两种不同原理检测方法测定血清降钙素原的结果比对评估

邓海云　肖鸽飞　李桦　廖燕洁　梁燕霞

【摘要】 目的 以VIDAS Brahms双抗体免疫荧光法检测降钙素原（PCT）结果作为参照， 对Wondfo干式荧光免疫层析法测定PCT结果进行评估。方法 收集72例患者的血清标本， 以双盲方式对上述标本分别采用VIDAS和Wondfo仪器进行PCT定量检测， 再通过统计学分析评估两种方法测定PCT的一致性。结果 两种设备检测的PCT结果高度相关（r=0.987， P<0.01）；回归方程：Y=1.069X-0.021， F检验显示回归方程差异有统计学意义（P<0.05）；对回归方程的两个系数进行t检验显示， 截距（b）则反之差异无统计学意义（P=0.768>0.05）， 而斜率（a）比较差异有统计学意义（P<0.05）。PCT在定值0.23 ng/ml和0.50 ng/ml时的系统误差（SE%）分别为6.90%和2.70%。结论 两种方法检测PCT结果具有高度的相关性， 但二者存在一定的比例误差， Wondfo干式荧光免疫层析法检测PCT可以用于临床病情及疗效监控。

【关键词】 降钙素原；系统误差；相关性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.23.015

Comparison and evaluation of the results of two different methods for the determination of serum procalcitonin DENG Hai-yun， XIAO Ge-fei， LI Ye， et al. Department of Clinical Laboratory， Zhuhai City Maternal and Child Health Care Hospital， Zhuhai 519001， China

【Abstract】 Objective To evaluate procalcitonin （PCT） results determined by Wondfo dry fluorescent immunochromatography， with PCT results determined by VIDAS Brahms double antibody immunofluorescence method as a reference. Methods Serum specimens were collected from 72 patients and their PCT was quantitatively detected by VIDAS and Wondfo devices in a double-blind manner. Statistical analysis was used to assess the consistency of the two methods for the determination of PCT. Results The PCT results of the two devices were highly correlated （r=0.987， P<0.01）； regression equation： Y=1.069X-0.021， F test showed that there was statistically significant difference in regression equation （P<0.05）. The t test of the two coefficients of the regression equation showed that there was no statistically significant difference in the intercept （b） （P=0.768>0.05）， while there was statistically significant difference in slope （a） （P=0.000<0.05）. The systematic errors （SE%） of PCT at 0.23 ng/ml and 0.50 ng/ml were respectively 6.90% and 2.70%. Conclusion The PCT results of the two devices are highly correlated， but there is a certain proportion of systematic errors. Wondfo dry fluorescent immunochromatography for determination of PCT can be used for clinical disease and efficacy monitoring.

【Key words】 Procalcitonin； Systematic errors； Correlation

降鈣素原（procalcitonin， PCT）是降钙素（calcitonin， CT）的激素原， 为甲状腺C细胞分泌所产生。正常生理状况下， 血清PCT水平低到几乎检测不到（<0.1 ng/ml）。而在细菌感染尤其是在脓毒症、休克等全身炎症反应综合征的情况时， 血清PCT水平会显著升高。作为细菌性感染非特异的炎症敏感指标， PCT在临床上得到了广泛应用[1， 2]。目前， 检测PCT的国产设备及试剂大量涌现， 良莠不齐， 检测结果的溯源性有待完善， 其正确度能否满足临床的要求成为人们关注的焦点。本文以VIDAS Brahms PCT检测结果作为参照， 评价国产万孚（Wondfo）PCT检测方法的相关性及偏倚， 从而判断Wondfo PCT检测结果应用于临床的适宜性。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取72例2015年6月～2016年6月就诊于珠海市妇幼保健院的患者， 分别患新生儿肺炎、化脓性扁桃体炎、急性支气管肺炎、感染性腹泻、脓毒血症等炎性疾病。收集患者的高、中、低值的新鲜血清标本72例。

1. 2 仪器与试剂 万孚飞测全自动干式荧光免疫分析仪FS-301及其配套的特定干式试剂（批号21010907）；法国梅里埃VIDAS免疫荧光分析仪及其配套Brahms PCT试剂（批号1004914100）。

1. 3 测定方法 PCT检测试验开始前， 检验人员应该熟悉比对试验方案， 接受厂家工程师培训， 熟练操作仪器并能进行保养和故障排除。在内部质量控制（IQC）或外部质量控制（EQC）均在控的情况下， 严格按照标准操作程序（SOP）文件操作， 采用双盲方式分别采用VIDAS Brahms双抗体免疫荧光法和Wondfo干式荧光免疫层析法进行PCT定量检测。主要方法为：采用干式荧光免疫层析的方法（A组）， 待测物与荧光标记抗体形成免疫复合物， 经过层析， 分别固定在检测区和质控区。LED蓝光激发荧光免疫复合物上的荧光物质发光， 光波被信号收集并转化为电信号， 通过电信号的强弱计算出待测样品中PCT的浓度。应用双抗体夹心荧光免疫法（B组），

形成固相抗PCT抗体-PCT抗原-PCT荧光抗体结合物， 所测得的荧光与标本中PCT抗原的浓度呈正比。计算相关系数r≥0.975为线性相关良好；计算斜率， 截距， 建立直线回归方程， 对两种方法的系统误差进行t检验， 判断系统的可接受性[3]。根据临床使用要求， 将给定的医学决定水平浓度Xc（0.5 ng/ml[4]）代入回归方程， 计算参考方法（Y）与对比方法（X）之间的SE%。SE=|Yc - Xc|， SE%=（SE/Xc）×100%。参照厂家试剂使用说明书， SE%小于T±20%作为临床可接受标准。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。相关性分析采用Pearson相关性分析和直线回归分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 測定结果中最高值为25.51 ng/ml， 最低值为<0.05 ng/ml。

A组和B组进行配对t检验， 差异无统计学意义（P=0.342>0.05）。

2. 2 离群点的检查以（B组检测值-A组检测值）为Y轴， B组检测值为X轴做偏倚图。见图1。 可能存在离群点， 以相对偏倚差均值的4倍（0.472）为可接受限， 故在B组检测值为0.05 ng/ml， A组检测值为0.14 ng/ml为离群点（相对偏倚差为0.474>0.472）， 从数据组中剔除此数值。

图1 两种方法结果差值与参比方法均值的偏倚图

2. 3 相关性分析以B组检测值为X轴， A组检测值为Y轴做散点图。见图2。经Pearson相关性分析， A、B两组数据呈显著性正相关（r=0.987， P<0.01）；经回归分析可得：Y=1.069X-0.021（F=2661.186， P<0.05）；对回归方程的两个系数进行t检验， t（b）=-0.296， t（a）=51.587， P（b）=0.768>0.05， P（a）=0.000<0.05。

图2 两种方法比较的散点图

2. 4 临床可接受性能评价取两个点0.23 ng/ml（<0.5 ng/ml）、

0.5 ng/ml分别代入线性回归方程， 最终计算出SE%=6.90%、2.70%， 均<20%。

3 讨论

临床上细菌感染性疾病极为常见， 而病原学诊断耗时长， 在微生物血培养结果出来前临床上已盲目地使用抗菌药物， 造成了抗菌药物的滥用， 也加重了患者经济负担。尽快找到快捷、有效的实验方法对细菌感染性疾病进行诊断及鉴别诊断， 并准确评价细菌感染性疾病的发生、发展， 有着非常重要的临床应用价值[5]， 尤其对于妇幼特殊人群。

本文采用SPSS18.0统计软件Pearson相关性检验显示：VIDAS Brahms双抗体免疫荧光法和Wondfo 干式荧光免疫层析法检测PCT结果具有的高度相关性（r=0.987， P<0.01）， 说明试验数据分布合理、随机误差可以接受。从散点图和偏倚图中剔除离群值后， 两种方法检测的PCT结果表现出较好的线性， 回归方程为：Y=1.069X-0.021。但回归系数的t检验表明：截距比较差异无统计学意义（P>0.05）， 而斜率比较差异有统计学意义（P<0.05）， 说明两种方法间存在一定的比例误差， 因此要设法找出误差的变化规律， 用修正公式或修正曲线对测量结果进行修正， 以用于临床病情及疗效监控。

据调查， 目前国内三级甲等以上医院的临床实验室已经普及了自动化仪器， 其中进口设备以及试剂所占比例超过 95%， 基本上处于垄断地位， 国产全自动免疫系统处于发展期[6]。

目前临床上PCT的试剂大多为进口仪器及其配套试剂盒， 试剂和耗材价格昂贵， 仪器维护成本高， 依赖性过强， 增加了患者的经济和精神上的负担。然而， 有报告指出， 检测设备方法为免疫层析法， 免疫层析胶体金技术无法直接实现定量和半定量， 而是通过反应着色的比较间接定量有其不足[7]。

但无可厚非的是， 与VIDAS Brahms双抗体免疫荧光法相比， 荧光免疫层析法检测PCT无需昂贵的设备且操作简单、快速和价廉 [8]。Wondfo PCT检测系统属于及时检测（POCT）系统， 具有方便放置、标本用量少、检测快捷等优点， 在一定程度上保证了急诊患者的快速定量检测， 提高了服务质量和降低了医疗费用[9]。因此， 在POCT免疫层析法测定PCT在投入检测前必须按照EP15-A2进行精密度验证试验， 确定其通过精密度验证后再根据EP9进行后续系统性的方法比对实验， 并进行相关调整[10]， 以满足临床需求。

总之， 两种方法检测PCT结果具有高度的相关性， 但二者存在一定的比例误差。Wondfo干式荧光免疫层析法检测PCT可以用于临床病情及疗效监控。

参考文献

[1] Wang MM， Cui SN， Gong YX. Comparison on Serum Levels of Procalcitonin of Children with Viral and Bacterial Infection. Infection International， 2013（3）：123-126.

[2] Karagoz E， Tanoglu A. Clinical importance of serum procalcitonin in ulcerative colitis patients. World Journal of Gastroenterology， 2014， 20（42）：15941-15942.

[3] 楊有业， 张秀明， 余元龙， 等.临床检验方法学评价.北京：人民卫生出版社， 2008：118.

[4] Que TL. Procalcitonin for the clinical laboratory： a review. Pathology， 2007， 39（4）：383.

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[6] 李耀华.国内外免疫自动化发展趋势现状与分析.医药论坛杂志， 2011， 32（14）：197-200.

[7] 吴立翔.胶体金免疫层析技术在临雜病诊断中晒究进展.重庆医学， 2013， 1（42）：91-93.

[8] 郭莉娜， 杨启文， 伊洁， 等. 荧光免疫层析法降钙素原检测试剂盒临床性能评估. 协和医学杂志， 2016， 7（3）：208-211.

[9] 耿伏生. 国产荧光免疫分析仪检测降钙素原在急诊科的应用. 医药论坛杂志， 2014， 35（8）：158-159.

[10] 蔺亚晖， 程军， 于金星， 等. 两种检测方法测定降钙素原的精密度验证及比对研究. 标记免疫分析与临床， 2016， 23（7）：829- 833.

[收稿日期：2017-04-17]