灯盏花乙素联合硝普钠对大鼠离体冠状动脉血管环的影响

张永辉，王学昌，陈 晨，刘蓉春，周 莉，杨为民

（1．云南省第三人民医院，云南 昆明 650011；2．昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明 650500）

灯盏花乙素联合硝普钠对大鼠离体冠状动脉血管环的影响

张永辉1，王学昌1，陈 晨2，刘蓉春1，周 莉1，杨为民2

（1．云南省第三人民医院，云南 昆明 650011；2．昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明 650500）

目的 探讨灯盏花乙素（Scutellarin，SCU）对硝普钠（sodiumnitroprusside，SNP）舒张冠状动脉效应的影响。方法 制备冠状动脉血管环，分为对照组，观察组，应用Myograph血管张力分析系统测定血管环的张力变化。对照组采用累积剂量法加入硝普钠；观察组用500 ☒M的灯盏花乙素孵育15 min后，累积剂量法加入硝普钠。研究对照组和观察组对60 mmol/L高钾溶液诱导血管收缩的舒张效应。并制备缺血再灌注血管环模型。结果 在正常血管环上，观察组Emax明显低于对照组（P＜0.05）；在缺血再灌注模型血管环上，观察组EC50显著低于对照组（P＜0.05）。结论 SCU增加了SNP对冠状动脉的舒张效应。

灯盏花乙素；硝普钠；冠状动脉；血管张力

高血压急症是在某些诱因作用下，血压急剧升高，病情急剧恶化，同时伴有急性心肌梗死、急性脑卒中、不稳定性心绞痛等缺血性心脑血管病变[1]，甚至危及患者生命，必须及时处理。临床用药选择，要求起效快、药力强，同时不会对心率、心脏和脑部血流量造成不利影响。硝普钠属于血管扩张药物，作用机制是扩张动脉和静脉的平滑肌，降低周围血管阻力，而且对患者的心肌收缩没有影响，常用于高血压急症迅速控制血压。

灯盏花乙素（Scutellarin，SCU） 是从中药灯盏花中提取的主要成分灯盏花素的活性成分，主要用于心脑血管疾病及高黏血症的治疗[2-3]。目前证据表明[4]，与单用西药相比，联合灯盏花乙素对心血管疾病的治疗有较好的疗效。本文就硝普钠联合灯盏花乙素与单用硝普钠对大鼠离体冠脉血管环张力的影响进行比较，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 实验动物

Sprague-Dawley大鼠，体重200～250 g，雌雄兼用，许可证号：SYXK（陕）2007-003，购自西安交通大学医学院实验动物中心。

1.2 药品和试剂

SNP批号：13755-38-9（Sigma公司）；灯盏花乙素：昆明龙津药业有限公司（99%）；其余试剂为市售国产分析纯。

1.3 设备

SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；HJ-3数显磁力加热搅拌器，金坛市丹瑞仪器厂；AL104电子天平，Mettler Toledo公司；QL-902旋涡振荡混匀器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；HHS112恒温水浴锅，江苏省医疗器械厂；可调节容量移液器，上海科华实验系统有限公司；CQ-120超声波清洗机，上海跃进医用光学器械厂；Motic SMZ168-TL解剖显微镜，麦克奥迪实业集团有限公司；维纳斯眼科剪，江苏苏科医疗器械有限公司；WA3010显微镊，上海医疗器械集团；PH计，Mettler Toledo公司；Wire Myograph System DMT ，Danish Myo Technology Co；Powerlab数据记录和分析系统，澳大利亚Adinstruments公司。

1.4 试验方法

1.4.1 主要试剂及药物的配制

MOPS-PSS液（1L）含：NaCl8.18 g、KCl0.35 g、MOPS0.42 g、Na2HPO4·12H2O 0.43 g、Na2-EDTA·2H2O 0.007g，临用前取Glucose·H2O 1.1 g， MgSO4•7H2O 0.30 g、CaCl2 0.18 g，再加水至1000 mL，预热至37℃，调pH至7.4。

MOPS-KPSS液（1L）含60 mmol钾：NaCl4.95 g、KCl4.48 g、MOPS0.42 g、Na2HPO4•12H2O 0.43 g、Na2-EDTA•2H2O 0.007 g，临用前取Glucose·H2O 1.1 g，MgSO4•7H2O 0.30 g、CaCl2 0.18 g，再加水至1000 mL，预热至37℃，调pH至7.4。

灯盏花乙素（99%），临用前适量双蒸水溶解配置成10 mM溶液。

SNP：临用前以适量双蒸水溶解至100 mM，再依次用双蒸水稀释配制成系列浓度：7 mM、2 mM、700 µM、200 µM、70 µM、20 µM、7 µM、2 µM、1 µM，避光保存。

1.4.2 受试血管环制备

大鼠断头处死后，迅速取出心脏置于4℃MOPS-PSS液中．体式解剖显微镜下，用维纳斯剪小心剥离冠状动脉周围组织，剪成1 mm长度的血管环，制备正常血管环。把未剥离周围组织的冠状动脉放入事先通入N2的无糖MOPSPSS液的密闭容器中，并持续通入N2 1h后取出，剥离周围组织，剪成1 mm长度的血管环，制备缺血再灌注血管环模型。

1.4.3 受试血管环平衡

体式解剖显微镜下，用2根60 m的金属丝穿过血管环，分别挂置于DMT浴槽中，浴槽中盛MOPS-PSS液5 mL，恒温37℃并且持续通通入95%O2和5%CO2的混合气体，以模拟机体内环境。待血管环全部置于DMT上后，调节微调装置，预先给基础张力1 mN．每隔15 min更换浴槽内MOPSPSS工作液，平衡60 min后更换成60 mmol/L高钾溶液，高钾溶液能够使冠状动脉收缩，待张力稳定至一平台期，以MOPS-PSS液充分洗净（4次，每次间隔5 min）至张力恢复基线水平，重复上述实验两次。前后两次高钾刺激后血管收缩幅度相差不超过10%进行下一步实验[5]。

1.4.4 灯盏花乙素对受试血管环的影响

冠状动脉平衡并检测血管环活性合格后，加入10 mM SCU 250 µL，即以浓度500 µM 孵育血管环15 min，加入60 mM K+收缩血管，待收缩达到最大值且平衡后每隔5 min累加浓度法加入受试药硝普钠，对照组加入相应体积的溶媒。

1.5 统计学处理

2 结 果

2.1 灯盏花乙素对大鼠离体正常冠脉和模拟缺血再灌注冠脉的作用

60 mmol/L高钾诱导血管收缩，待收缩达到最大值且平衡后累每隔5 min加入受试药硝普钠，使浓度累积为0.001µM、0.003 µM、0.01 µM、0.03 µM、0.1 µM、0.3 µM、1 µM、3 µM、10 µM，对照组加入相应体积的溶媒。结果观察组Emax（16.75±2.13%）明显低于对照组Emax（50.42±9.75%），由于对照组硝普钠浓度的增加反而血管舒张效应减弱，由于硝普钠舒张效应无法维持，对照组EC50值无法拟合。见表1、表2、图1。

2.2 灯盏花乙素对大鼠缺血再灌注冠状动脉的舒张作用

在模拟缺血再灌注的血管环上，观察组E C 5 0（0.1 3±0.0 3）µM明显低于对照组（0.39±0.20）µM，观察组和对照组Emax分别为（24.83±5.44）%、（44.92±6.46）%，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3、表4、图2

表1 硝普钠对正常SD大鼠离体冠状动脉的舒张效应（±s）

表1 硝普钠对正常SD大鼠离体冠状动脉的舒张效应（±s）

SNP（µM） Contraction（mM K+）vehicle（PSS） SCU（µM）0.001 98.94±0.73 99.41±0.90 0.003 96.81±1.71 97.99±1.80 0.01 92.50±3.30 94.66±3.00 0.03 85.00±4.06 86.50±4.06 0.1 67.37±4.50 70.41±5.62 0.3 48.36±4.39 50.58±4.72 1 37.99±4.39* 34.00±3.55 3 40.43±6.32 26.10±2.77 10 40.47±7.43 22.53±2.31 30 45.10±8.27 20.30±2.07 100 50.42±9.75 16.75±2.13*

表2 两组EC50和Emax的比较（±s）

表2 两组EC50和Emax的比较（±s）

Group EC50（µM） Emax（mM K+）vehicle（PSS） - 37.99±4.39 SCU（500 µM） 0.27±0.17 16.75±2.13

图1 Concentration-response curves of SNP in SD rat normol coronary artery incubated with SCU(500 ☒M).EC50 is compute by SigmaPlot 10.0.

表3 硝普钠对SD大鼠离体缺血再灌注冠状动脉的舒张效应（±s）

表3 硝普钠对SD大鼠离体缺血再灌注冠状动脉的舒张效应（±s）

SNP（µM） Contraction（mM K+）vehicle（PSS） SCU（µM）0.001 100.06±2.33 97.26±2.01 0.003 100.31±3.76 95.88±3.67 0.01 96.84±4.23 94.25±5.01 0.03 82.58±5.84 91.22±5.90 0.1 69.21±5.82 80.21±6.95 0.3 43.48±6.36 59.39±7.27 1 29.79±4.60 43.31±5.99 3 28.39±3.64 33.16±4.77 10 29.26±4.48 30.15±4.33 30 36.05±5.38 28.21±4.42 100 44.92±6.46 24.83±5.44

表4 观察组和对照组EC50和Emax的比较（±s）

表4 观察组和对照组EC50和Emax的比较（±s）

Group EC50（µM） Emax（mM K+）Vehicle（PSS） 0.13±0.03 28.39±3.64 SCU（µM） 0.39±0.20 24.83±5.44

图2 Concentration-response curves of SNP in SD rat ischemiareperfusion coronary artery incubated with SCU(500 ☒M).EC50 is compute by SigmaPlot 10.0.

3 讨 论

灯盏花乙素是灯盏花素的有效成分，研究表明，灯盏花乙素能够扩张微小血管，改善微循环，抗血小板聚集，降低血液粘度[6-7]，对心脑缺血再灌注损伤有保护作用[8]。因此，广泛应用于缺血性心脑血管疾病的治疗。有实验证实灯盏花能够舒张大鼠离体心脏冠状动脉[9]。

灯盏花素通过多种效应发挥内皮保护作用[10]，进而扩张血管。另有研究表明，在常规西药治疗的基础上，加用灯盏花乙素治疗缺血性心血管病效果明显[4，11-12]，可以通过激活JAK2/STAT3信号通路对心肌缺血再灌注损伤起保护作用[13]。

结果显示，灯盏花乙素能够增加硝普钠对高钾诱导的冠状动脉血管环的舒张效应，灯盏花乙素孵育后的血管环Emax为（16.75±2.13）%，明显低于对照组（50.42±9.75）%。在缺血再灌注血管环模型上，灯盏花乙素孵育后的EC50（0.13±0.03）µM明显低于对照组（0.39±0.20）µM。Emax反映了冠脉的舒张程度，Emax数值小，表明对冠脉舒张效应明显。实验中，灯盏花乙素孵育后的血管环，Emax明显低于对照组。灯盏花乙素在扩血管药物基础上可有效舒张离体大鼠冠状动脉，并维持稳定的有效舒张效应。这与灯盏花乙素扩张血管、改善循环作用密切有关。在缺血再灌注动脉环模型上，灯盏花乙素孵育后的EC50明显低于对照组，表明灯盏花乙素对缺血再灌注冠脉有保护作用，与类似文献报道一致[13]。但灯盏花乙素孵育组的Emax与对照组无明显差异，可能是由于缺血再灌注可导致血管内皮功能障碍，而硝普钠可以改善存在功能障碍的血管环的内皮功能[14]，而对功能正常的血管内皮无保护作用。结合实验及相关文献，SCU增强SNP的舒血管效应，可能与保护血管内皮有关，但参与内皮保护的机制尚有待于进一步研究。

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本文编辑：吴宏艳

An experimental study of scutellarin combined with sodium nitroprusside on isolated coronary artery rings in rats

ZHANG Yong-hui1,WANG Xue-chang1,CHEN Chen2,LIU Rong-chun1,ZHOU Li1,YANG Wei-min2
(1.The third people's Hospital of Yunnan Provincet,Yunnan Kunming 650011,China; 2.Yunnan College of pharmacy and Key Laboratory of natural medicine pharmacology of Kunming Medical University,Kunming Medical University,Yunnan Kunming 650500,China)

Objective To determine the effects of SNPon constrictions of isolated coronary artery rings when combined with SCU.Methods Isolated coronary artery rings were mounted in a Multi Myograph system. The control group was treated with cumulative dose of SNP,the observation group was pre-incubation with 500☒M SCUfor 15 minutes. Normol and IR rings were pre-contraction with 60 mmol/L KCl to obtain their dose-response curves.Results The observation group have significant vasodilation with lower Emax on normol arteries,(P＜0.001)and lower EC50 on IR arteries,(P＜0.05).Conclusion SCU increased the vasodilation function of SNP on coronary arteries.

Scutellarin;Sodium nitroprusside;Coronary artery;Vasodilation

R914

B

ISSN.2095-6681.2017.14.28.03