RP-HPLC法测定参蒲止痛胶囊中咖啡酸的含量

陈艳梅 ，敬永升

1. 商丘市食品药品检验检测中心，河南 商丘 476000；2. 河南大学 药学院，河南 开封 475004

RP-HPLC法测定参蒲止痛胶囊中咖啡酸的含量

陈艳梅1，敬永升2

1. 商丘市食品药品检验检测中心，河南 商丘 476000；2. 河南大学 药学院，河南 开封 475004

〔目的〕 建立高效液相色谱法测定参蒲止痛胶囊中咖啡酸的含量。〔方法〕 采用Agilengt Eclipse Plus-C18色谱柱，流动相：甲醇-磷酸盐缓冲溶液(25∶75)；流速：1.0 mL/min；检测波长323 nm。〔结果〕 咖啡酸在0.063 24～0.632 4 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为98.82%，RSD=0.69%(n=6)。〔结论〕方法操作简便，灵敏度高、结果准确可靠，可以作为参蒲止痛胶囊质量控制的手段。

参蒲止痛胶囊；咖啡酸；RP-HPLC

Abstract:〔Objective〕To establish an high performance liquid chromatography (HPLC) method for determination of caffeic acid in shenpu Analgesic capsule.〔Methods〕Agilengt Eclipse Plus-C18 chromatographic column was adopted. The mobile phase: methanol-phosphate buffer solution of 25-75 at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength of was 323 nm with external standard method.〔Results〕Caffeic acid shows a good linearity in the range of 0.063 24 ～ 0.632 4 μg/mL (r=0.999 9) and the average recovery was 98.82%，RSD=0.69%(n=6).〔Conclusion〕the method is simple, high sensitivity, accurate and reliable results and it can be used as a reference of Shenpu Analgesic capsule quality control mean.

Keywords: shenpu Analgesic capsule Caffeic acid RP-HPLC

参蒲止痛胶囊是经多年临床和实践证实具有较高疗效的医疗机构制剂(批准号豫药制字Z20121452),是由丹参、蒲公英、醋延胡索、泽兰、红花、当归等九味中药经混合、粉碎等工艺加工制成，具有活血散瘀、消肿止痛的功效，用于治疗跌打损伤、淤血、疼痛等症[1]。蒲公英为方中君药,其主要药效成分为咖啡酸，具有广泛的抗菌抗病毒作用[2]。参蒲止痛胶囊作为医院制剂,其质量标准收载于河南省医疗机构制剂标准中[3]。但其中仅有丹参对照药材和丹参酮ⅡA的薄层鉴别方法，而缺少咖啡酸的检测方法[4]。为了更好地控制该制剂的质量,笔者采用反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)对该方君药中的咖啡酸进行了含量测定。通过线性关系、精密度、准确度、重复性、稳定性、回收率等一系列方法学验证，证明该方法准确、灵敏、简便快捷。其含量测定准确可靠，可以作为参蒲止痛胶囊中咖啡酸含量的质量控制标准。

1 仪器与试药

Agilengt 1260高效液相色谱仪(自动进样)； XS205DU电子分析天平(瑞典梅特勒)； DSQ10260超声仪(上海特惠电子仪器有限公司)。咖啡酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110885-200102)；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯、水为重蒸馏水。参蒲止痛胶囊(民权县中医院提供，批号：160323、160722、160911)。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品10.54 mg，精密称定，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇适量，超声使完全溶解后，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，即得0.105 4 μg/L对照品储备液。精密吸取对照品储备液3.00 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

供试品溶液的制备：取批号为160323的参蒲止痛胶囊样品30粒，去掉囊壳，将内容物混合精密称量，精密称取相当于15粒胶囊内容物的重量，置10 mL棕色量瓶中。加甲醇溶液适量，浸渍2 h，超声30 min。完全溶解后，用流动相稀释并定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2 实验条件的选择

色谱条件： Thermo Scientific C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-pH=3.9磷酸盐缓冲溶液(25∶75)；流速：1.0 mL/min；检测波长：323 nm；柱温：室温。对照品溶液、供试品溶液分别进样10 μL，咖啡酸对照品溶液HPLC色谱图，见图1。供试品溶液HPLC色谱图，见图2。

在上述色谱条件下，咖啡酸保留时间约为14.3 min，理论板数按咖啡酸计算不低于3 000。

图1 对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系 取2.1项下咖啡酸对照品溶液，经0.22 μm的微孔滤膜滤过，注入进样瓶，以2.2项下色谱条件，分别进样2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL，各进样量重复进样3次，绘制色谱图，分别记录峰面积，取3次峰面积的平均值，以峰面积A对进样量m(μg)进行线性回归，得回归方程：

A=6 007.8 m-11.803，r=0.999 9。

结果显示，咖啡酸在0.063 24 μg～0.632 4 μg质量范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验 取2.1项下咖啡酸对照品溶液，经0.22 μm的微孔滤膜滤过，注入进样瓶，连续进样6次，每次进样10 μL，绘制色谱图，分别记录峰面积，计算其相对标准偏差RSD=0.44% (n=6)。结果表明，该方法精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 取同一批号的供试品按2.1项下供试品溶液的配制方法制备供试品溶液，经0.22 μm的微孔滤膜滤过，分别在4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h进样测定，每次进样量为10 μL，绘制色谱图，记录峰面积，计算其相对标准偏差RSD=1.38%(n=6)。结果表明,供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.3.4 重复性试验 取同一批号的供试品按2.1项下供试品溶液的配制方法制备供试品溶液6份，经0.22 μm的微孔滤膜滤过，注入进样瓶，每份每次进样10 μL，绘制色谱图，记录峰面积，计算其相对标准偏差RSD=1.25%。结果表明,该方法重复性良好。

2.3.5 加样回收率试验 采用加样回收法，精密量取6份已知含量的供试品溶液5.00 mL，置10 mL棕色量瓶中，定量加入对照品储备液1.50 mL，用甲醇溶液定容、摇匀，经0.22 μm的微孔滤膜滤过，每次进样10 μL，记录色谱图，计算回收率。测得咖啡酸的平均回收率为98.82%，RSD=0.69%(n=6)，结果显示，该方法准确度较高。

2.4 含量测定

取三个批号的参蒲止痛胶囊样品，按2.1项下供试品溶液配制方法，制备每个批号的供试品溶液，分别用0.22 μm的微孔滤膜滤过，注入进样瓶，按2.2项下色谱条件每次进样10 μL，绘制色谱图，记录峰面积，由每个批号峰面积的平均值按外标法计算参蒲止痛胶囊中咖啡酸的含量(mg/粒)，结果见表1。

表1 含量测定结果

3 讨论

本实验采用反相高效液相色谱法测定参蒲止痛胶囊中咖啡酸的含量，以甲醇-磷酸盐缓冲溶液(25∶75)为流动相，流速为1.0 mL/min；检测波长为323 nm。线性关系考察得知，咖啡酸在0.063 24～0.632 4 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为98.82%，RSD=0.69%,n=6。且精密度好、准确度高、稳定性及重复性均较好，作为参蒲止痛胶囊中咖啡酸含量测定的可靠方法，可作为测定参蒲止痛胶囊中咖啡酸质量控制的依据。

[1] 朱德杰.HPLC法测定蒲公英片中咖啡酸的含量[J]. 数理医药学杂志, 2013,29(6):704-705.

[2] 丘伟，李芳桂. HPLC法测定复方溪黄草颗粒咖啡酸的含量[J].中医药导报, 2014，20(11): 98-99.

[3] 王秀梅，玉华.HPLC法测定蒙药查干扫日劳-4汤中咖啡酸的含量[J].内蒙古民族大学学报,2015,30(1):71-72.

[4] 万茵，黄婧嫣等. HPLC同时测定毛蕊花糖苷、咖啡酸和羟基酪醇[J].分析实验室, 2016, 35(1)30-33.

[责任编辑段金卯]

DeterminationofCaffeicacidinshenpuAnalgesiccapsulebyRP-HPLC

CHEN Yanmei1, JING Yongsheng

1.Shangqiu Food and Drug Inspection Testing Center, Shangqiu , Henan Shangqiu 476000,China; 2. Pharmaceutical College of He Nan University, Kai Feng, 475004, China

R927.2

A

1672-7606(2017)03-0177-02

2016-11-17

陈艳梅(1982-)，女，河南永城人，主管药师，研究方向：药物分析。