MTHFR基因多态性与急性心肌梗死的相关性分析

章志玲 张明 葛郁芝

MTHFR基因多态性与急性心肌梗死的相关性分析

章志玲 张明 葛郁芝

作者单位：330006 江西省南昌市，江西省人民医院二部心内科

目的 探讨同型半胱氨酸（Hcy）浓度及MTHFR基因多态性与急性心肌梗死（AMI）之间的相关性。方法 选取2013年10月至2016年4月在我院就诊的60例AMI患者作为试验组，其中男性37例、女性23例，平均年龄（66.3±10.4）岁。选取同期我院行健康体检者60例作为对照组，其中男性39例、女性21例，平均年龄（68.7±11.1）岁。分别测定两组Hcy浓度、叶酸浓度及MTHFR基因的多态性，分析两组MTHFR基因C677T多态性的分布及Hcy水平。结果 AMI组患者血浆Hcy浓度为（18.74±3.71）μmol/L，明显高于对照组的（10.74±5.11）μmol/L，差异具有统计学意义（P＜0.01）。AMI组患者的叶酸浓度为（4.87±3.16）ng/ml，明显低于对照组的（9.71±2.97）ng/ml（P＜0.01）。叶酸与Hcy浓度之间呈负相关性。AMI组患者的 MTHFR 基因 TT纯合子组的血浆 Hcy浓度为（19.74±3.16）μmol/L，与 CT杂合子（13.68±3.94）μmol/L和CC纯合子（12.41±1.54）μmol/L相比明显增高（P＜0.05）。与健康对照组相比，AMI组TT纯合子的分布频率明显增高（36.67%比16.67%，P＜0.05）；并且AMI组的T等位基因频率明显增高（58.33%比38.33%，P＜0.05）。结论 Hcy的血浆浓度与AMI的发病之间有着密切的联系。MTHFR基因的多态性与AMI易感性密切相关，MTHFR基因T等位基因可能是导致AMI的风险基因突变。

急性心肌梗死； MTHFR基因； 叶酸； 同型半胱氨酸

Wilcken于1976年首先提出高同型半胱氨酸血症是冠心病的一个独立危险因素，以后多项研究均提示血浆同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平升高可以增加冠心病的风险[1,2]。亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）在叶酸代谢中发挥了重要作用。1995年Frosst等[3]确定MTHFR基因在677位点C→T的变异会导致肽链上222位的缬氨酸（Val）被丙氨酸（Ala）替代，并且这个变异会导致MTHFR活性降低。同时研究还发现，携带TT基因型个体血浆Hcy水平会明显升高，而血浆Hcy水平升高可以作为冠心病的独立危险因素。本研究通过检测试验组急性心肌梗死患者MTHFR基因C677T单核苷酸多态性及其对血浆Hcy水平的影响，探讨MTHFR基因C677T多态性与急性心肌梗死之间的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2013年10月至2016年4月在我院就诊的60例AMI患者作为试验组，其中男性 37 例、女性 23 例，年龄 51～76（66.3±10.4）岁。所有患者均行冠状动脉造影检查确诊为急性心肌梗死。选取同期我院行健康体检者60名作为对照组。所有研究对象均收集临床基础资料：性别、年龄、吸烟史、高血压史、糖尿病史、血脂、肌酐、尿酸。排除标准:严重肝肾功能不全、肿瘤、慢性肺源性心脏病、心脏瓣膜病、先天性心脏病。两组人群在年龄、性别比率、吸烟等方面未见统计学差异（P＞0.05），具有可对比性（见表1）。告知两组患者实验目的及试验方法，取得其同意。

表1 两组患者基线资料对比（±s，例）

表1 两组患者基线资料对比（±s，例）

组别 例数 年龄（岁） 性别 吸烟状况 高血压 糖尿病男性 女性 吸烟 不吸烟对照组 60 68.7±11.1 39 21 25 35 40 11 AMI组 60 66.3±10.4 37 23 32 28 49 13

1.2 研究方法 所有患者均于入院次日抽取空腹12 h静脉血2 ml，健康体检者于体检当日抽取空腹12 h静脉血2 ml，置入含乙二胺四乙酸抗凝剂的试管中，用于提取DNA。DNA的提取采用PERMEGER试剂盒，放置于－20℃的冰箱中，集中检测MTHFR基因多态性。同时取静脉血应用高效液相色谱法测定血浆Hcy浓度。采用免疫组化法对血清中叶酸进行检测。MTHFR基因型采用MTHFR（C677T）基因检测试剂盒测定。向全血样本中加入DNA抽提液，使细胞裂解，释放出DNA，将抽提获得的染色体DNA作为模板，采用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术（PCR2RFLP）检测基因表型。

1.3 统计学方法 所有数据均使用SPSS 19.0统计学软件包进行统计学分析。计量资料用±s表示，采用t检验，组间比较采用单因素分析法（ANOVA）进行分析处理；计数资料采用卡方检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血浆Hcy、叶酸浓度对比 AMI组患者血浆Hcy浓度明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.01）；叶酸浓度明显低于对照组（P＜0.01）；叶酸与Hcy浓度水平之间呈负相关性。见表2。

表2 两组血浆Hcy、叶酸浓度对比［±s，例数及百分率（%）］

表2 两组血浆Hcy、叶酸浓度对比［±s，例数及百分率（%）］

注：Hcy：同型半胱氨酸

组别 例数 Hcy（μmol/L） 叶酸（ng/ml） 高Hcy血症对照组 60 10.74±5.11 9.71±2.97 4（6.67）AMI组 60 18.74±3.71 4.87±3.16 24（40.00）t值 14.547 -12.464 27.745 P值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.2 两组基因多态性分析 AMI组的MTHFR基因TT纯合子患者的血浆Hcy水平与CT杂合子和CC纯合子患者相比明显增高（P＜0.05），见表3。与健康对照组相比，AMI组TT纯合子的分布频率明显增高，并且AMI组的T等位基因频率明显增高（P＜0.05）。见表 4。

表3 两组基因型及等位基因频率分布对比［例数及百分率（%）］

3 讨论

同型半胱氨酸（Hcy）为体内的一种含硫氨基酸，由S-腺苷甲硫氨酸（SAM）脱甲基后生成，在人体中有三种Hcy代谢途径[4,5]：①胱硫醚-β-合成酶在维生素B12作为辅酶因子的作用，与丝氨酸经过缩合形成胱硫醚及水，Hcy则在γ-胱硫醚酶的催化作用下分解成半胱氨酸及α-丁酮酸；②在MTHFR与维生素B12共同作用下，通过甲基化转化成为甲硫氨酸；③由甜菜碱提供所需的甲基，并在甜菜碱-Hcy甲基转移酶的催化作用下使Hcy合成为蛋氨酸。在正常机体状态下，Hcy血浆浓度较低，一旦机体中维生素B12、叶酸缺乏，或出现上述酶先天性缺乏时，血浆中Hcy浓度便会增高，出现高Hcy血症。MTHFR为甲硫氨酸代谢中的关键酶。人类的MTHFR基因位于染色体1P36.3上，该基因有十余种变异，其中在677位的碱基C被T取代最常见，产生限制型内切酶识别序列，该变异可以导致丙氨酸被缬氨酸取代，使MTHFR对热不稳定而降低酶活性，从而使Hcy合成甲硫氨酸减少，最终使血Hcy浓度明显增加[6-10]。Li对中国大陆人群MTHFR C677T基因多态性与心血管疾病的相关性进行研究后认为，高Hcy血症及T等位基因均增加冠心病的患病风险[11]。我们的研究结果提示，急性心肌梗死患者中MTHFRC 677T基因型TT型占36.67%，T等位基因的频率为 70%，每组TT基因型的Hcy水平均明显高于CT及CC基因型，而CT及CC基因型之间Hcy水平无明显差异，表明纯合型TT突变对Hcy水平影响较大，MTHFRC677T突变基因TT型对急性心肌梗死有一定的易感性。MTHFR基因C677T位点发生T突变是造成AMI易感性的关键性基因突变。与既往研究的不同之处在于，本研究针对AMI组不同基因型的Hcy水平均做了比较，提示TT型人群Hcy水平明显高于其他基因型，从而提示我们在临床上可以通过补充叶酸降低Hcy水平来预防或降低TT基因型人群的冠心病发病。

表4 MTHFR各基因型与血浆Hcy水平相关性比较（μmol/L，±s）

表4 MTHFR各基因型与血浆Hcy水平相关性比较（μmol/L，±s）

注：与CC型比较，aP＜0.05

CC型 CT型 TT型例数 Hcy 例数 Hcy 例数 Hcy对照组 60 24 7.16±1.09 26 9.74±1.74a 10 13.74±1.49 AMI组 60 12 12.41±1.54 26 13.68±3.94a 22 19.74±3.16组别 例数

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The correlation between gene polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase（MTHFR）and patients with acute myocardial infarction

ZHANG Zhi-ling，ZHANG Ming，GE Yu-zhi.The Second Department of Cardiovascular Medicine，Jiangxi Provincial People′s Hospital，Nanchang 330006，China

Objective To investigate the correlation of plasma homocysteine and gene polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase（MTHFR） with acute myocardial infarction（AMI）.Methods We conducted 60 patients with AMI（37 males，23 females，mean age 66.3 years）and 60 healthy individuals（39 males，21 females，mean age 68.7 years）in our hospital from 10/2013 to 04/2016.MTHFR gene polymorphism，plasma homocysteine（Hcy）concentration，and folate level were measured.Results There was a significant increase in Hcy level among the AMI patients（18.74±3.71）μmol/L as compared to the healthy controls （10.74±5.11）μmol/L（P＜0.05）.However，folate concentrations in AMI patients（4.87±3.16）ng/ml were dramatically lower than those in controls（9.71±2.97）ng/ml.Among AMI patients，Hcy concentration in MTHFR C667 gene homozygosis mutant type（TT type）group was （19.74±3.16）μmol/L，significantly higher than those in heterozygosis mutant type （CT type）（13.68±3.94）μmol/L and wild type（CC type）（12.41±1.54）μmol/L groups.The proportion of TT type in AMI patients（36.67%）was higher than that in controls（16.67%）.Additionally，the frequencies of T allele in AMI patients were also increased.Conclusion Plasma Hcy level is tightly related to the morbidity of AMI.MTHFR gene polymorphism is closely associated with AMI incidence.T allele of MTHFR gene is possibly the key factor to gene mutation in AMI patients.

AMI； MTHR gene polymorphism； Folate； Homocysteine

10.3969/j.issn.1672－5301.2017.09.008

R542.2+2

A

1672-5301（2017）09-0801-03

2016-12-16）