HPLC波长切换法同时测定消痰益康(糖浆)中6种成分的含量

王 华

·药学研究·

HPLC波长切换法同时测定消痰益康(糖浆)中6种成分的含量

王 华

目的建立同时测定消痰益康(糖浆)中多成分的定量分析方法。方法采用HPLC波长切换法同时测定原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素的含量。色谱柱为Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-0.04%冰醋酸溶液为流动相，按规定进行梯度洗脱；流速0.9 mL/min；检测波长分别为280 nm(原儿茶醛、儿茶素和表儿茶素)、360 nm(金丝桃苷和槲皮素)和299 nm(杜鹃素)；柱温30 ℃。结果原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素分别在7.290～145.8、2.550～51.00、13.76～275.2、6.470～129.4、2.660～53.20、3.880～77.60 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率及相应的RSD分别为98.68%(1.35%)、99.27%(1.17%)、97.05%(0.58%)、99.84%(1.19%)、97.89%(0.95%)、98.78%(1.13%)。结论该方法可用于消痰益康(糖浆)的含量测定及质量控制。

消痰益康(糖浆)；原儿茶醛；儿茶素；表儿茶素；金丝桃苷；槲皮素；杜鹃素；波长切换法；中成药；多成分测定

0 引言

消痰益康(糖浆)收载于《卫生部颁药品标准》中药成方制剂第九册，是由枸杞子、满山红、人参叶、黄芪炙等4味中药材加工而成，具有祛痰、止咳平喘、补阳益气的功效，临床应用于久咳及慢性气管炎、肺心病的治疗，临床需求量大。消痰益康(糖浆)标准仅规定了性状、理化鉴别、乙醇量及相对密度的测定，对处方中4味中药材的任何成分均未进行定量测定[1]。王辉等[2]采用分光光度法对该制剂中总黄酮含量进行了测定。目前，尚未检索到对该制剂多成分进行定量测定的文献报道，而单一成分难以控制复方制剂的质量。为更好地控制消痰益康(糖浆)的质量，笔者采用HPLC梯度洗脱法同时测定消痰益康(糖浆)主要药味枸杞子中的原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素，以及满山红[3]中的金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素，对质量标准的完善提供了实验依据，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200系列四元梯度泵高效液相色谱仪(在线真空脱气装置、四元梯度泵、自动进样器、柱恒温箱、可变波长检测器，美国安捷伦公司)；METTLER TOLEDO分析电子天平(瑞士METTLER TOLEDO公司，十万分之一)。

1.2 试药与试剂 消痰益康(糖浆)(规格：每瓶装100 mL，批号：201509002、201602001、201603004)来源于葵花药业集团(佳木斯)有限公司；原儿茶醛对照品(批号：110810-201608，含量：99.3%)、儿茶素对照品(批号：110877-201604，含量：99.2%)、表儿茶素对照品(批号：110878-200102，含量：100.0%)、金丝桃苷对照品(批号：111521-201507，含量：94.3%)、槲皮素对照品(批号：100081-201610，含量：98.6%)和杜鹃素对照品(批号：110850-201605，含量：100.0%)来源于中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 分别精密称取各对照品适量，用甲醇分别制成原儿茶醛1.458 mg/mL、儿茶素0.510 mg/mL、表儿茶素2.752 mg/mL、金丝桃苷1.294 mg/mL、槲皮素0.532 mg/mL、杜鹃素0.776 mg/mL单一成分对照品储备溶液。再分别量取各对照品储备液适量，用甲醇制成含原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素质量浓度分别为0.072 9、0.010 2、0.137 6、0.064 7、0.026 6、0.038 8 mg/mL的混合对照品溶液，作为消痰益康(糖浆)对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密量取消痰益康(糖浆)4.0 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，振摇均匀，过滤，取续滤液作为消痰益康(糖浆)供试品溶液。

2.1.3 阴性样品溶液的制备 根据消痰益康(糖浆)质量标准中载明的处方和制备工艺，分别制备缺枸杞子阴性样品和缺满山红阴性样品，再按消痰益康(糖浆)供试品溶液制备方法制成枸杞子阴性样品溶液和满山红阴性样品溶液。

2.2 色谱条件 采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；以甲醇-0.04%冰醋酸溶液为流动相，按表1的比例梯度洗脱；0～28 min时在280 nm[4]波长下检测原儿茶醛、儿茶素和表儿茶素，28～40 min时在360 nm[5-6]波长下检测金丝桃苷和槲皮素，40～55 min时在299 nm[5-7]波长下检测杜鹃素；流速：0.9 mL/min；柱温：30 ℃。

表1 梯度洗脱程序

2.3 系统适用性与专属性试验 精密吸取“2.1.1”、“2.1.2”和“2.1.3”项下的溶液各适量，按照“2.2”项下色谱条件依法检测，结果在与原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素对照品色谱图相应的保留时间处，供试品溶液色谱图中有原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素的吸收峰，而阴性样品色谱图中未显示对应的吸收峰，说明阴性无干扰，且各峰之间分离度>1.5。色谱图见图1。

2.4 标准曲线的制备 分别精密吸取对照品储备溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，将其置于6个20 mL量瓶中并用甲醇稀释至刻度，制成6个系列浓度的混合对照品溶液，依法进行测定，采用原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素质量浓度x作为横坐标，测得的峰面积y作为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程见表2。

图1 消痰益康(糖浆)色谱图

注：A.对照品溶液，B.样品溶液，C.枸杞子阴性样品溶液，D.满山红阴性样品溶液；1.原儿茶醛，2.儿茶素，3.表儿茶素，4.金丝桃苷，5.槲皮素，6.杜鹃素

2.5 混合对照品精密度试验 取“2.1.1”项下的混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，结果原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素峰面积的RSD(n=6)分别为1.13%、0.75%、1.02%、0.97%、1.35%、0.82%。

2.6 重复性试验 取批号为201509002的消痰益康(糖浆)6份，按“2.1.2”项方法制备供试品溶液，依法测定，分别计算原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素的含量，并计算所测6个组分含量的RSD，结果所测组分的RSD依次为1.42%、0.95%、1.13%、0.77%、0.39%、1.45%。

2.7 稳定性试验 取批号为201509002的消痰益康(糖浆)供试品溶液，按照上述方法和条件进行分析，分别在0、2、4、6、8、10、12 h测定样品中原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素的峰面积值，结果显示,消痰益康(糖浆)供试品溶液在室温下12 h内稳定，RSD分别为0.98%、1.53%、0.85%、1.27%、1.46%、1.33%。

2.8 加样回收率试验 取批号为201509002的消痰益康(糖浆)9份，各精密量取2.0 mL，分别置不同的25 mL量瓶中，依次精密加入对照品溶液(原儿茶醛0.514 mg/mL、儿茶素0.115 mg/mL、表儿茶素0.892 mg/mL、金丝桃苷0.483 mg/mL、槲皮素0.289 mg/mL、杜鹃素0.471 mg/mL)各适量，使对照品加入量与所取供试品中待测定成分之比控制在0.5∶1、1∶1、1.5∶1(各3份)，再按“2.1.2”项方法制备消痰益康(糖浆)加样回收样品溶液，依法测定，计算这6个组分的回收率及RSD，结果见表3。

2.9 样品测定 取3批消痰益康(糖浆)，按“2.1.2”项方法制备消痰益康(糖浆)供试品溶液，依法测定原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素的含量，结果见表4。

3 讨论

3.1 流动相的选择 分别考察了甲醇-水流动相体系[3]、乙腈-水流动相体系，结果显示,甲醇-水系统优于乙腈-水系统，但个别组分的分离效果欠佳，在此基础上又分别考察了甲醇-0.2%磷酸溶液流动相体系[5,7]、甲醇-0.04%冰醋酸溶液流动相体系[4]，最终采用甲醇-0.04%冰醋酸溶液作为流动相,按照表1规定的程序进行洗脱，此时色谱图基线平稳，所测6个成分原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素均能达到有效分离，峰形对称。

表3 原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素回收率

表4 含量测定结果(mg/mL)

3.2 波长的确定 通过对原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素对照品储备液的紫外光谱全波长扫描，选择了各自的最大吸收波长作为高效液相的检测波长，在280 nm波长下检测原儿茶醛、儿茶素和表儿茶素，在360 nm波长下检测金丝桃苷和槲皮素，在299 nm波长下检测杜鹃素，同时采用波长切换方法，能够很好地达到实验目的。

本文建立了HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定消痰益康(糖浆)中原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素6个成分的含量，方法操作简单，重现性好，可以作为控制和评价消痰益康(糖浆)质量的方法。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部颁药品标准(中药成方制剂第九册)[S].北京:人民卫生出版社,1994:162.

[2] 王辉,史春胜,孙绍臣.消痰益康中总黄酮的含量测定[J].黑龙江医药,1995,8(2):333-334.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:249,361-362.

[4] 谭亮，董琦,肖远灿,等.RP-HPLC法同时测定枸杞子中5个酚酸类成分的含量[J].药物分析杂志,2013,33(3):376-381,394.

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[6] 徐楠,翟红伟,潘晓鹃,等.HPLC法测定满山红提取物中多个黄酮成分总量[J].四川中医,2015,33(3):82-85.

[7] 张朝绅,张振秋.HPLC 波长切换法测定满山红中杜鹃素和槲皮素的含量[J].中国实用医药,2008,3(3):59-60.

ZX09J13109-03B)

SimultaneousdeterminationofsixcomponentsinXiaotanYikangsyrupbyHPLCswitchingwavelengthmethod

WANG Hua

(Department of Pharmacy,the People′s Liberation Army Tianjin Sanatorium,Tianjin 300191,China)

ObjectiveTo establish a method for the simultaneous determination of the multiple components in Xiaotan Yikang syrup.MethodsThe contents of protocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin,hyperoside,quercetin and farrerol were determined by HPLC gradient elution method.The Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) chromatographic column was adopted;the mobile phase consisted of A (methanol) and B (0.04% glacial acetic acid solution) with the column temperature being 30 ℃ and gradient elution;UV detection wavelength was set at 280 nm [protocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin],360 nm(hyperoside,quercetin) and 299 nm(farrerol) with the flow rate of 0.9 mL/min.ResultsProtocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin,hyperoside,quercetin and farrerol,within the scope of 7.290～145.8,2.550～51.00,13.76～275.2,6.470～129.4,2.660～53.20 and 3.880～77.60 μg/mL,had a good linear relationship,respectively.The average recoveries and the correspondingRSDwere 98.68%(1.35%),99.27%(1.17%),97.05%(0.58%),99.84%(1.19%),97.89%(0.95%) and 98.78%(1.13%),respectively.ConclusionThis method can be used for content determination and quality control of Xiaotan Yikang syrup.

Xiaotan Yikang Syrup;Protocatechuic aldehyde;(+)-catechin;Epicatechin;Hyperoside;Quercetin;Farrerol;Wavelength switching method;Chinese patent drug;Multicomponent determination

2017-03-15

解放军天津疗养院药剂科,天津 300191

10.14053/j.cnki.ppcr.201709021

收稿日期：2016-12-28

作者单位：沈阳军区总医院药剂科，沈阳 110016

提高寒区军事作业能力-抗寒外用制剂的研制(2013-