DC－CIK细胞免疫治疗联合化疗对晚期卵巢癌患者疗效及血清CD133、DDX4水平的影响

王 璐 杨文静

江汉大学附属医院妇产科（武汉，430015）

DC－CIK细胞免疫治疗联合化疗对晚期卵巢癌患者疗效及血清CD133、DDX4水平的影响

王 璐 杨文静

江汉大学附属医院妇产科（武汉，430015）

目的：探讨DC－CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌的临床疗效以及对患者血清CD133、DDX4水平的影响。方法：将60例晚期卵巢癌患者随机分为观察组（30例）和对照组（30例），对照组仅接受常规化疗，观察组采用化疗联合DC－CIK细胞免疫治疗。比较两组患者的免疫功能、治疗效果、不良反应以及血清CD133、DDX4水平在治疗前后的变化情况。结果：观察组的客观缓解率（80.0%）高于对照组（50.0%）；在治疗后和6个月随访时观察组CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋以及NK细胞的比值均高于对照组，CD4＋CD25＋、CD133、DDX4水平均低于对照组；且治疗前、治疗后、6个月随访后自身比较CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋、NK细胞比值均明显升高，CD133、DDX4水平均明显降低（均P＜0.05）；治疗后与6个月随访后免疫功能指标两组无差异（P＞0.05），骨髓抑制和肝功能损害的发生率观察组低于对照组（P＜0.05）。结论：应用DC－CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌患者可提高临床治疗效果，增强患者免疫能力，更大幅度降低血清CD133、DDX4水平，减少不良反应的发生，值得临床探索应用。

DC－CIK细胞免疫治疗；化疗；晚期卵巢癌；CD133；DDX4

卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，发病率在世界妇女常见肿瘤中排第6位，目前我国卵巢癌发病率为6.0／10万，但死亡率却居妇科恶性肿瘤首位，严重影响着女性的生命健康及生活质量［1］。卵巢癌的治疗原则仍以手术为主，联合放、化疗，但对于大部分晚期卵巢癌患者，初次肿瘤细胞减灭术难以切除肿瘤灶，放、化疗效果不明显。免疫治疗作为新的治疗手段逐渐得到关注，被认为是唯一有可能治愈癌症的方法［3］。本研究探讨DC－CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌的临床疗效以及对患者血清CD133、DDX4水平的影响，为晚期卵巢癌治疗与决策提供相关的理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2015年1月－2016年1月在本院治疗的晚期卵巢癌患者60例。研究对象纳入标准［4］：经病理学检查确诊并按国际妇产科联盟（FIGO 2004）手术?病理分期标准判定为Ⅳ期卵巢癌；预计生存期大于5个化疗周期；无其他严重的内科疾病；无化疗禁忌证；患者及家属对于随机分组和治疗方案均了解并签署知情同意书。按照数字随机法将所有研究对象随机分为观察组和对照组各30人。观察组年龄46.0±12.1岁，13例淋巴结转移，17例骨转移，15例肝转移；对照组年龄46.2±10.8岁，12例淋巴结转移，19例骨转移，12例肝转移。两组研究对象在年龄、癌细胞转移类型等一般资料的差异不具有统计学意义，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 治疗方法

对照组采用常规TC化疗治疗，即治疗第一天静脉液注紫杉醇175mg／m2和顺铂75mg／m2。观察组采用DC－CIK细胞免疫联合TC化疗治疗［5］：在治疗前一个星期采集每个研究对象的外周血50ml制备DC－CIK细胞，离心后取血浆加入生理盐水稀释，用淋巴细胞分离液分离后收集界面层的单个核细胞，用培养基洗涤后按一定浓度悬浮于培养基中，再添加重组人干扰素?γ后将其置于37℃、50ml／LCO2培养箱中培养。两天后添加Anti－CD3和rhIL－2培养液，每隔3天更换一次培养基，并补充加入rhIL－2培养液，培养1周左右时回输，在TC化疗间歇应用外周血培养的DC－CIK细胞细胞治疗。两组均21天为一个治疗周期，共治疗3个周期，出院后继续随访观察6个月。

1.3 观察指标

①血清CD133、DDX4水平：CD133、DDX4均是肿瘤干细胞标志物之一，在治疗前后分别测试两组患者血清中CD133、DDX4水平并记录比较。②不良反应：在治疗过程中以及治疗后，观察并记录两组患者出现的不良反应情况，主要不良反应包括骨髓抑制、消化道反应、肝功能损害以及周围神经毒性。

1.4 疗效评价［6］

①免疫功能：在治疗前、治疗结束后第7天、随访6个月结束后，分别采集所有研究对象的外周血，并用荧光抗体法检测T细胞亚群，包括CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋、CD4＋CD25＋和NK细胞。②疗效评价标准：6个月随访后，按照实体瘤的疗效评价标准（RECIST）将近期疗效分为4个等级评价，即完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）和进展（PD）。疾病控制率＝CR＋PR＋SD，客观缓解率＝CR＋PR。

1.5 统计学方法

采用SPSS20.0进行统计分析。对年龄等计数资料采用均值±标准差进行描述，t检验进行比较分析；对疗效等分类资料采用构成比、率进行描述，χ2检验进行比较分析。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者近期疗效的比较

随访6个月结束后，观察组中CR 15例，PR 9例，SD 4例，PD 2例，客观缓解率为80.0%（24／30），疾病控制率为93.3%（28／30）；对照组中CR 8例，PR 7例，SD 9例，PD 6例，客观缓解率为50.0%（15／30），疾病控制率为80.0%（24／30）。两组疾病控制率无差异（P＞0.05），客观缓解率观察组高于对照组（P＜0.05）。

2.2 两组患者治疗前后免疫功能以及血清CD133、DDX4水平的比较

在治疗前两组免疫功能无统计学差异（P＞0.05）。在治疗后和6个月随访后，观察组CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋以及NK细胞的比值均高于对照组，CD4＋CD25＋、CD133、DDX4水平均低于对照组（P＜0.05）；且观察组治疗前后及随访后自身比较，CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋、NK细胞比值均明显升高，CD133、DDX4水平均明显降低（P＜0.05），免疫功能指标治疗后与随访后比较无统计学差异（P＞0.05）。见表1。

表1 两组患者不同时期免疫功能以及血清CD133、DDX4水平比较（珚x±s）

2.3 两组患者不良反应发生情况比较

在治疗过程中，两组研究对象均产生了不同的不良反应症状，但均自行缓解或及时给药后缓解。其中观察组骨髓抑制（2例，6.7%）和肝功能损害（3例，10.0%）的发生率低于对照组［12例（40.0%）、15例（50.0%）］（P＜0.05），观察组出现消化道反应（10例，33.3%）和周围神经毒性（5例，16.7%）的几率与对照组14例（46.7%）、6例（20.0%）无差异（P＞0.05）。

3 讨论

卵巢癌通常发病隐匿，且缺乏有效的早期筛查手段，当出现临床症状时大多已是晚期，治疗难以达到理想效果。调查显示卵巢癌5年生存率仅有25%～30%［3］。在传统手术治疗，放、化疗治疗效果不是非常明显的情况下，免疫治疗，尤其是过继免疫治疗中的DC－CIK细胞免疫治疗因取得了良好的治疗效果，而备受关注［7］。

机体抗肿瘤反应主要以细胞免疫为主，不同的T淋巴细胞是主要的效应细胞［8］。人体外周血淋巴细胞中的CD3＋、CD4＋、CD8＋和NK细胞变化是反映人体细胞免疫功能的重要指标，其中CD3＋、CD4＋、CD8＋反映机体特异性细胞免疫功能；NK细胞反映机体非特异性细胞免疫功能。树突状细胞（DC）是一种专职性抗原提呈细胞，它能摄取识别肿瘤相关抗原，并将其传递给T淋巴细胞，诱导T淋巴细胞增值和应答［9］。细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）是增殖能力最强、细胞活性较强的免疫效应细胞，同时具有很强的肿瘤杀伤能力［10］。DC－CIK细胞治疗是将患者自身DC和CIK在体外共同培养，使数量和活性得到提高后回输给患者自身，从而提高机体的肿瘤抗原识别能力和肿瘤杀伤能力，延缓或减少肿瘤复发，提高肿瘤的治愈率和患者生存率［3］。DDX4特异存在于性腺生殖细胞中，在卵巢癌细胞中高度表达；CD133具有与DDX4相似的表达模式，因此在卵巢癌组织中同样高度表达，是肿瘤干细胞的重要标志物之一［1112］。本研究结果显示，采用免疫治疗的观察组CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋以及NK比值均高于对照组，CD4＋CD25＋、CD133、DDX4水平均低于对照组，且治疗前、治疗后及随访后CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋、NK细胞比值明显升高，CD133、DDX4水平明显降低，免疫功能指标治疗后与随访后相比较无差异。表明DC－CIK细胞免疫治疗能增强患者免疫功能，提高患者抗肿瘤免疫效应，明显降低患者血清肿瘤标志物CD133和DDX4。

DC－CIK细胞免疫治疗能够确保高效免疫反应和有效的肿瘤细胞杀伤能力，其主要机制在于两种细胞通过不同的机制各自识别肿瘤细胞后，释放毒性颗粒裂解肿瘤细胞；同时还能释放抑制肿瘤活性的细胞因子［1314］。本次研究结果还显示，接受DCCIK细胞免疫治疗联合化疗治疗的观察组患者客观缓解率明显提高，在治疗过程中发生骨髓抑制和肝功能损害的比例也明显少于对照组。表明DC－CIK细胞免疫治疗联合化疗能提高晚期卵巢癌的临床治疗效果，并具有较好的安全性。

综上所述，应用DC－CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌患者可提高临床治疗效果，增强患者免疫能力，更大幅度降低血清CD133、DDX4水平，减少不良反应的发生，值得临床探索应用。

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［责任编辑：董 琳］

Effect of DC－CIK immune－cell therapy combined with chemotherapy on treatment of advanced ovarian carcinoma and its impact on level of serum CD133 and DDX4

WANG Lu，YANG Wenjing Department of Obstetrics and Gynecology，Affiliated Hospital of Jianghan University，Hubei，430015

Objective：To evaluate the effect of DC－CIK immune－cell therapy combined with chemotherapy on treatment of advanced ovarian carcinoma and its impact on level of serum CD133and DDX4.Methods：60patients with advanced ovarian carcinoma were randomly divided into experimental group（30cases）and control group（30cases）.Patients in observation group were given DC－CIK immune－cell therapy combined with chemotherapy，and patients in control group were treated only by chemotherapy.The immune function，therapeutic effect，adverse reaction and the change of serum CD133and DDX4level of patients before and after treatment were recorded and compared between the two groups.Results：The objective response rate（ORR）of patients in observation group was 80.00%，which was significant higher than that of patients in control group（50.00%）.After treatment and at six months followed－up，the level of CD3＋，CD3＋CD4＋，CD4＋／CD8＋and NK cell of patients in observation group were significant higher than those of the patients in control group.The level of CD4＋／CD25＋，CD133，DDX4of patients in observation group were significant lower than those of patients in control group.The level of CD3＋CD4＋，CD4＋／CD8＋and NK cell of patients after treatment in observation group had increased，and the level of CD133，DDX4of patients after treatment in observation group had declined（P＜0.05），but there was no statistically significant differences in indicators of immune function of patients in observation group after treatment（P＞0.05）.The incidence of bone marrow suppression and liver damage of patients in experimental group were significant lower than those of patients in control group（P＜0.05）.Conclusion：Patient with advanced ovarian carcinoma treated by DC－CIK immune－cell combined with chemotherapy can improve the clinical therapeutic effect，promote the immune function，decline serum CD133and DDX4level，as well asdecrease the incidence of adverse reactions.It’s worthy of clinical application.

DC－CIK immune－cell therapy；Chemotherapy；Advanced ovarian carcinoma；CD133；DDX4

10.3969／j.issn.1004－8189.2017.05.003

武汉市卫生计生委临床医学科研项目（WX15D59）

2016－12－21

2017－02－12