重要的影响，而对透明细胞癌患者及卵巢浆液性癌患者的影响较小，同时这一研究结果也暗示，临床上常用的雌激素受体调节剂他莫昔芬(TAM)可能对子宫内膜样癌患者疗效更好，而对于ER阴性的透明细胞癌患者及卵巢浆液性癌患者治疗效果会相对较差。本研究对HNF-1β免疫染色的结果显示HNF-1β在透明细胞癌患者和卵巢浆液性癌患者中的表达较高，阳性率分别为为85.7%和100.0%，而在子宫内膜样癌中HNF-1β阳性患者仅为11.7%，差异具有统计学意义(χ2=3.585，P<0.01)。早前DeLair等[9]对155例透明细胞癌患者的肿瘤组织进行了形态学及免疫组织化学的研究表明，HNF-1β为透明细胞癌患者特异的肿瘤标志物，而Tsuchiya等[10]更是将HNF-1β作为透明细胞癌临床诊断的特有肿瘤标志物，而本研究发现HNF-1β不仅在透明细胞癌中呈高表达，在卵巢浆液性癌中的表达也较高，这为不同类型子宫内膜异位相关性乳腺癌的诊断提供了新的生物学标志物。COX-2在肿瘤发生早期起着重要作用，有研究表明COX-2在正常卵巢表面上皮细胞上几乎不表达,但是在子宫内膜异位症及卵巢囊肿癌变前的上皮细胞中呈高表达[11]。本研究结果显示，COX-2在3种不同类型的EAOC的表达不存在显著性差异，均具有较高的表达，阳性率在80%左右。 Sivula等[12]研究发现浸润性乳腺癌组织中COX-2的阳性表达率为66%，且COX-2阳性患者较COX-2阴性患者预后更差，这提示COX-2可能是治疗乳腺癌的有效靶点，维持COX-2的低表达或合理应用特异性COX-2抑制剂将成为乳腺疾病预防的新途径。此外本研究采用Spearman秩相关性分析探讨了三者表达水平的相关性，结果表明，ER和HNF-1β的表达水平呈负相关(r=-0.428，P<0.01)，ER与COX-2的表达水平呈正相关(r=0.204，P=0.013)。HNF-1β与COX-2的表达水平无相关性(P>0.05)。

综上所述，本研究结果表明ER主要表达于子宫内膜样癌患者中，HNF-1β主要表达于透明细胞癌和卵巢浆液性癌患者中，而COX-2在子宫内膜样癌,透明细胞癌及卵巢浆液性癌中均呈高表达，且ER和HNF-1β的表达水平呈负相关与COX-2的表达水平呈正相关。本研究结果为不同类型EAOC 的临床诊断以及治疗提供了新的合理依据，EAOC发病机制错综复杂，近年来就有研究表明miRNA也是影响子宫内膜异位症及EAOC的重要因子[13]，因此笔者认为应全面分析EAOC相关的新的生物标志物以及这些生物标志物在致病过程中的变化，为EAOC的发病机制提供新的见解。

[1]Bulun SE.Endometriosis[J].N Engl J Med,2009,360(3):268-279.

[2]Aris A.Endometriosis-associated ovarian cancer:a ten-year cohort study of women living in the Estrie Region of Quebec,Canada[J].J Ovarian Res,2010,3(1):89-92.

[3]Mogensen JB,Kjer SK,Mellemkjr L,et al.Endometriosis and risks for ovarian,endometrial and breast cancers:a nationwide cohort study[J].Gynecol Oncol,2016,7(16):95-101.

[4]Borgfeldt C,Andolf E.Cancer risk after hospital discharge diagnosis of benign ovarian cysts and endometriosis[J].Acta Obstet Gynecol Scand,2004,83(83):395-400.

[5]MelinA,SparenP,PerssonI,etal.Endometriosisandtheriskofcancerwithspecialemphasisonovariancancer[J].HumReprod,2006,21(5):1237-1242.

eosinophilic esophagitis[J].Curr Opin Gastroenterol,2015,31(4):321-327.

[4]Wu D,Zhou J,Bi H,et al.CCL11 as a potential diagnostic marker for asthma?[J].J Asthma,2014,51(8):847-854.

[5]Berkman N,Ohnona S,Chung FK,et al.Eotaxin-3 but not eotaxin gene expression is upregulated in asthmatics 24 hours after allergen challenge[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2001,24(6):682-687.

[6]Lee JH,Moore JH,Park SW,et al.Genetic interactions model among Eotaxin gene polymorphisms in asthma[J].J Hum Genet,2008,53(10):867-875.

[7]Komiya A,Nagase H,Yamada H,et al.Concerted expression of eotaxin-1,eotaxin-2,and eotaxin-3 in human bronchial epithelial cells[J].Cell Immunol,2003,225(2):91-100.

[8]高贵民，吴健民，崔天盆，等．eotaxin-3基因多态性与变应性哮喘的相关性[J]．中华医学遗传学杂志，2006，23(2)：169-172．

[9]Chae SC,Lee YC,Park YR,et al.Analysis of the polymorphisms in eotaxin gene family and their association with asthma,IgE,and eosinophil[J].Biochem Biophys Res Commun,2004,320(1):131-137.

ExpressionofER,HNF-1βandCOX-2inendometriosis-associatedovariancanceranditsclinicalsignificance*

ChenYing,LongQifang

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,SecondAffiliatedHospital,SuzhouUniversity,Suzhou,Jiangsu215004,China)

ObjectiveTo investigate the expression difference of estrogen receptor(ER),hepatocyte nuclear factor 1β(HNF-1β) and epoxy-2(COX-2) in different types of endometriosis-associated ovarian cancer (EAOC).MethodsForty-four patients with EAOC treated in our hospital from July 2011 to April 2016 were selected,including 17 cases of endometrioid carcinoma,21 cases of clear cell carcinoma and 6 cases of ovarian serous carcinoma.The expression of ER,HNF-1β and COX-2 in different types of EAOC were detected by immunohistochemistry.The correlation among expression levels of ER,HNF-1β and COX-2 was investigated by adopting Spearman rank correlation analysis.ResultsThe positive rate of ER in endometrioid carcinoma was 100.0%,which was significantly higher than 9.5% in the patients with clear cell carcinoma and 0% in the patients with ovarian serous carcinoma(χ2=4.305,P<0.01),and the positive rate of HNF-1β in the patients with clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma were 85.7% and 100.0% respectively,which was significantly higher than 11.8% in the patients with endometrioid carcinoma(χ2=3.585，P<0.01),the positive rates of COX-2 in the patients with endometrioid carcinoma,clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma were 76.5%,81.0% and 83.3%,respectively,and the difference was not statistically significant (χ2= 0.744,P=0.104).The correlation analysis showed that ER was negatively correlated with HNF-1β expression level(r=-0.428,P<0.01) and positively correlated with COX-2 expression level (r=0.204,P=0.013).ConclusionER is mainly expressed in endometrioid carcinoma.HNF-1β is mainly expressed in clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma.The expression level of ER had a certain correlation to the expression of HNF-1β and COX-2,which may be closely related to EAOC progression.

ovarian neoplasms;estrogen receptor;hepatocyte nuclear factor-1β;cyclooxygenase

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.27.018

R737.31

A

1671-8348(2017)27-3801-03

2016-11-27

2017-04-25)

江苏省科技计划项目(BK2012599)。

陈颖(1983-)，硕士，主治医师，主要从事妇科肿瘤方面的研究。