侵袭性葡萄胎患者外周血中TNF、DC、NIH、ET-1、leptin表达情况及其临床意义

王 兰，严丽梅

侵袭性葡萄胎患者外周血中TNF、DC、NIH、ET-1、leptin表达情况及其临床意义

王 兰，严丽梅

目的研究侵袭性葡萄胎患者外周血中TNF、DC、NIH、ET-1、leptin表达情况及其表达水平在临床中的意义。方法选取2013年5月至2016年7月于我院妇产科就诊的46例侵袭性葡萄胎患者作为治疗组，同期45例健康妇女作为对照组。比较治疗组患者化疗前后及对照组患者外周血TNF、DC、NIH、ET-1、leptin水平。结果治疗组化疗前血浆TNF、INH、ET-1、leptin水平明显高于对照组，血浆DC计数明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。化疗后,治疗组血浆INH、ET-1、leptin水平明显低于化疗前，但仍显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；血浆DC计数低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。化疗后12个月内，有3例患者复发，与对照组比较，未复发组患者的TNF水平、DC计数差异无统计学意义(P>0.05)，而复发组DC计数明显低于未复发组(P<0.05)，复发组DC计数明显低于对照组(P<0.05)。DC、INH、ET-1、leptin水平相关性分析发现，侵袭性葡萄胎与DC、INH、ET-1、leptin水平呈正相关(P<0.05)。结论侵袭性葡萄胎化疗前后血浆DC、INH、ET-1、leptin水平的检测对患者病情的评估、预后预测等有重要意义。

侵袭性葡萄胎；化疗；肿瘤坏死因子；树突状细胞；抑制素；瘦素；内皮素-1

0 引言

侵袭性葡萄胎是指子宫以外或子宫肌层内出现葡萄胎组织。主要在葡萄胎清除后6个月内发生，不规则阴道出血是其主要的临床表现。约1%～5%的部分性葡萄胎和18%～29%的完全性葡萄胎会进展为妊娠滋养细胞肿瘤(Gestational trophoblastic neoplasia,GTN)。作为一种多肽细胞因子，肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，TNF)是由单核-巨噬细胞产生的，在多种疾病的病理生理过程中均发挥重要的作用。树突状细胞(Dendritic cell，DC)与肿瘤发生发展密切相关，是体内已知的专职免疫抗原提呈细胞。抑制素(Inhibin，NIH)与滋养细胞浸润、分化和增殖、胎盘细胞增生密切相关。内皮素-1(Endothelin-1，ET-1)是内源性物质中血管收缩功能最强的一种，是一种缩血管多肽，其由血管内皮细胞分泌[1-2]。瘦素(Leptin)是螺旋细胞因子家族的成员，是脂肪细胞肥胖基因的产物，是最早发现的脂肪因子。研究表明，TNF、DC、NIH、ET-1、leptin与肿瘤疗效、预后密切相关[3-5]。本研究对侵袭性葡萄胎患者进行血清TNF、DC、NIH及血浆ET-1、leptin检测，并分析其表达情况与临床疗效、预后的关系。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究选取2013年5月至2016年7月于我院妇产科就诊的46例侵袭性葡萄胎确诊患者作为治疗组。所有患者均经病史询问，X线、B超、β-HCG等检查确诊。所有患者均为低危型。同时选择45例同期健康妇女作为对照组。并排除慢性免疫性疾病、重要脏器(心、肺、肝、肾等)疾患和合并其他肿瘤患者。所有患者血常规及肝、肾功能正常。两组患者的年龄、产次、身高、体重等指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

1.2 实验方法

1.2.1 化疗方案 46例侵袭性葡萄胎患者化疗方案主要采用单药化疗为主，放线菌素D，500 μg/d，1个疗程为5 d，疗程间隔为9 d；或氟尿嘧啶28～30 mg/(kg·d),1个疗程为8～10 d，疗程间隔为12～14 d。如骨髓抑制出现Ⅱ度以上时，则皮下注射3～5 μg/kg的粒细胞集落刺激因子(Granulocyte colony stimulating factor，G-CSF)直至WBC≥10×109/L，患者血清HCG<2.9 U/L则继续巩固治疗1～3个疗程后停止化疗。如单药化疗出现耐药者，则给予联合方案化疗或更换另一种单药方案。

1.2.2 检测方法和测定时间 测定时间：研究者均在化疗前和化疗全部疗程后进行测定，复发患者在复发时测定。TNF测定：采用放射免疫分析法进行TNF测定。外周血DC计数：采空腹清晨静脉外周血3 mL分离DC，加3 mL Ficoll液入每份血标本，第2层血细胞的收集在血标本2 000 r/min离心后，加DHK液入血标本后反复离心10 min，速度1 000 r/min，WBC纯化后，标本加入RPMI-1640液至2 mL，再将不同梯度浓度的Percoll液离心25 min，离心速度1 700 r/min，取35%～45%之间层，用DHK反复稀释、离心，将细胞浓度调整为2×106/mL，培养箱中培养36 h后，收集细胞，细胞沉淀物中加入人IgG 10 mg/mL，用PBS冲洗，冲洗后的非黏附细胞即为DC，将DC经Panning数次纯化后，镜下计数DC数目，进一步计算血DC计数。血清NIH测定：采用ELISA法进行检测，由深圳晶美生物技术有限公司提供试剂，按说明书操作。血浆ET-1、leptin测定：采用放射免疫法进行检测，由北方免疫试剂研究所提供试剂，按说明书操作。随访情况:对所有患者采用电话及门诊随访的方式随访至2016年12月。

2 结果

2.1 治疗结果 46例侵袭性葡萄胎患者中有41例患者单药治疗有效，5例患者更换另一种单药化疗有效，3例患者复发。

2.2 两组患者化疗前后血清各项指标比较 化疗前治疗组血清TNF、INH及血浆ET-1、leptin水平明显高于对照组(P<0.05)；血浆DC计数明显低于对照组(P<0.05)。化疗后INH、ET-1、leptin水平明显低于化疗前，但仍显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，化疗后血浆DC计数低于对照组(P<0.05)。见表2。

2.3 化疗后6个月TNF水平和DC计数比较 化疗后6个月，有3例患者出现复发，与对照组比较，未复发组患者的TNF水平、DC计数差异无统计学意义(P>0.05)。复发组DC计数明显低于未复发组和对照组(P<0.05)。见表3。

表1 两组一般资料比较

表2 两组化疗前后血清TNF、DC、INH，血浆ET-1和leptin水平比较

注：*与对照组比较，P<0.05，#与化疗前比较，P<0.05

表3 化疗后6个月TNF水平和DC计数比较

2.4 相关性分析 侵袭性葡萄胎患者化疗前后进行DC、INH、ET-1、leptin水平相关性分析，结果呈正相关(r=0.568 1、0.685 5、0.623 8，P<0.05)。

3 讨论

抗肿瘤中细胞免疫起了非常重要的作用，肿瘤细胞的发生发展与细胞免疫应答触发阶段低下有关[3]。有效的抗肿瘤免疫主要通过诱导T辅助细胞(Th1)的反应进行。DCs是体内最强的抗原呈递细胞，与肿瘤的关系密切。人体肿瘤微环境中，DCs的数量、功能与肿瘤的预后呈正相关，可刺激特定的肿瘤相关抗原的免疫反应[4]。本研究结果表明，侵袭性葡萄胎患者化疗前及复发后血中DC水平低于对照组，提示侵袭性葡萄胎患者体内监控肿瘤的免疫功能低下[5]，且此类患者易出现化疗耐受或肿瘤复发[6]。本研究结果显示，化疗后血DC计数较化疗前增多，说明化疗可恢复一定的机体监控免疫功能，且能杀灭肿瘤细胞。

TNF是一种抗肿瘤坏死因子，参与机体免疫病理损伤。本研究发现，患者血清TNF水平化疗前升高，化疗后降低，表明TNF参与了滋养细胞肿瘤的发生发展，而化疗清除和杀灭肿瘤细胞，使肿瘤因素刺激体内血清中的单核-巨噬细胞产生的TNF明显下降，保持整个化疗期间的低水平状态[7]。

本研究结果表明，侵袭性葡萄胎患者血清INH水平在化疗前明显高于对照组，化疗后明显降低，但高于对照组。这可能是因为INH主要由滋养层中的滋养细胞合成，滋养细胞肿瘤中滋养细胞过度增生，从而使INH合成明显增加。正常人体内INH是由卵巢颗粒细胞产生。多项研究提示INH与肿瘤发生发展密切相关。因此，INH是监测滋养细胞肿瘤的良好指标。 本研究发现，化疗前后侵袭性葡萄胎患者血清ET-1水平明显高于对照组，且化疗后血清ET-1水平明显低于化疗前。这可能与ET-1病理状态下大量产生释放有关。研究发现，ET-1蛋白水平在多种恶性肿瘤中升高，其具有促进血管生成及细胞增殖、浸润的作用。一项关于卵巢癌的研究显示，ET-1可以增强卵巢癌的侵袭性和转移[8]。化疗前患者血清ET-1升高符合滋养细胞肿瘤是一种具有丰富血管及强侵袭性的肿瘤的特点，ET-1在其侵袭和转移的过程中可能发挥了重要的作用。而治疗结束后ET-1水平明显降低，也与肿瘤受到控制相关，说明血清ET-1水平可作为病情监控的指标[9]。而治疗后ET-1水平仍明显高于正常人，可能是由于患者治疗结束后，体内病灶仍未完全消失所致。

leptin在生物体中具有广泛的生物学功能，除了在动物体肥胖与消瘦过程中起作用外，还与肿瘤的发生和发展密切相关。本研究结果显示，血浆leptin水平在化疗前的侵袭性葡萄胎患者中显著高于对照组。这可能与其在肿瘤组织中促进细胞增殖与分化、增加细胞侵袭性、调节机体免疫反应及促进血管形成等功能密切相关。leptin在乳腺癌和胃癌患者血浆内水平升高[10-11]。本研究结果表明，化疗后leptin虽然显著降低，但仍高于对照组。这可能是由于治疗结束时患者体内病灶未完全消失及免疫功能未完全恢复。leptin可能与滋养细胞肿瘤的发生发展密切相关。动态观察侵袭性葡萄胎患者血浆leptin水平，可监控疾病的变化及转归，具有较高的临床价值。

本研究中相关性分析发现，侵袭性葡萄胎患者血浆DC、INH、ET-1、leptin水平呈显著正相关。可能的原因是肿瘤患者免疫功能低下，体内INH、ET-1、leptin水平均对免疫系统有调节作用。因此，体内多种因素改变并影响免疫系统正常工作可能是肿瘤发生发展的重要原因。

综上所述，协同监测侵袭性葡萄胎患者血浆DC、INH、ET-1、TNF和leptin水平，有助于对病情进行评估及预后预测。

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ExpressionofTNF,DC,NIH,ET-1andleptininperipheralbloodofpatientswithinvasivehydatidiformmoleanditsclinicalsignificance

WANG Lan,YAN Li-mei

(Department of Gynecology & Obstetrics,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

ObjectiveTo study the expression of TNF,DC,NIH,ET-1 and leptin in the peripheral blood of invasive hydatidiform mole patients and its clinical significance.MethodsForty-six patients with invasive hydatidiform mole treated in our hospital from May 2013 to July 2016 were selected as the treatment group,and forty-five healthy women of the same period as control group.The levels of TNF,DC,NIH,ET-1 and leptin in peripheral blood of patients before and after chemotherapy were compared between the two groups.ResultsBefore treatment,the serum levels of TNF,INH,plasma ET-1 and leptin in treatment group were significantly higher than those in control group (P<0.05),and the plasma DC count was significantly lower than that of control group,the difference being statistically significant (P<0.05).Plasma INH,ET-1 and leptin levels were significantly lower after chemotherapy than before chemotherapy,but still significantly higher than control group,and the difference was statistically significant (P<0.05);plasma DC counts after chemotherapy were still lower than that of control group,and the difference was statistically significant (P<0.05).Within 12 months after chemotherapy,3 patients relapsed.Compared with control group,TNF level and DC count of no-relapse patients showed no significant difference (P>0.05),and the count of DC of recurrence group was significantly lower than that of non-recurrence group (P<0.05),DC count of the recurrence group significantly lower than control group (P<0.05).The correlation analysis of DC,INH,ET-1 and leptin showed that invasive hydatidiform mole was positively related to DC,INH,ET-1 and leptin levels (P<0.05).ConclusionDetection of plasma DC,INH,ET-1 and leptin levels in invasive hydatidiform mole before and after chemotherapy is important for the evaluation of disease and prognosis.

Invasive hydatidiform mole;Chemotherapy;Tumor necrosis factor;Dendritic cells;Statin; Leptin;Endothelin-1

2017-03-24

中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳 110004

国家自然科学基金(81602304)

10.14053/j.cnki.ppcr.201709009