原发免疫性血小板减少症患儿中T淋巴细胞亚群、NK细胞及B细胞在外周血中的表达情况分析

张 晴,高长俊

(河北省唐山市妇幼保健院 小儿血液科,河北 唐山,063000)

原发免疫性血小板减少症患儿中T淋巴细胞亚群、NK细胞及B细胞在外周血中的表达情况分析

张 晴,高长俊

(河北省唐山市妇幼保健院 小儿血液科,河北 唐山,063000)

目的研究原发免疫性血小板减少症患儿中T淋巴细胞亚群、NK细胞及B细胞在外周血中的表达情况。方法选择ITP患儿241例作为研究组，另选择252例健康儿童作为对照组，检测并比较2组患儿T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8细胞)、B细胞和NK细胞水平。结果研究组外周静脉血中CD3水平、CD4水平和CD4/CD8显著低于对照组,CD8水平显著高于对照组(P<0.05);研究组血清中B细胞水平低于对照组。研究组的PAIgG、PAIgA、PAIgM水平显著高于对照组(P<0.05),IFN-γ水平高于对照组,IL-4水平低于对照组;研究组CD(16+56)水平高于对照组。结论ITP患儿机体存在T淋巴细胞水平失衡,NK细胞以及B细胞表达未见异常发生。

原发免疫性血小板减少症;T淋巴细胞亚群;NK细胞;B细胞;表达

ABSTRACT:ObjectiveTo explore expression of T lymphocyte subsets,NK cells and B cells in peripheral blood of children with primary immunologic thrombocytopenia(ITP).MethodsA total of 241 ITP children admitted to our hospital were selected as study group,and 252 healthy children were selected as control group.The levels of T lymphocyte subsets(CD3,CD4,CD8cells) and B cells and NK cells in the two groups were detected and compared.ResultsThe levels of CD3,CD4and CD4/CD8in the peripheral blood of the study group were significantly lower,CD8level was significantly higher,and B cells level was significantly lower than that of the control group (P<0.05).The levels of PAIgG,PAIgA and PAIgM in the study group were significantly higher,the level of IFN-γ was higher,IL-4 level was lower,the level of CD(16+56) was higher than that in the control group (P<0.05).ConclusionThere is an imbalance of T lymphocyte level in the children with ITP,and there was no abnormality in the expression of NK cells and B cells.

KEYWORDS:primary immunologic thrombocytopenia;T lymphocyte subsets;NK cells;B cells;expression

免疫性血小板减少症(ITP)是儿童时期最常见出血性免疫性疾病之一[1],主要症状有凝血功能障碍、颅内出血、皮肤黏膜出血以及血小板减少等，而颅内出血是ITP致死的高危因素之一。相关研究[2-3]表明,ITP发病机制为患者体内产生抗血小板抗体，导致网状内皮系统破坏血小板，血小板数量减少。临床治疗方法主要为药物治疗，即采取激素或者丙种球蛋白，抑制自身抗体产生，封闭网状内皮系统受体，从而减少血小板的被破坏。临床研究[4-5]显示，部分患儿治疗无效，病程迁徙，预后不良，最终进展为慢性/难治性ITP。最新研究[6]发现，免疫性血小板减少症的主要发病机制是机体的细胞免疫和体液免疫异常导致的血小板破坏增加和生成不足，而骨髓穿刺具有创伤性，是否需要常规骨穿仍存在争议，而通过检测血小板参数对ITP的早期诊断，治疗过程中疗效判断及预后极其重要。本研究对本院小儿血液科病房收治的ITP患儿的T淋巴细胞亚群、NK细胞及B细胞在外周血中的表达情况进行研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2013年6月—2015年6月本院小儿血液科病房收治的ITP患儿241例作为研究组，其中男169例，女72例，年龄3～12岁，平均(7.6±1.3)岁，病程7～25 d,平均病程为(8.72±1.26) d。纳入标准:患儿入院后均进行血常规检查、抗血小板检查以及化验T淋巴细胞亚群后确诊为原发ITP,排除继发性血小板减少症、淋巴细胞增殖、系统性红斑狼疮、假性血小板减少症和各种自身免疫性病导致的血小板减少症状[7]。另选择本院同期来体检的252例健康儿童作为对照组，其中男165例，女87例，年龄3～12岁，平均(8.2±1.4)岁。2组的性别、年龄等一般资料比较无显著差异(P>0.05),具有可比性。2组受检者在进行检查前4周均无进行输血以及使用糖皮激素或者相关疫苗接种。所有患者为自愿参加，签署知情同意书。

1.2 方法

本研究所选仪器和试剂为美国生产的生化分析仪(规格:贝克曼DXC800),流式细胞仪(规格:贝克曼Gallios)，血液分析仪(规格:贝克曼LH750)。

2组受检者晨起空腹状态下抽取外周静脉血2 mL,血清进行乙二胺四乙酸抗凝处理后，取100 μL新鲜乙二胺四乙酸抗凝血标本加入样品测定管内，同时加入20 μL四色免洗淋巴细胞亚群分析试剂，进行充分混合，后加入2 mL血溶素，再次进行充分混合操作，于10 min后采用流式细胞仪(规格:贝克曼Gallios)检验T淋巴细胞亚群(即CD3、CD4、CD8细胞)、B细胞和NK细胞水平。对2组受检者的T淋巴细胞亚群和B细胞水平进行记录、计算并比较分析，同时对2组受检者血小板相关抗体、血清细胞和NK细胞水平进行记录、计算并比较分析。

1.3 统计学分析

采用SPSS 16.0统计学处理软件进行数据分析，计量资料采用方差分析，以均数±标准差表示，计数资料采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 2组受检者T淋巴细胞亚群和B细胞水平比较

研究组外周静脉血中CD3水平、CD4水平和CD4/CD8显著低于对照组,CD8水平显著高于对照组(P<0.05);研究组血清中B细胞水平低于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 2组受检者血小板相关抗体、血清细胞和NK细胞水平比较

研究组的血小板相关免疫球蛋白G(PAIgG)、血小板相关免疫球蛋白A(PAIgA)、血小板相关免疫球蛋白M(PAIgM)水平显著高于对照组(P<0.05);研究组γ-干扰素(IFN-γ)水平高于对照组，白介素-4(IL-4)水平低于对照组;研究组CD(16+56)水平高于对照组。见表2。

表1 2组受检者T淋巴细胞亚群和B细胞水平比较

与对照组比较,*P<0.05。

表2 2组受检者NK细胞水平比较

与对照组比较,*P<0.05。

3 讨 论

ITP作为儿童时期易发的自身免疫性出血性疾病，临床表现以血小板减少、凝血功能障碍和皮肤黏膜出血为主要特点，颅内出血是本病死亡的主要原因。目前对本病的认识多集中在血小板相关抗体致血小板被破坏，但临床上相当一部分患儿血小板相关抗体呈阴性，且应用常规的糖皮质激素、丙种球蛋白等治疗后仍有复发[8-11]。

T淋巴细胞在抗原刺激活化作用，产生淋巴因子，调节机体免疫功能，而绝大多数血小板，其自身抗体的产生是由辅助性T淋巴细胞、NK细胞以及B淋巴细胞生成，而ITP患儿的免疫功能紊乱则是引起ITP患儿发病的重要原因[12]。使T淋巴细胞亚群、NK细胞以及B淋巴细胞水平恢复正常，是保证机体进行正常免疫应答的核心[13]。NK细胞作为人体重要的免疫细胞，不仅起到抗病毒感染的作用，还与免疫调节息息相关，同时参与机体内参与自身免疫性疾病。本研究通过对初诊ITP患儿的T细胞亚群、NK细胞、B淋巴细胞和血小板相关参数的对比，以及对部分患儿生活质量的调查，较为深入的探讨ITP的免疫学发病机制，以期对临床治疗提供一定指导，从而更好地让ITP患儿参与社会生活[14-16]。本研究结果显示，ITP患儿与正常体检儿童相比,CD3、CD4T淋巴细胞、CD4/CD8比值均明显低于正常体检儿童,CD8T淋巴细胞明显高于正常体检儿童,ITP患儿存在明显的免疫功能紊乱，这可能是由于T淋巴细胞比例失常，患儿血清内辅助性T淋巴细胞水平降低，使得抑制性T淋巴细胞含量上升，从而抑制B淋巴细胞功能发挥充分，导致B细胞功能性亢进。CD4T细胞水平降低，导致B细胞水平上升，生成大量浆细胞，生成的抗血小板抗体可以缩短血小板的存活时间，使骨髓巨核细胞引起成熟性障碍，导致血小板功能障碍。通过研究发现，ITP患儿的NK细胞和B细胞，虽与正常体检儿童相比，有轻微差异，但其NK细胞和B细胞表达未见异常，

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ExpressionofTlymphocytesubsets,NKcellsandBcellsinperipheralbloodofchildrenwithprimaryimmunologicthrombocytopenia

ZHANGQing,GAOChangjun

(DepartmentofPediatricHematology,TangshanMaternalandChildHealthCareHospitalofHebeiProvince,Tangshan,Hebei,063000)

R 558

A

1672-2353(2017)17-045-03

10.7619/jcmp.201717013

2017-04-11

河北省卫生厅(Z2011236)