HPLC法测定口腔溃疡膜中氢化可的松的含量

孙宇

摘 要：目的：对口腔溃疡膜里面具有的松含量手段进行了检测。方法：实验人员利用高效液相色谱法来对口腔溃疡膜里面具有的松含量进行检测的，色谱柱是SinochromODS-BP柱，流动相作为乙腈-水（50∶50），检测波长设置为245nm，产生的流速是1.0mL·min-1的范围，进样量控制在10μL左右。结果：氢化可存在的松进样量控制在0.2092～1.5690μg的范围里面都会和锋面面积分值处于良好的状态（r=0.9999）；在高处的回收率是102.8%（RSD=1.59%）、在中处得到的回收率是102.4%（RSD=1.35%）、低处得到的回收率是102.9%（RSD=0.77%）。结论：实验人员采取该方法有着诸多的优势，例如操作简单、得到的结果具有准确性等，值得大力的推广。

关键词：高效液相色谱法；口腔溃疡膜；氢化可的松；含量测定

通常情况下，氢化可的松属于激素类药物之一，有着诸多的优点，例如起到抗炎的作用，达到抗休克的效果，经常使用到肾上腺皮质功能减退症较为适合，在相关领域得到了普遍的认可。因为口腔溃疡膜在该医院的制剂室中进行制备的，可以实现消炎的目的，达到止痛的效果，对患者存在的口腔溃疡可以起到治疗的作用。该制剂是在1990年期间记载的，其质量标准当中不涵盖含量测量这一项。为了对该制剂的质量做好科学的控制，笔者需要使用了高效液相色谱法（HPLC）来对口腔溃疡膜中氢化可具有的松含量进行检测得到几点结论，现报告如下。

1 试验准备和方法

1.1 仪器与试药

600HPLC系统、2996二极管阵列检测器、717plus自动进样器、Empower数据管理系统；十万分之一电子天平；万分之一电子天平；超声波清洗仪；超纯水器。

氢化可的松对照品；口腔溃疡膜；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱：SinochromODS-BP柱（250mm×4.6mm，5um）；流动相：乙腈-水（50∶50）；检测波长：245nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；进样量：10μL。

1.3 溶液的制备

1.3.1 对照品溶液的制备

精密称取氢化可的松对照品52.3mg，置于100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成氢化可的松对照品贮备液（氢化可的松浓度为0.5230mg·mL-1）。精密量取对照品贮备液5mL，置于25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成氢化可的松对照品供试液（氢化可的松浓度为0.1046mg·mL-1）。

1.3.2 供试品溶液的制备

取口腔溃疡膜5片（约相当于氢化可的松9.25mg），置于100mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理30min，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（氢化可的松浓度为0.0925mg·mL-1）。

1.3.3 线性关系考察

取氢化可的松对照品溶液（0.1046mg·mL-1），经针头过滤器过滤后进样，在软件内设置使自动进样器将样品按2、4、8、10、12、15？滋L的体积依次进样，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，氢化可的松对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，拟合回归方程，得A=2.70×106X+1.67×104，r=0.999964。结果表明，氢化可的松进样量在0.2092～1.5690μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

1.4 精密度试验

取氢化可的松对照品溶液（0.1046mg·mL-1）进样，每次进样10μL，重复进样6次。结果，RSD=0.30%，说明精密度良好。

1.5 重复性试验

取同一批样品（批号：20100412）适量，共6份，按拟定的含量测定方法制备供试品溶液，按“1.2”项下方法测定供试品溶液和对照品溶液的峰面积，计算氢化可的松的含量。结果，样品中氢化可的松的平均标示百分含量为101.2%，RSD=1.77%（n=6），表明本法重复性良好。

1.6 样品含量测定

实验人员取一定数量的口腔溃疡膜，并依据1.3.2中采取的方法对溶液进行制备，并依据1.1中的方法来对以下两种溶液进行提取：一种是供试品溶液；另一种是对照品溶液，实验人员需要将这两种溶液注入到HPLC中，对得到的色谱图进行认真记载，并将含量计算出来。得到的结果为：第一批羊皮陪你的含量是106.5%（RSD=0.42%）；第二批样品的含量是107.2%（RSD=0.19%）、第三批样品的含量是91.3%（RSD=0.25%）。

2 结果

取阴性供试品溶液9份，分别精密加入氢化可的松对照品贮备液（0.5230mg·mL-1）4.0、5.0、6.0mL，高、中、低浓度平行3份；按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“1.2”项下方法进样测定，计算回收率，结果见表1。

3 讨论

通过以上内容的论述，可以得到以下几点结论：实验人员在对氢化可的松及其制剂中含有的成分进行检测的时候，主要采取以下几种方法：第一种是紫外分光光度法；第二种是HPLC法。笔者依据相关药典对氢化可的松含量测定手段来看，利用HPLC法对口腔溃疡膜里面含有的氢化可的松数量进行认真的检测有着显著的效果，并且样品在预处理的时候也较为简单。

由于氢化可的松无论是在乙醇当中还是在丙酮当中都处于略溶的状态，但是在水中却保持不变。这个时候笔者依据我国相关药典记载中对氢化可的松含量的测定手段来看，实验人员可以直接使用甲醇当作相应的提取溶媒。通过一系列试验可以得知，甲醇能够将该药品溶解掉，与此同时因为在口腔溃疡膜中存在的大部分物质通过是水溶性基质，实验人员利用甲醇将口腔溃疡膜里面存在的样品氢化可的松含量进行提取的过程中，因为引入的杂质不多，所以会对色谱柱不会带来不利影响。

总而言之，实验人员在对色谱条件及其系统进行相关试验的过程中，需要使用甲醇-水（70∶30）做好相应的试验工作，这个时候发现了在口腔溃疡膜里面含有的基质是和主药氢化可的松处于不分离的状态，这样会在某种程度上导致氢化可的松主峰出现了拖尾的情况。这个时候笔者参考了相关文献资料，将以往的甲醇-水（70∶30）替换成乙腈-水（50∶50）当作相应的流动相，并利用相关系统适用性试验可以清楚的了解到，在试验的环境下基线处于平稳的状态，氢化可的松能够和杂质峰分离度处于良好的状态，产生的杂质对其检测工作不会产生不利影响，并且柱效高，形成的峰形也达到了预期目的。所以实验人員使用乙腈-水（50∶50）当作相关流动相。依据上述论述可以看出，采取该方法有着诸多的优点，例如操作简单、得到的结果具有准确性等，值得大力的推广。

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