卵巢子宫内膜异位囊肿患者外周血Th17、Treg比例变化及意义

吴德慧

(青海红十字医院，西宁810000)

卵巢子宫内膜异位囊肿患者外周血Th17、Treg比例变化及意义

吴德慧

(青海红十字医院，西宁810000)

目的探讨辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)比例及其调控基因在卵巢子宫内膜异位囊肿发生、发展中的作用。方法选择卵巢子宫内膜异位囊肿患者90例作为观察组，因单纯输卵管原因导致的不孕症患者90例作为对照组。采用流式细胞术检测两组外周血Th17、Treg占CD4+T细胞比例，计算Th17/Treg。采用qRT-PCR法检测观察组异位内膜、在位内膜及对照组在位内膜组织孤独核受体γ(ROR-γ) mRNA、叉头状转录因子3(FoxP3)mRNA。采用ELISA法检测两组血清白细胞介素17(IL-17)、IL-22、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)。结果观察组外周血Th17占CD4+T细胞比例、Th17/Treg均高于对照组，Treg占CD4+T细胞比例低于对照组(P均<0.05)。观察组异位内膜ROR-γ mRNA相对表达量低于观察组在位内膜和对照组在位内膜(P均<0.05)，观察组在位内膜ROR-γ mRNA相对表达量低于对照组在位内膜(P<0.05)；观察组异位内膜FoxP3 mRNA相对表达量高于观察组在位内膜和对照组在位内膜(P均<0.05)，观察组在位内膜FoxP3 mRNA相对表达量高于对照组在位内膜(P<0.05)。观察组血清IL-17、IL-22水平均高于对照组，IL-10、TGF-β水平均低于对照组(P均<0.05)。结论卵巢子宫内膜异位囊肿患者外周血Th17/Treg比例失衡；Th17/Treg比例失衡可能通过调节其下游转录因子及细胞因子表达而促进卵巢子宫内膜异位囊肿的发生、发展。

子宫内膜异位症；卵巢子宫内膜异位囊肿；辅助性T细胞17；调节性T细胞

卵巢子宫内膜异位囊肿是子宫内膜异位症的常见类型，育龄妇女高发，发病率为7%～12%[1]。目前，关于卵巢子宫内膜异位囊肿的发病机制仍未明确，一般认为是子宫内膜细胞通过输卵管进入盆腔后定植于卵巢而引起的，其中免疫应答机制在这一过程中发挥了重要作用[2,3]。辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)是两种重要的CD4+T淋巴细胞。近年来研究发现，Th17、 Treg可能参与卵巢子宫内膜异位囊肿的发生与发展[4]，但具体的免疫调节机制仍不清楚。孤独核受体γ(ROR-γ)、叉头状转录因子3(FoxP3)是Th17、Treg调控的下游转录因子。IL-17、IL-22、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)是Th17、Treg分泌的细胞因子。本研究探讨血清Th17、Treg比例及其调控基因在卵巢子宫内膜异位囊肿发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2013年11月～2016年11月青海红十字医院收治的卵巢子宫内膜异位囊肿患者90例作为观察组，年龄21～40(31.24±3.52)岁。选择同期因单纯输卵管原因导致的不孕症患者90例为对照组，年龄22～41(32.13±3.62)岁。均为中国汉族育龄女性，平素月经规律，月经周期27～35 d。排除心肝肾等脏器功能不全、糖尿病、慢性高血压疾病、自身免疫性疾病、感染以及近期用药史者，以及子宫肌瘤、腺肌病者。术前3个月没有接受促性腺激素释放激素激动剂或雌孕激素治疗。观察组经病理检查证实为卵巢子宫内膜异位囊肿，取其异位内膜、在位内膜组织；对照组经病理检查排除子宫内膜异位症，取其在位内膜组织；均液氮保存。本研究通过我院医学伦理委员会批准，患者及其家属均知情同意。

1.2 外周血Th17、Treg细胞比例检测 采用流式细胞术。两组于月经干净后3～7 d采集空腹外周静脉血5 mL，取肝素抗凝全血100 μL，即刻进行流式细胞学检查。首先向抗凝管中加入FITC 标记的CD3抗体、APC-CY7标记的CD8抗体、PE-CY7标记的CD25抗体、PEMAB标记的CD127抗体各10 μL，恒温孵育20 min；固定后破膜，应用PBS缓冲液洗涤细胞，置于流式细胞仪中检测外周血Th17、Treg占CD4+T细胞比例(分别记为Th17%、Treg%)，并计算Th17/Treg。

1.3 子宫内膜组织ROR-γ、FoxP3 mRNA表达检测 采用qRT-PCR法。取观察组异位内膜、在位内膜及对照组在位内膜组织，采用qRT-PCR法检测ROR-γ、FoxP3 mRNA表达。引物序列参考文献[5]。先用TRIzol法提取组织中总RNA，按照试剂盒操作说明进行逆转录，然后进行qRT-PCR反应。反应条件：95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，60 ℃退火34 s，进行40个循环。以GAPDH作为内参，采用2-ΔΔCt法计算ROR-γ、FoxP3 mRNA相对表达量。

1.4 血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β检测 采用ELISA法。取两组1.2检测后的剩余外周血，经3 500 r/min离心10 min，取上清液。采用ELISA法检测血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，严格按照试剂盒说明书进行操作。

2 结果

2.1 两组外周血Th17%、Treg%及Th17/Treg比较 见表1。

表1 两组外周血Th17%、Treg%及Th17/Treg比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.2 两组子宫内膜组织ROR-γ、FoxP3 mRNA表达比较 见表2。

表2 观察组异位内膜、在位内膜及对照组在位内膜ROR-γ、FoxP3 mRNA相对表达量比较

注：与对照组在位内膜比较，*P<0.05，与观察组在位内膜比较，#P<0.05。

2.3 两组血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平比较 见表3。

表3 两组血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

3 讨论

在正常女性体内，子宫内膜细胞随逆流的经血经输卵管进入盆腔可被机体免疫细胞识别并清除[5]；而在卵巢子宫内膜异位囊肿患者体内，进入盆腔的子宫内膜细胞未被免疫细胞清除，而植入卵巢形成囊肿。Myung等[6]将卵巢子宫内膜异位囊肿的发病分为6个阶段：①子宫内膜细胞脱落;②脱落子宫内膜细胞移位至盆腔内；③内膜细胞逃避免疫监视；④内膜细胞黏附;⑤血管生成定植细胞存活；⑥周期性出血，其中免疫因素与卵巢子宫内膜异位囊肿发生有密切关系。

Th17和Treg是两种重要的CD4+T淋巴细胞，正常情况下机体Th17和Treg存在平衡，当Th17和Treg出现失衡时，可引起一系列免疫反应，引发相应疾病[7]。目前已有研究证实肿瘤、自身免疫疾病、炎症、感染等均与Th17/Treg失衡有关[8～10]。本研究观察组Th17%、Th17/Treg高于对照组，Treg%低于对照组，证实卵巢子宫内膜异位囊肿患者体内存在Th17降低和Treg升高。Th17是由Th0细胞分化而成的辅助性T细胞，正常情况下Th17可以分泌IL-17、IL-22等细胞因子，从而发挥免疫调节功能[11]。而Treg则是一种控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，可分泌IL-10、TGF-β，发挥调节免疫反应的功能[12]。本研究观察组Th17升高，Treg降低，提示卵巢子宫内膜异位囊肿患者存在Th17功能亢进。进一步分析发现，观察组血清IL-17、IL-22水平显著高于对照组，IL-10、TGF-β水平显著低于对照组；其中IL-17、IL-22是Th17的主要效应分子，IL-17可促进T淋巴细胞进一步刺激上皮细胞、成纤维细胞、内皮细胞增殖，刺激巨噬细胞和黏附分子生成[13]。IL-22亦是一种重要的致炎因子，在类风湿关节炎、银屑病、克罗恩病、强制性脊柱炎中存在IL-22异常升高[14～16]。IL-10、TGF-β是Treg的主要效应分子，可发挥免疫调节和免疫抑制功能。本研究观察组血清IL-17、IL-22水平升高，IL-10、TGF-β水平降低，是Th17与Treg比例失衡的必然结果。

ROR-γ是Th17调控的重要转录因子，可以进一步诱导IL-17分泌并发挥免疫功能[17]。同时研究发现，ROR-γ可以启动多个信号通路，促进Th17分化，进一步引发炎症反应[18]。FoxP3是Treg的特异性核转录因子，发挥免疫抑制功能[19]。本研究观察组异位内膜、在位内膜ROR-γ mRNA相对表达量均显著低于对照组，FoxP3 mRNA相对表达量显著高于对照组，观察组异位内膜ROR-γ mRNA相对表达量显著低于在位内膜，FoxP3 mRNA相对表达量显著高于在位内膜。提示ROR-γ表达异常升高与FoxP3表达异常降低在卵巢子宫内膜异位囊肿的发生、发展中发挥重要作用。

综上所述，卵巢子宫内膜异位囊肿患者外周血Th17/Treg比例免疫调节失衡；Th17/Treg比例失衡可能通过调节其下游转录因子及细胞因子表达而促进卵巢子宫内膜异位囊肿的发生、发展。

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R711.71

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2017-05-01)