自拟消氮颗粒对肾衰竭大鼠肾组织影响的病理学分析

董淑荣，宋艳丽，王英萍，毕云生，张淑瑜，于燕莉，徐建江

基础医学

自拟消氮颗粒对肾衰竭大鼠肾组织影响的病理学分析

董淑荣，宋艳丽，王英萍，毕云生，张淑瑜，于燕莉，徐建江＊

目的通过病理形态学分析，探讨自拟消氮颗粒对肾衰竭大鼠肾组织的影响。方法用腺嘌呤（200mg/ kg）30 d灌胃法，诱导制备大鼠慢性肾衰竭模型。将模型大鼠随机分为模型组，消氮颗粒高、低剂量（3．956 g/kg、0．989 g/kg）组和阳性对照组（给予尿毒清颗粒2．088 g/kg）每组10只；正常空白组（10只）和模型组给予相同剂量的纯化水，灌胃消氮颗粒治疗28 d，观察其对各组大鼠24 h尿液常规分析、大鼠肾体比及肾衰竭大鼠模型肾病理形态的影响。结果与模型组比较阳性对照组，消氮颗粒高和低剂量组均能改善肾衰竭大鼠尿常规指标，消氮颗粒高、低剂量组与模型组比较，大鼠肾体比差别有统计学意义且非常显著（P＜0．01），肾组织的病理形态有显著改善。结论

消氮颗粒对慢性肾衰竭可有明显的治疗作用。

消氮颗粒；慢性肾衰竭；尿常规检验；肾体比；病理形态学活检

慢性肾功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是由多种因素导致的慢性进行性肾实质性损害，是一种进行性恶化且难于治疗的临床综合征，其病死率较高。虽然目前的医疗水平很高，但因经济状况、肾源不足等多种原因，大部分患者仍然无法接受肾移植及维持性透析的治疗［1］。目前非透析疗法依旧是一种最普遍的治疗方式。消氮颗粒是原济南军区总医院药剂科与肾内科专家根据多年临床治疗肾衰竭的经验进行研究，以中医基础理论为依据，以现代药理学为指导，由大黄、丹参、附子等药物经一定的工艺提取制成的复方制剂。该研究以腺嘌呤制作的CRF大鼠模型［2，3］为对象，观察消氮颗粒对CRF的影响，为临床应用提供理论指导和依据。

1 资料与方法

1.1 实验动物Wistar大鼠60只，SPF级，雄性，体质量（200±20）g［购自山东大学实验动物中心，动物使用许可证号：SCXK（鲁）20090001］。饲养条件：原济南军区总医院实验动物中心清洁级动物房内，全价营养颗粒饲料（购自山东大学实验动物中心）饲养，自由饮水。

1.2 药品腺嘌呤（规格：每瓶100 g，批号：AA13，上海笛柏化学品技术有限公司，使用前加纯化水配成2．5%的混悬液）。无糖型尿毒清颗粒（规格：每袋5 g，批号：20111018，内蒙古康臣药业有限责任公司）。消氮颗粒（规格：每袋6 g，批号：20110612，原济南军区总医院制剂室自制）。

1.3 仪器B600A型医用低速离心机（河北省安新县白洋离心机厂产品）；URISYS－2400型全自动尿液分析仪（德国西门子产品）；C－3020 ZOOM型光学显微镜（日本奥林巴斯产品）。

1.4 方法

1.4.1 造模及分组方法［4］购入Wistar大鼠60只，适应性喂养1w，随机选取10只大鼠作为正常空白对照组，按体质量200mg/kg·d纯化水灌胃，其他大鼠按体质量200mg/kg·d腺嘌呤灌胃。将造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照组（无糖型尿毒清颗粒），消氮颗粒高、低剂量组，每组10只大鼠。剩余10只大鼠留作补备。

1.4.2 给药方法于末次造模24 h后开始，正常对照组与模型组按体质量灌胃纯化水10m l/kg·d，阳性对照组与消氮颗粒高、低剂量组则根据人鼠用药剂量换算公式［5］计算给药剂量为3．956 g/kg·d、0．989 g／kg·d，其中阳性对照组给予无糖型尿毒清颗粒2．088 g/kg·d。使用前加纯化水配制成适宜浓度的溶液进行灌胃，给药1次/d，共28 d。

1.4.3 观察指标第29天禁食不禁水，大鼠置于代谢笼内，在粪尿分离器的侧面连接集尿容器，收集24 h尿液。将收集的尿液进行分离，取上清液进行常规指标检测。第30天处死，取下肾，剔除筋膜和脂肪，挤尽血液，用吸水纸吸干肾表面的液体，称重并计算大鼠肾体比系数：［脏器系数（%）=脏器重量（g）/体重（g）×100%］。取出的肾部分组织放入生理盐水中清洗，固定于10%的中性甲醛溶液中，常规脱水包埋，切片，常规脱蜡至水，HE染色，进行组织病理形态学观察。

2 结果

2.1 尿常规检测各组大鼠尿液清晰度均为清晰，尿胆原（URO）均为3．2μmol/L，葡萄糖（GLU）、胆红素（BIL）、酮体（KET）及亚硝酸盐（NIT）均为阴性，各组大鼠之间无差别。其中正常对照组大鼠尿液蛋白质（PRO）、潜血（BLD）及中性粒细胞（LEU）均为阴性；与正常对照组比较，模型组大鼠尿液PRO为阳性（平均2+），BLD为阳性（平均2+），LEU为阳性（平均2+），且模型组大鼠尿液比重（SG）降低，提示可能出现肾损伤。给药后的阳性对照组和消氮颗粒高、低剂量组大鼠尿液PRO均为阴性，但仍有个别大鼠有微量BLD，LEU为阳性（平均1+）。结果见表1。

表1 24小时尿液常规检测

2.2 各组大鼠肾体比计算各组大鼠肾体比。腺嘌呤可造成大鼠肾功能损伤，致使肾体比增大。模型组与正常对照组比较，大鼠肾体比差别有统计学意义且非常显著（P＜0．01），说明造模可产生明显的肾损伤；阳性对照组和消氮颗粒高、低剂量组与模型组比较，大鼠肾体比差别有统计学意义且非常显著（P＜0．01），说明阳性对照组和消氮颗粒各组在用药后肾的损伤程度有所缓解；消氮颗粒高、低剂量组与阳性对照组比较，大鼠肾体比差别无统计学意义（P＞0．05）。结果见表2。

2.3 肾病理形态学观察结果对肾组织进行病理学形态观察，结果见表3。

正常对照组肾大小正常、颜色暗红，组织学未见显著改变，HE染色观察发现系膜区正常，系膜基质正常，小管间质无炎细胞浸润、无纤维化，肾小管正常，无萎缩，肾血管无异常，肾小球无变化。见图1、2。

表2 各组大鼠肾体比水平对比（x±s，n=10）

模型组肾体积明显缩小，颜色苍白。HE染色与正常对照组比较，系膜增宽，系膜基质明显增多，肾小管萎缩，小管间质可见大量炎细胞浸润，血管壁增厚，即已造成慢性肾衰。见图3、4。

阳性对照组与正常对照组比较，系膜区增宽，系膜细胞增多，肾组织有所改善。与模型组比较，小管间质明显改善，炎细胞减少，肾小管轻度萎缩，肾小球无太大变化，血管壁未见明显改善。见图5、6。

表3 消氮颗粒对CRF的大鼠肾脏组织的影响

高剂量组与正常对照组比较，系膜区轻度增宽，系膜基质增多不明显，系膜细胞微有增多；与模型组比较，小管间质明显改善，炎细胞减少，肾小管轻度萎缩，肾小球无太大变化，血管壁明显改善。见图7、8。

图1 正常对照组（HE，100×）

图2 正常对照组（HE，100×）

图3 模型组（HE，100×）

图4 模型组（HE，100×）

图5 阳性对照组（HE，100×）

图6 阳性对照组（HE，100×）

图7 高剂量组（HE，100×）

图8 高剂量组（HE，100×）

低剂量组与正常对照组比较，系膜区中度增宽，系膜基质中度增多，系膜细胞中度增多；与模型组比较，小管间质有所改善，有炎细胞浸润，血管壁变薄，但不如高剂量组显著。见图9、10。

图9 低剂量组（HE，100×）

图10 低剂量组（HE，100×）

3 讨论

消氮颗粒为笔者所在医院制剂，含有大黄、丹参、制附子和活性炭等7味药，具有驱邪扶正、攻补兼施之效。其中主要药物大黄味苦，性寒，有通腑泄浊，攻下泻毒导滞，推陈致新的功效。现代药理学研究表明，丹参提取物具有修复血管的损伤，减少细胞的凋亡和改善循环的作用。对损伤的肾组织功能，能够有效地改善［6］。附子味辛、甘，性热，具有气雄行散，可升可降，走而不守；常用于肾阳不足，或阳虚水泛，尿少水肿。药用活性炭比表面积大，内孔隙结构发达，能有效地吸附消化道内有害物质、气体和细菌，促进毒素排除。通过肾组织病理学分析，消氮颗粒对于CRF模型大鼠，能够减少炎细胞浸润，抑制系膜细胞增殖，对系膜区、系膜基质及小管间质造成的损伤有显著的修复和保护作用，可有效地延缓慢性肾功能衰竭。

［1］仲思，张东成，苏彦，等.肾康注射液治疗慢性肾衰竭的临床分析［J］.中国现代药物应用，2016，10（1）：174-175.

［2］Yokozawa T，Zheng PD，Oura H，et al.Animal model of adenineinduced chronic renal failure in rats［J］.Nephron，1986，44（3）：230-234.

［3］杜卉莲，傅晓晴.慢性肾衰动物的模型制备及临床应用［J］.中医研究，2005，18（12）：53-57.

［4］梁靓靓，史业东，陈苏宁.扶正排毒汤对腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭模型的影响［J］.天津中医药，2010，27（5）：409-410.

［5］陈奇.中药药理研究方法学［M］.第2版.北京：人民卫生出版社，2006：31.

［6］雷伟，周江桥，王玲珑，等.丹参与CSA对移植肾缺血再灌注损伤防治作用的对比研究［J］.临床外科杂志，2005，13（6）：366-368.

［2017－03－18收稿，2017－04－16修回］

［本文编辑：韩仲琪］

Effect of self-developed Xiaodan granules on kidney tissue of kidney failure rats：pathological analysis

DONG Shu－rong①，SONG Yan－li，WANG Ying－ping，et al．
①Dept．of Pharmacy，the General Hospital of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

Objective To investigate the effects of self－developed Xiaodan granules on renal tissue in rat model of kidney failure by pathological morphology analysis．M ethods The chronic renal failure rat model was induced by adenine（200mg/kg）for 30d irrigation．The model rats were randomly divided into model group，as well group of Xiandan granules high and low dose（3．96g/kg，0．99g/kg），and the positive control group（given urine poison granules 2．09g/kg），n=10 foreach．The normal group（n=10）and model groups were given the same dosage of purified water，Xiaodan granules used in irrigation treatment for 28d，the effects of Xiandan granules on the pathology of kidney，including urine routine exam．，kidney body ratio and kidney failure status in the rat model were observed．Results Compared with the model group，the positive control group，the high and low dose group of Xiandan granules could improve the urine routine exam．index of rat kidney failure，the high and low dose of Xiandan granules which had statistically significant ratio compared with the model group，and the renal body ratio in rats got very significantly improved（P＜0．01）．Wha's more among above groups pathological morphology had significant change．Conclusion Xiandan granules could have obvious therapeutic effect on chronic renal failure．

Xiaodan granules；Chronic renal failure；Urine routines examination；Renal volume ratio；Pathology biopsy

10．14172/j．issn1671－4008．2017．08．024

250031山东济南，原济南军区总医院药剂科（董淑荣，毕云生，张淑瑜，于燕莉，徐建江）；250355山东济南，山东中医药大学药学院（宋艳丽，王英萍）

徐建江，Email：xjj8605＠163．com

R692．5：R－33

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