利心丸中粉防己碱HPLC检测方法的建立及其评价

于士婷，赵大庆，尹翌秋，白雪媛*

（1.长春中医药大学，长春 130021；2.长春金赛药业有限责任公司，长春 130117）

利心丸中粉防己碱HPLC检测方法的建立及其评价

于士婷1，赵大庆1，尹翌秋2，白雪媛1*

（1.长春中医药大学，长春 130021；2.长春金赛药业有限责任公司，长春 130117）

目的 建立利心丸中粉防己碱含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定。色谱柱：安捷伦，ZORBAX SB-Aq（5 μm, 4.6 mm×250 mm），流动相：甲醇-乙腈-水-二乙胺（60：20：20：0.08）,检测波长：282 nm，柱温：25 ℃，流速：1.0 mL/min。结果 粉防己碱的线性范围为0.309 6 ～1.857 6 µg（r =0.999 8），平均加样回收率为98.3%（RSD=1.42%）。结论 该方法操作简便易行，专属性强，准确可靠，可用于利心丸的质量控制。

利心丸；粉防己碱；反相高效液相色谱法

利心丸（浓缩水丸）处方来源于《中华人民共和国卫生部药品标准》（中药成方制剂第8册，标准编号为WS3-B-32），由貂心、茯苓、生地黄、天冬、防己、牡丹皮、琥珀及朱砂8味中药组成。具有补心安神的功效，用于风湿性心脏病，心动过速，心律不齐，心力衰竭等而见心血不足之证者。关于利心丸质量控制,原标准过于简单，主要集中在丹皮酚的含量测定及对生地黄、防己和牡丹皮的TLC定性鉴别[1-6]。为了更好的控制利心丸的质量，本文在相关文献研究的基础上，首次对利心丸（浓缩水丸）中的粉防己碱含量采用高效液相色谱法进行了分析，并建立了完整的质量检测方法。粉防己碱是利心丸原料防己中的主要有效成分，具有抗心律失常、抗心肌缺血、抗肿瘤、降压、抗炎等作用[7-11]。结果表明，本方法稳定可靠、方法准确、重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪（安捷伦1 100 ），超声波清洗器（江苏省金坛市荣华仪器制造），电热鼓风干燥箱（PHG-9070A，上海一恒科技有限公司）。

1.2 试药 粉防己碱对照品(北京恒元启天化工技术研究院,供含量测定用,纯度98.41%，批号15041702)。甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.3 样品 利心丸（浓缩水丸）样品为吉林特研药业有限公司生产（批号：20141201，20141202，20141203，20141204，20141205，20141206）。利心丸阴性样品(自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：安捷伦，ZORBAX SB-Aq（5 μm, 4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-乙腈-水-二乙胺（60:20:20:0.08）；检测波长：282 nm；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10 mL。理论板数按粉防己碱峰计算应不低于4 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取粉防己碱对照品10.320 mg，加甲醇溶液制成每1 mL含103.2 µg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取利心丸（浓缩水丸）10 g，粉碎，取粉末（过3号筛）约0.7 g，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，浓缩，用流动相溶解，转移至10 mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取不含防己的处方，按利心丸（浓缩水丸）制备工艺制成不含防己的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 专属性考察 精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各20 mL注入液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件进样测定。结果表明，阴性对照在粉防己碱对照品相应的保留时间附近无干扰峰出现，表明本方法具有良好的专属性。

2.4 线性关系考察 精密吸取2.2.1项下的粉防己碱对照品溶液3、6、9、12、15、18 μL注入液相色谱仪进行测定。以对照品进样量（µg）为横坐标，峰面积值为纵坐标作图，计算回归方程：Y=92.543X-1.866 7，r=0.999 8。其结果表明：粉防己碱进样量在0.309 6～1.857 6 µg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 重复性试验 取同一批次的利心丸（批号：20141201）6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在相同操作条件下，由同一分析人员在较短的间隔时间内照“2.1”项下色谱条件进行6次独立测定。结果见表1。

表1 重复性试验结果（n=6）

2.6 中间精密度试验 取同一批利心丸（批号：20141201）6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在同一实验室不同时间内，由不同分析人员在不同设备上进行6次独立测定。测定结果表明，粉防己碱的平均含量是0.590 mg/g，RSD是1.02%（n=6），该方法中间精密度良好。

2.7 耐用性实验

2.7.1 供试液稳定性及仪器精密度实验 取同一供试品溶液（批号：20141201）适量，按“2.1”项下色谱条件不同时间重复进样测定6次，以测定结果的相对标准偏差（RSD）来反映测定仪器的精密度及供试液的稳定性。结果平均值为0.580 mg/g，RSD为1.27%。由测定结果可知，供试液在8 h内稳定，且仪器精密度良好。

2.7.2 柱温对测定结果的影响 精密称取样品粉末0.70 g，按供试品溶液制备方法制备样品液，按选定色谱条件分别于柱温20、25、30 ℃进样测定，结果表明柱温变化对分离效果及测定结果略有影响，但差异不大。

2.8 加样回收率试验 取6份同批号（批号20141201，粉防己碱含量为0.59 mg/g）的样品约0.7 g，精密称定，置具塞锥形瓶中。分别精密加入5 mL粉防己碱对照品溶液（103.2 μg/mL），混匀后按“2.2.2”项下方法操作制备供试品溶液，测定粉防己碱含量，计算回收率。平均回收率为98.3%，RSD是1.42%（n=6）。

2.9 样品含量测定 取5批利心丸适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2. 1”项下色谱条件进样测定，计算粉防己碱的含量，结果见表2。

表2 利心丸中粉防己碱的含量测定结果（n=5）

3 讨论

3.1 目标成分的选择 关于利心丸的质量研究，文献报道主要集中在丹皮酚的含量测定及对生地黄、防己和牡丹皮的TLC定性鉴别。本文通过系统的比较研究，首次建立粉防己碱的含量检测方法。由于防己诺林碱对照品出峰时间较早，阴性对照在防己诺林碱对照品相应的保留时间附近有干扰峰出现，所以本文只对防己中的粉防己碱进行含量测定。通过对利心丸中粉防己碱的含量分析，不仅补充了原有的质量标准，并且对指导制剂生产和控制质量具有一定的应用价值。

3.2 提取方法的选择 经文献[12-14]查询，考察了不同提取方法（回流提取，超声提取，索氏提取）及不同溶剂（2%盐酸甲醇、甲醇、80%乙醇）对含量的影响。结果，以2%盐酸甲醇溶液加热回流提取的提取率最高。经方法学验证，该方法专属性强，空白对照无干扰，可以作为利心丸中含量测定指标，能够达到控制利心丸质量的目的。

3.3 色谱分离条件的选择 流动相的选择，有文献报道[15-17]应用乙腈-甲醇-水作为流动相可对防己中的粉防己碱进行良好的分离。分别考查了乙腈-甲醇-水-冰醋酸（每100 mL含十二烷基磺酸钠0.41 g）、乙腈-0.01%三乙胺水、甲醇-乙腈-水-二乙胺等不同流动相以及不同比例的流动相，结果表明，甲醇-乙腈-水-二乙胺为流动相分离效果好，分析图谱的分离度、拖尾因子及对称性等条件均达到《中华人民共和国药典》（2015版）中的要求。

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Simultaneous determination of tetrandrine in Lixin pills by HPLC

YU Shiting1, ZHAO Daqing1, YIN Yiqiu2, BAI Xueyuan1*
(1. Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China; 2. GeneScience Pharmaceuticals Co., Ltd. Changchun 130117, China)

Objective To establish the method for the determination of tetrandrinein Lixin pills; Methods HPLC method was used. Column: Agilent, ZORBAX SB-Aq (5 μm, 4.6 mm×250 mm); Solution: methanol-acetonitrilewater-diethylamine (60:20:20:0.08). Detection wavelength: 282 nm, temperature:25 ℃, tate: 1.0 mL/min. Results The linear ranges of tetrandrine were 0.309 6～1.857 6 µg (r=0.999 8). The average recoverys were 98.3% (RSD=1.42%). Conclusion The method is simple, specifc, accurate and reliable, which can be used for the quality control of the Lixin pills.

Lixin pill; tetrandrine; Rp-HPLC

R284.2

A

2095-6258(2017)04-0538-03

2016-11-29）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.04.008

中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金“利心丸的近红外光谱质量控制方法研究”（2012ZL089）。作者简介：于士婷（1994 -），女，硕士研究生，主要从事中药有效成分研究及产品开发。

*通信作者：白雪媛，医学硕士，副研究员，硕士研究生导师，电话-13596460780，电子信箱- baixy1212@163.com