盐酸法舒地尔注射液细菌内毒素的方法学验证

刘丽英程延庆

1.哈尔滨乐泰药业有限公司 150000；2.哈尔滨弗曼德生物科技有限公司 150000

盐酸法舒地尔注射液细菌内毒素的方法学验证

刘丽英1程延庆2

1.哈尔滨乐泰药业有限公司 150000；2.哈尔滨弗曼德生物科技有限公司 150000

为了保证盐酸法舒地尔注射液相应细菌内毒素试验检测方法具有良好的专属性以及灵敏性，并且确保相应的检测结果能够具有较高的质量标准依据，特此进行了相关实验研究。

盐酸法；细菌；舒地尔注射液；肉毒素

1.实验材料

鲎试剂：湛江市安度斯生物有限公司生产，批号1005240，规格5ml。

细菌内毒素相应检查用水：批号201070，效价120EU/支，中国药品生物制品检定所生产。

供试品：自制，批号 20110301、20110302、20110303，规格：2ml：30mg。

旋涡混合器：XW-80A型，厂家：上海医大仪器厂。

电热恒温水浴锅：DK-98-Z型，厂家：天津泰斯特仪器有限公司。

2.灵敏度复核

在进行实验的过程中要充分的重视相关操作规范，首先需要把细菌内毒素的相关检查水当做溶剂，对细菌内毒素的相关工作标准品进行相应的溶解操作，在这个过程中为了能够保证这一操作能够具有良好的效果，还需要实验人员能够进行相应的摇匀操作，使得实验药品和实验溶解剂能够完全的融合，在完成了这一操作的基础之后还需要实验人员将这些药剂制成2.0λ规格、1.0λ规格、0.5λ规格、0.25λ规格的细菌内毒素相关的工作标准规格的溶液，在实验室各种实验设备全面的情况下，每次在进行稀释的过程中还需要将溶液放置到漩涡混合器上面进行混合操作，并且还要保证仪器的使用时间在三十秒以上。在后续的施工之中也要充分的遵照各环节的操作规范，一般情况下在使用细菌内毒素相应的检查水作为溶剂，对内毒素进行相应稀释操作的时候会采用以下的稀释流程：120EU+1ml水—→120EU/ml—→2EU/ml—→1.0EU/ml（4λ）—→0.5EU/ml—→0.25EU/ml—→0.125EU/ml—→0.0625EU/ml

为了使实验的结果能够具有较强的说服力以及科学性，本次实验在进行检验的过程中采用对照试验的实验方式，并且同时设置了四组对照实验组，在每个实验室管之都放滴入了零点一毫升的内毒素标准规格的溶液。与此同时，还要使用内毒素相应的检查水制作出两支阴性的对照试验试试管。为了保证药品能够完全的融合，还需要在完成融合之后，将试管进行轻微的摇晃混匀。另外，还需要在试管的端口处使用相应的封口材料对试管口进行封口操作，之后将处理完毕的试管以垂直的角度，逐渐的放入到水温为三十六摄氏度到三十八摄氏度之间的温水中，维持这一温度状态五十八摄氏度到六十二摄氏度之间之后进行相应的观察工作，实验的详细结果记录如表.

表1 鲎试剂灵敏度复核结果（0.25EU/ml）

结果：根据公式λc=lg-1（∑X/4），计算出λc=0.210 EU/ml，λ c在0.5λ～2.0λ范围内。因此该批号的鲎试剂灵敏度符合要求。

表2 鲎试剂灵敏度复核结果（0.125EU/ml）

结果：根据公式λc=lg-1（∑X/4），计算出λc=0.105 EU/ml。λ c在0.5λ～2.0λ范围内。

3.限度的确定

采用公式 L＝K/M（M：以成人每公斤体重每小时给药的最大剂量来计算），本品为注射剂，根据用法用量，成人一日2～3次，每次30mg，以 50～100ml的生理盐水或葡萄糖注射液稀释后静脉滴注，每次静滴时间约为30分钟，注射时间不足1小时，按1小时计算。

按最大静滴量100ml/小时计算，中国人平均体重60kg计算，则M＝100÷60÷1=1.67ml/kg/h，故本品的细菌内毒素的理论限值：L＝5÷1.67=3 Eu/ml。

4.预干扰试验

4.1 供试品溶液的制备

以鲎试剂灵敏度0.125Eu/ml为基准，按MVD＝LC/λ＝0.5/0.125＝4倍（C按1.0ml/ml计算），当灵敏度为λ=0.25EU/ml时，供试品溶液的最大稀释倍数为：2倍。

4.2 含供试品及内毒素混合溶液的制备

鲎试剂灵敏度为 0.25EU/ml：取供试品溶液 0.1ml与 1.0 EU/ml内毒素溶液0.1ml以1：1比例混合；依此方法依次制成供试品稀释倍数为1、2、4、8分别与1.0EU/ml内毒素1：1的混合溶液作为供试品阳性对照溶液。

鲎试剂灵敏度为0.125EU/ml：取供试品溶液0.1ml与0.5 EU/ml内毒素溶液0.1ml以1：1比例混合；依此方法依次制成供试品稀释倍数为1、2、4、8分别与0.5EU/ml内毒素1：1的混合溶液作为供试品阳性对照溶液。

5.干扰实验的分析研究

为了保证对干扰实验的相关研究的准确性，本次试验采用二零一零年版本的中国药典记录中附录所记载的实验方式，对细菌内毒素相应的检查法实施了干扰实验。选λ=0.125EU/ml和λ=0.25EU/ml鲎试剂。将细菌内毒素工作标准品分别用细菌内毒素检查用水稀释至4λ、2λ、1λ、0.5λ内毒素标准对照溶液（Es）。分取细菌内毒素系列浓度分别与供试品溶液（稀释倍数分别为4倍、2倍）按1：1的比例混合制成 2λ、1λ、0.5λ、0.25λ的含内毒素的供试品溶液（Et），并同时进行阴性对照及阳性对照，37℃±1℃保温1小时，结果见表3以及表4。

供试品稀释过程：1支供试品（2ml：30mg）—→15mg/ml—→7.5mg/ml

内毒素溶液的稀释浓度：120EU+1ml水—→120 EU/ml—→2.0EU/ml—→1.0EU/ml—→0.5EU/ml—→0.25EU/ml—→0.125EU/ml

表3 干扰试验结果（鲎试剂：湛江安度斯生物制品厂0.125EU/ml）

结果：ES在 0.5λ-2λ范围内，且 Et也在 0.5ES-2λES之间，说明供试品稀释4倍对检测没有干扰。

表4 干扰试验结果（鲎试剂：湛江安度斯生物制品厂0.25EU/ml）

结果：ES在 0.5λ-2λ范围内，且 Et也在 0.5ES-2λES之间，说明供试品稀释2倍对检测没有干扰。

6.样品的检查

依法检查（中国药典2010年版二部附录XI E），观察并记录结果，结果见表5

表5 三批样品细菌内毒素测定结果

7.结束语

本次实验数据研究结果能够看出，本品的细菌内毒素试验检测方法具有良好的专属性以及灵敏性，因此本法可作为盐酸法舒地尔注射液细菌内毒素的检测方法。

[1] 孙菊元，顾炳仁.细菌内毒素检查法检测注射用盐酸大观霉素中细菌内毒素的研究[J].海峡药学.1999（04）

[2] 张灿，刘文君，张明露，田芳，杨毅，安代志.水中细菌内毒素污染特性及检测方法研究进展[J].环境科学.2014（04）

[3] 吴鑫，吴向群，周志良，朱碧君.盐酸异丙嗪注射液细菌内毒素检验[J].齐鲁药事.2012（05）

R111.3

A

1672-5018（2017）02-020-1