测定阿莫西林胶囊中的有效成分

孙晓磊

哈药集团制药总厂 150000

测定阿莫西林胶囊中的有效成分

孙晓磊

哈药集团制药总厂 150000

目的：探讨测定阿莫西林胶囊有效成分的最佳测定方法，为更好的改进阿莫西林胶囊工艺提供参考。方法：采用AgilentC18柱（250mm×4.6mm，5μm），以十八烷基键合硅胶为固定相，0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用2mol·L-1氢氧化钾溶液调节pH值至5.0）（A）-乙氰（B）（97.5∶2.5，V/V）为流动相。流速为1.0mL·m in-1，柱温为25℃，检测波长为254nm，进样量为10μL。结果：回归方程为y= 5.27x+ 2.83，r= 0.9995（n= 6），线性范围20—500μg·mL-1，RSD为3.97%，样品中阿莫西林含量为821.3mg /g。结论：利用高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊的有效成分具有更简单灵敏的测定特点，且准确率高，重现性好，因此非常适合在制备和生产阿莫西林胶囊时使用，以此来更好的控制产品质量。

高效液相色谱法；阿莫西林；胶囊；有效成分；测定

作为西药抗生素中最常见的一种，阿莫西林已经被人们广泛接受，其在消炎抗菌方面有着广谱性特点，药效快，价格低。从西药学上将，阿莫西林属于半合成的青霉素，其主要的药理作用是利用干扰细胞壁的合成来达到控制细菌繁衍传播的效果。胶囊是阿莫西林最常见的药品制剂，为了更好的掌握阿莫西林胶囊的功效，必须要更好的掌握胶囊的有效成分及含量，只有这样，才能保证产品的品质，维护广大患者的切身利益。目前国内外对阿莫西林含量测定方法主要有紫外光分光光度法、原子吸收光谱法、漫反射红外光谱法等。本文选择高效液相色谱法（HPLC）对市售的阿莫西林胶囊中有效成分进行测定。此方法适用于阿莫西林原料药及其各种制剂的含量分析，具有操作方便简单、灵敏度高、快速、准确性和重现性好等优点。

1、试剂与仪器

阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，纯度 85.8%）；乙腈（色谱纯，上海国药集团有限公司）；磷酸二氢钾（分析纯，天津市致远化学试剂有限公司）；氢氧化钾（分析纯，上海化学试剂有限公司）。实验用水为超纯水。

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），包括G1322A真空脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1330B柱温箱、G1315B VWD检测器、Agilent 1200 Chemstation化学工作站。

2、色谱分析条件

AgilentC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用2mol·L-1氢氧化钾溶液调节pH值至5.0）（A）-乙氰（B）（97.5∶2.5，V/V）；检测波长：254nm；流速：1.0mL·m in-1；柱温：25℃；进样量：10μL；保留时间：3.9m in。此色谱条件下，阿莫西林对照品和供试品的高效液相色谱图分别见图1和图2。

图1 阿莫西林对照品的色谱图

图2 阿莫西林胶囊的色谱图

3、溶液的配制

23.1 对照品溶液的配制

准确称取阿莫西林对照品29.2mg，用流动相超声溶解，置于50m l容量瓶中，再用流动相定容至刻度，配制成浓度为0.5mg·mL-1的对照品溶液，混合均匀后备用。

3.2 供试品溶液的配制

准确称取市售阿莫西林胶囊内容物 29.2mg，用流动相溶解并定容到50m l容量瓶中。充分混匀后，先用超声脱气，再用0.45μm针头滤膜过滤后备用。

4、结果

4.1 线性相关性

从 0.5mg·mL-1的对照品溶液中分别取 2、5、10、25、50mL用流动相定容至50mL容量瓶中，配制成20、50、100、250、500μ g·mL-1浓度的标准品溶液，摇匀。分别取上述标准品溶液 10μL进样，按照上述色谱条件测定阿莫西林标准品溶液的峰面积（mAU）。以溶液进样量浓度 x（μg·mL-1）为横坐标，其峰面积 y（mAU）为纵坐标，绘制校准曲线图。结果表明，阿莫西林在20—500μg·mL-1范围内与其峰面积呈现良好的线性关系，回归方程为：y= 5.27x+ 2.83，r= 0.9995（n= 6）。

4.2 精密度实验

准确称取阿莫西林对照品，配制成20、40、60、100μg·mL-1的标准溶液，按照上述色谱条件测定，每次进样10μL，每种浓度标准溶液重复进样 6次，测得阿莫西林标准溶液峰面积的 RSD为1.85%，表明此色谱系统精密度良好。

4.3 重现性实验

准确称取同一批号阿莫西林胶囊内容物6份各29.3mg，按照“供试品溶液的制备”规定步骤进行操作，在上述色谱条件下对阿莫西林溶液进行HPLC分析，测得阿莫西林溶液峰面积的RSD为1.3%。说明该方法重现性良好。结果见表1。

表1 方法的重复性实验测定结果

4.4 稳定性实验

准确量取阿莫西林对照品溶液10μL，分别在1、2、3、4、6、10、12、24h在上述色谱条件下进样，记录保留时间和峰面积，其保留时间RSD为0.25%，峰面积RSD为3.87%，结果表明，阿莫西林对照品溶液在配制后12h内比较稳定。

4.5 加标回收性实验

准确移取已知含量的阿莫西林样品溶液 1mL，然后加 50μ g·mL-1的阿莫西林对照品溶液 4mL，混合均匀后，在上述色谱条件下进样10μL，测定并记录其峰面积，计算回收率，其平均回收率为101.98%，RSD为3.97%。

4.6 样品的测定

准确称取阿莫西林胶囊样品3份，每份29.0mg，按“供试品溶液的制备”项下步骤操作，每次进样10μL，测定其峰面积，代入回归方程计算阿莫西林胶囊有效成分的含量，符合相关规定[11]。结果见表2。

表2 样品中阿莫西林有效成分的测定

实验表明，测定阿莫西林样品中有效成分的含量为 821.3mg/g，RSD为0.95%。

5、讨论

5.1 色谱分析条件选择5.1.1 流动相的选择

分别选用不同体积比的磷酸二氢钾溶液：乙氰体系为流动相，分析试样的分离效果。发现0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用2mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.0）∶乙氰为97.5∶2.5时，阿莫西林的出峰时间较短，并且色谱峰的半峰宽较小。

5.1.2 检测波长的选择

将一定浓度的阿莫西林对照品溶液在波长210—380nm范围内使用紫外光谱扫描，结果显示阿莫西林在254nm和272nm处均有最大吸收，但考虑到其他波长下阿莫西林胶囊中所添加的辅料对其半峰宽的影响，故本方法选择254nm为检测波长。

5.1.3 柱温的选择

对柱温的选择方面，分别测定了在 15、20、25、30、35℃柱温时的色谱图，通过比较各种柱温下的色谱图，发现在 25℃的柱温下峰形和半峰宽相对都比较好，因此选择 25℃作为检测阿莫西林有效成分的分析柱温。

5.2 可行性

本文建立检测阿莫西林胶囊有效成分的高效液相分离的最佳条件是：AgilentC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用2mol·L-1氢氧化钾溶液调节pH值至5.0）∶乙氰为97.5∶2.5为流动相，流速为1.0mL·m in-1，柱温为25℃，进样量为10μL，波长为254nm。该方法具有方便简单、灵敏度高、快速、准确性和重现性好等优点，具备很大的可行性。

[1]周长燕，阿莫西林的研究进展，论文网，2012.05.

[2]陈宏，陈友存，程乐华，等.HPLC测定阿莫西林胶囊中的有效成分[J].光谱实验室，2013，30（6）.

[3]王雷，梁颖.HPLC法测定阿莫西林胶囊中阿莫西林的含量[J].天津药学，2000（3）：69-70.

[4]彭中笑，唐洁.HPLC法测定阿莫西林胶囊含量方法的改进[J].中国药事，2008，22（8）：682-683.

R944.5

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1672-5018（2017）02-015-2