卵巢上皮性肿瘤中CAIX、VEGF的表达及临床意义

李 淼，乔海芝，朱继红，龙 彦

(保定市第一中心医院，河北 保定 071000)

卵巢上皮性肿瘤中CAIX、VEGF的表达及临床意义

李 淼，乔海芝，朱继红，龙 彦

(保定市第一中心医院，河北 保定 071000)

目的 探讨在卵巢上皮性肿瘤中碳酸酐酶IX(CAIX)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况，探讨二者在卵巢恶性上皮性肿瘤发生、发展中的作用及相关性。方法 采用SP免疫组化法检测45例卵巢良性上皮性肿瘤，50例卵巢交界性上皮性肿瘤及61例卵巢恶性上皮性肿瘤中CAIX和VEGF的表达情况。结果 CAIX及VEGF在卵巢恶性上皮性肿瘤中的阳性表达率分别为59.00%和70.50%，明显高于卵巢良性上皮性肿瘤及卵巢交界性上皮性肿瘤组，差异有统计学意义(χ2值分别为18.14、5.83、21.97、7.95，均P<0.05)。CAIX及VEGF在卵巢恶性上皮性肿瘤中的表达与肿瘤分化程度、肿瘤的浸润、转移密切相关(χ2值分别为13.16、12.19、8.50、20.61、26.39、11.24，均P<0.01)，而与肿瘤的类型及肿瘤患者患病年龄状况无关(χ2值分别为0.20、0.79、0.01、0.01，均P>0.05)。结论 CAIX及VEGF在卵巢恶性上皮性肿瘤的表达情况，与肿瘤的分期及预后密切相关，检测CAIX与VEGF可能为临床判断卵巢恶性上皮性肿瘤转移及分期提供依据，成为判断卵巢恶性上皮性肿瘤预后的一个重要指标。

碳酸酐酶IX；血管内皮生长因子；卵巢上皮性肿瘤；免疫组化

卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统恶性肿瘤之一，虽不及宫颈癌的发病率高，但由于早期症状不明显，易被忽视，故多数患者就医时已属晚期，死亡率一直居高不下。卵巢恶性肿瘤早诊断、早治疗可明显改善患者预后。卵巢恶性肿瘤中上皮性卵巢肿瘤占85%～90%。碳酸酐酶(carbonic anhydrase，CA)是新发现的与肿瘤乏氧代谢密切相关的肿瘤抗原，在肿瘤形成中具有一定的作用，可调节细胞增殖，与不同类型恶性肿瘤的发生发展密切相关[1]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)有促进血管内皮细胞增生、分化、迁移和浸润的作用。本实验用免疫组化法检测CAIX及VEGF在卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤、卵巢恶性上皮性肿瘤组织中的蛋白表达水平。分析二者与恶性肿瘤浸润、转移的关系，为卵巢恶性上皮性肿瘤早期诊断及治疗提供帮助。

1材料与方法

1.1标本

收集2009至2015年保定市第一中心医院收治卵巢肿瘤患者病理标本156例，其中卵巢良性上皮性肿瘤45例(浆液性25例、黏液性20例)，卵巢交界性上皮性肿瘤50例(浆液性25例、黏液性25例)，卵巢恶性上皮性肿瘤61例(浆液性25例、黏液性25例、子宫内膜样11例)，所选病例患者年龄18～69岁，平均年龄45.23±4.27岁。其中卵巢恶性上皮性肿瘤患者术前均未接受放疗、化疗、内分泌治疗。每例卵巢恶性上皮性肿瘤的临床分期参照国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO)2000年标准，Ⅰ期10例，Ⅱ期28例，Ⅲ期13例，Ⅳ期10例；根据癌组织分化程度，高分化癌27例，中分化癌19例，低分化癌15例；根据是否转移，已转移31例，无转移30例。

1.2主要试剂

兔抗人碳酸酐酶IX多克隆抗体(carbonic anhydrase IX olyclonal Antibody)、鼠抗人VEGF单克隆抗体、快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物、二氨基联苯胺染色试剂盒(Diaminobenzidine，DAB)试剂盒，以上试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3免疫组化方法

CAIX和VEGF检测均采用免疫组化SP法染色，按试剂盒说明法操作：石蜡切片脱蜡，梯度酒精水化，枸橼酸盐缓冲液(pH=6.0)微波炉抗原修复，免疫性动物血清封闭繁育，加入抗体过夜，加入生物素标记二抗孵育，加入链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液孵育；DAB显色，苏木素复染，上行梯度酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封片，镜下观察结果、记录并照相。用已知的阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)代替一抗作为空白对照。

1.4结果判定

CAIX以胞膜出现棕黄色颗粒为阳性细胞(图1)。VEGF以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞(图2)。每张切片选取5个高倍镜视野(high power field，HPF)，每个高倍视野下随机计数100个细胞，阳性表达者呈黄色至棕黄色颗粒，计算出阳性表达的细胞所占的百分比。按半定量结果判断标准，根据细胞着色评分：棕褐色为3分；棕黄色为2分；淡黄色为1分；无着色或与背景一致淡棕色为0分。按照阳性细胞比例评分：一个视野内着色细胞>75%为4分；51 %～75 %为3分；11 %～50 %为2分；≤10 %为1分；阴性0分。最后两者积分相乘：0～3分为(-)；4～6分弱(+)；7～9分较强(++)；9～12分强(+++)。在结果统计中将(-)计为阴性，(+)、(++)和(+++)计为阳性。

1.5统计学方法

所得数据应用SPSS 13.0软件，CAIX和VEGF在各组中表达的阳性率的比较采用校正χ2检验；P<0.05为有统计学意义。

图1 CAIX阳性表达(S-P，×200)

图2 VEGF阳性表达(S-P，×200)

2结果

2.1 CAIX及VEGF在卵巢上皮性肿瘤中的表达情况

卵巢恶性上皮性肿瘤组织中CAIX及VEGF阳性表达率分别为59.00%和70.50%，明显高于卵巢良性上皮性肿瘤组及卵巢交界性上皮性肿瘤组，差异有统计学意义(均P<0.05)，而卵巢交界性上皮性肿瘤组与卵巢良性上皮性肿瘤组阳性表达率相比也具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 卵巢上皮性肿瘤中CAIX及VEGF阳性表达

Table 1 Positive expressions of CAIX and VEGF in ovarian epithelial neoplasm

注：*为卵巢交界性上皮性肿瘤与卵巢恶性上皮性肿瘤比较；■为卵巢良性上皮性肿瘤与卵巢恶性上皮性肿瘤比较；▲为卵巢良性上皮性肿瘤与卵巢交界性上皮性肿瘤比较。

2.2 CAIX及VEGF与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理指标的关系

CAIX及VEGF在恶性卵巢上皮性肿瘤的表达情况与肿瘤分化程度，有无转移及临床分期相关(均P<0.05)，与肿瘤的组织学类型及患者年龄无关(均P>0.05)，见表2。

表 2 CAIX及VEGF与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理指标的关系

Table 2 Relationship between expressions of CAIX and VEGF and clinical pathology index of ovarian epithelial cancer

(转下表)

(续上表)

3讨论

3.1碳酸酐酶IX与卵巢肿瘤

CAIX是由Pastorek发现的一种主要分布于细胞膜的酸性氨基酸组成的跨膜糖蛋白[2]，与肿瘤的乏氧代谢有关，缺氧状态下被HIF-1α激活，表达上调。CAIX的酶活性主要是催化H2O + CO2→H+ H2CO3反应，通过离子转运，使细胞外pH下降，保持酸性微环境，增加了肿瘤细胞对缺氧的耐受力，有调节并促进细胞增殖的作用[3-4]。研究发现，CAIX在食管鳞癌[5]、肾癌[6]、宫颈癌[7]和乳腺癌[8]等多种肿瘤中高表达，且其过表达与肿瘤的发生、发展及对放化疗的抗拒及不良预后有关[9]。本实验结果显示，CAIX在卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤及卵巢恶性上皮性肿瘤中的阳性表达率分别为17.78%、36.00%和59.02%，三组间比较，均有统计学差异(均P<0.05)。且同时证实CAIX的表达与卵巢恶性上皮性肿瘤的分化程度、是否转移及临床分期密切相关(均P<0.05)，表明CAIX与卵巢恶性上皮性肿瘤的进展与转移关系密切，可能作为判断卵巢恶性上皮性肿瘤预后的有效指标。

3.2血管内皮生长因子与卵巢肿瘤

恶性肿瘤无限制侵袭性生长和转移的基础是肿瘤血管的生成和生长，而血管生成需要VEGF、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β、)等多种生长因子共同作用[10]。VEGF是特异性最强的促血管生长因子，能增强血管的渗透性，特异性刺激血管内皮细胞增殖，促进血管生成。Park等[11]研究表明，VEGF/VEGF-2通路是新生血管的主要信号通路，给予抗VEGF中和抗体后，血管生成过程可被抑制。多项研究表明，VEGF与多种肿瘤的复发转移及预后密切相关[12]。本研究显示，从卵巢良性上皮性肿瘤→交界性→恶性，VEGF 表达水平进行性增高，且三组间比较，差异均具有显著性(均P<0.05)。林梅等[13]报道，VEGF在发生盆腔淋巴结转移的恶性卵巢肿瘤组织中高表达。本研究也发现VEGF表达与恶性卵巢上皮性肿瘤临床分期，组织分级及淋巴结转移相关，说明VEGF过度表达者恶性程度高，更易发生盆腔淋巴结转移，提示肿瘤组织中VEGF水平在一定程度上反映肿瘤的局部浸润活性和转移潜能，与肿瘤的转移、分期及预后密切相关。

综上所述，本实验结果表明，CAIX与VEGF与卵巢恶性上皮性肿瘤的发生、发展密切相关， 特别是与侵袭和转移的关系更为密切， 我们认为临床联合检测CAIX与VEGF或许可以为临床判断卵巢恶性上皮性肿瘤转移及分期提供依据，成为判断卵巢恶性上皮性肿瘤预后的一个重要指标。

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[专业责任编辑：安瑞芳]

Expressions and clinical significance of carbonic anhydrase IX and VEGF in ovarian epithelial tumor

LI Miao, QIAO Hai-zhi, ZHU Ji-hong, LONG Yan

(Baoding First Central Hospital, Hebei Baoding 071000, China)

Objective To study the expressions of carbonic anhydrase IX (CAIX) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in ovarian epithelial tumor and their relationship with tumorigenesis and progression of malignant ovarian epithelial tumor. Methods SP immunohistochemistry method was used to examine the expressions of CAIX and VEGF in 45 cases of benign ovarian epithelial tumor, 50 cases of borderline ovarian epithelial tumor and 61 cases of malignant ovarian epithelial tumor. Results The expressions of CAIX and VEGF in malignant ovarian epithelial tumor was 59.00% and 70.50%, respectively, which were significantly higher than those in benign ovarian epithelial tumor and borderline ovarian epithelial tumor with statistical significance (χ2value was 18.14, 5.83, 21.97 and 7.95, respectively, allP<0.05). The expressions of CAIX and VEGF in malignant ovarian epithelial tumor were closely related with degree of tumor differentiation, invasion and metastasis (χ2value was 13.16, 12.19, 8.50, 20.61, 26.39 and 11.24, respectively, allP<0.01), but they were not correlated with type of tumor and patient’s age (χ2value was 0.20, 0.79, 0.01 and 0.01, respectively, allP>0.05). Conclusion The expressions of CAIX and VEGF in malignant ovarian epithelial tumor are closely related with staging of tumor and prognosis. Detecting CAIX and VEGF may provide some evidence for judging the metastasis and staging of malignant ovarian epithelial tumor and thus becomes an important index for predicting prognosis of malignant ovarian epithelial tumor.

carbonic anhydrase IX (CAIX); vascular endothelial growth factor (VEGF); ovarian epithelial neoplasm; immunohistochemistry

2017-03-05

李 淼(1978-)，女，副主任医师，硕士，主要从事妇科肿瘤研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.07.011

R711.7

A

1673-5293(2017)07-0785-03