三波长分光光度法测茄子中总黄酮含量*

李玉红，韩露露，王秋红，马荣荣

（咸阳师范学院 化学与化工学院,陕西 咸阳 712000）

分析测试

三波长分光光度法测茄子中总黄酮含量*

李玉红，韩露露，王秋红，马荣荣

（咸阳师范学院 化学与化工学院,陕西 咸阳 712000）

采用以AlCl3为显色的芦丁为标准物质三波长分光光度法测定茄子中的总黄酮含量，方法有效地消除了吸收峰不对称及干扰组分对定量分析造成的影响。分别在波长为λ1=500nm,λ2=423nm,λ3=350nm处测吸光度时,则ΔA与浓度C之间呈良好的线性关系线性，方程为ΔA=0.0002C(μg·mL-1)-0.0139，R2=0.9988，线性范围为0～3380μg·mL-1。按标准曲线法进行定量分析，测得总黄酮量紫茄子为48.3 mg·g-1及绿茄子为27.8mg·g-1，方法回收率为96.9%～102%，相对标准偏差3.66%～4.65%（n=6）。该方法操作简单，易于操作，可为果蔬总黄酮含量的测定提供理论基础。

茄子；黄酮；三波长分光光度法

茄科植物茄子（Solanum melongena L），又叫落苏，富含蛋白质、维生素、矿物质及其它蔬菜所无的维生素E和维生素P，维生素P黄酮化合物的一种且生物活性成分丰富，具有降脂，降压、消肿止痛、清热活血、清热解毒、抗衰老、防治胃癌、保护心血管、等药理活性。茄子的药理活性与其含有的黄酮类化合物是密不可分在医学界已得到证明，有不可多得的治病防病作用[1，2]，因此，从茄子中提取黄酮具有一定的开发价值。

黄酮含量的检测采用分光光度法而此法存在缺陷，本文建立了氯化铝对茄子中总黄酮物质进行充分显色，采用已成功运用铝离子与黄酮类化合物形成的稳定配合物测沙棘果汁中黄酮［3］的三波长分光光度法。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

BS-224-S电子天平（上海科学仪器有限公司）；DZF-6020真空干燥箱（上海琅玕实验设备有限公司）；HH-1恒温水浴锅（上海光地仪器设备有限公司）；KQ5200DE超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SPECORD 50型双光束紫外可见分光光度计（德国DENA公司。）

准确称（纯度≥98%）芦丁0.3380g，用30%乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中，摇匀即得芦丁对照品溶液。准确称取1.3334g无水AlCl3固体，用蒸馏水定容到100mL，即得到1%AlCl3溶液。其它试剂均为分析纯。

1.2 茄子样品处理

茄子样品洗净切片，且60℃下烘干粉碎。准确取茄子粉末10.0g，利用超声波辅助索氏提取法提取[4]，加入95%乙醇溶液120mL，水浴温度40℃，不断用高沸点石油醚回流80min，放入超声波仪中进行提取，滤液经旋转蒸发仪浓缩，浓缩至5～10mL，粗制黄酮样品离心1min，取清液于50mL容量瓶中用30%乙醇溶液定容至100mL。

1.3 定性试验[5]

取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下观察，呈现明显淡黄褐色荧光斑点；紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，可见光呈灰黄色，紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点；盐酸-镁粉反应：取样品提取液1mL于试管中，加入镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。

1.4 定量试验

准确移取不同体积的芦丁标准储备液至10mL容量瓶中，用30%乙醇水溶液定容至刻度，加入一定量1%的AlCl3溶液充分显色，参比是以30%乙醇水溶液，用1cm的比色皿在波长335～525nm范围内扫描，绘制其吸收曲线[3]。

以芦丁为标准根据三波长原理结合芦丁吸收光谱实验选择确定了波长分别为λ1＝500nm，λ2＝423nm，λ3＝350nm。

2 结果与讨论

2.1 光谱曲线及标准曲线

分别预10mL的容量瓶中移取一系列不同体积芦丁标准溶液，加入1%的AlCl3溶液，充分混合30%乙醇溶液定容至刻度，用1cm的比色皿在波长325～525nm范围内扫描，绘制其吸收曲线（图1），以芦丁为标准根据三波长原理结合芦丁吸收光谱实验选择确定了波长分别为λ1＝500nm，λ2＝423nm，λ3＝350nm。其相应波长处吸光度为 A500、A423、A350，计算相应波长处不同浓度的ΔA（表1），ΔA=A423-（73A500+77A350/150），绘制ΔA与芦丁浓度的标准曲线（图 2）。所得线性方程为：ΔA=0.0002C（μg·mL-1）-0.0139，R2=0.9988，线性范围为 0～3380μg·mL-1。

图1 芦丁吸收光谱曲线Fig.1 Absorption spectra of rutin

表1 芦丁浓度与ΔΑ的关系Tab.1 Relationship between ΔΑ and rutin concentrations

图2 芦丁标注曲线Fig.2 standard curve of Rutin

2.2 稳定性实验

用移液管精密量取对照品溶液0.2mL置于10mL容量瓶中，用30%乙醇定容，每隔30min测一次吸光度即在 0、30、60、90、120min 测其吸光度。见表2。计算得出RSD为0.51%，实验结果表明提取液在120min内较稳定。

表2 稳定性实验Tab.2 Results of stability test

2.3 回收率实验

量取不同体积芦丁对照品溶液于10mL容量瓶中，用30%乙醇定容，采用三波长分光光度法计算吸光度ΔA，见表3。计算结果RSD为2.04%～4.23%说明仪器精密度良好。

表3 精密度实验Tab.3 Results of recovery test

2.4 样品分析

采集不同品种的茄子,按上述实验方法提取样品黄酮,按操作条件测定波长处吸光度且计算ΔA，分析结果见表4。

表4 茄子样品测定结果Tab.4 Analytical results of different samples of eggplant

3 结论

以芦丁为标准物质建立的三波长分光光度方法测定茄子中的总黄酮含量的方法，结果满意。有效地消除了吸收峰不对称给定量分析造成的影响,并校正了基于干扰组分的吸收光谱具有线性吸收产生的基线倾斜。

［1］ 周宝利,张琦,陈志霞,等.不同品种茄子果皮花青素含量及其稳定性研究［J］.食品科学,2011,32（1）:99-103.

［2］ 周宝利，李兴宝，李腾飞，等.茄子果实中黄酮提取工艺优化及不同茄子品种黄酮含量比较［J］.食品科学,2012,33（10）:103-106.

［3］ 回瑞华,侯冬岩,关崇新,等.三波长-光谱法测定沙棘果汁中黄酮的含量［J］.光谱学与光谱分析,2005,25（2）:266-269.

［4］ 马国刚,王建中.响应面分析法优化槐米芦丁超声波提取工艺的研究［J］.分离与提取,2007,33（8）:167-170.

［5］ 吴立军.天然药物化学［M］.北京:人民卫生出版社,2003.177-179.

Determination of total flavonoids in eggplant by three wavelength spectrophotometry*

LI Yu-hong1，HAN Lu-lu，WANG Qiu-hong，MA Rong-rong
（School of Chemisitry and Chemical Engineering,Xianyang Normal College,Xianyang 712000，China）

A three-wavelength spectrophotometric method for the determination of total flavonoids in Eggplant was developed using rutin for standard material and AlCl3as chromogenic.the effects of the asymmetric absorption peak and interfering components on the analytical results can be eliminated.By selecting three wavelengths appropriately,in the wavelength λ1＝500nm,λ2＝423nm,λ3＝350nm when measured at an absorbance,the ΔA between the concentration c and a good linear relationship between the linear equation was ΔA＝0.0002C(μg·mL-1)-0.0139,R2＝0.9988,linear range is 0～3380μg·mL-1.The linear range was 0～3380μg·mL-1,The measured amount of total flavonoids purple eggplants was 48.3mg·g-1and green eggplants was 27.8mg·g-1,the recoveries was from 97%～102%and the relative standard deviation was 3.66%～4.65%（n＝6）.The method is simple and easy to operate,can provide a theoretical basis for the determination of total flavonoids in fruits and vegetables.

eggplant;flavonoids;three wavelength spectrophotometry

O657.31

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20170921

2017-04-24

陕西省自然科学基金项目（2013JM2016）；陕西省大学生创新创业训练项目（1721）；咸阳师范学院专项科研项目（15XS YK042）

李玉红（1980-），女，汉，陕西咸阳人，主要从事分析方面研究。